一种冻干细胞膜碎片复溶液、复溶方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种冻干细胞膜碎片复溶液、复溶方法及应用，所述复溶液包括11～15％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠和0.1～1.5％wt的叠氮钠，其复溶方法是用本申请提供的复溶液对冻干细胞膜碎片进行复溶得到复溶混合物，然后将复溶混合物进行旋转蒸发得到复溶浓缩液。经本申请提供的复溶液复溶后的细胞膜碎片，其膜表面抗原的抗原性得到很好的保护及提高，进而提高了抗原检测的灵敏度，及减少膜抗原的包被使用量，降低检测成本，可用于血液中相关抗体的标准化检测。液中相关抗体的标准化检测。液中相关抗体的标准化检测。

【技术实现步骤摘要】
一种冻干细胞膜碎片复溶液、复溶方法及应用


[0001]本专利技术属于细胞冻干复溶
，具体涉及一种冻干细胞膜碎片复溶液、复溶方法及应用。

技术介绍

[0002]细胞冻干技术是一种细胞保存技术，主要步骤包括将组织细胞、血细胞等细胞在低温下冻结、真空下升华干燥并除去冰晶、升华结束后再解析干燥并除去部分结合水等。经冻干后的细胞可以在室温下避光长期贮存；当要使用时，可以加入复溶液复溶至冻干前状态。目前常用的复溶液包括无机复溶液(例如PB，PBS)，以及有机复溶液(例如HEPES、MOPS)和纯水。
[0003]在现有的血型反定型检测技术中，有利用红细胞膜碎片、基于酶联免疫反应进行检测的方法，其灵敏度高于利用凝集技术检测血型抗原抗体的方法，但存在红细胞膜碎片膜上抗原难以保存的问题。此外，红细胞膜碎片大多为现用现配，制备工艺复杂，会耗费大量的人力在抗原制备上；而将红细胞膜碎片放在低温条件下(4℃)保存，也只是短期保存，其保存天数也不足一周，即使是放在
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20℃下保存，也无法避免随着保存天数增长抗原性下降的问题。针对现有红细胞膜碎片抗原难以保存的问题，现有技术有提出利用细胞冻干技术来保存红细胞膜碎片以延长保存时间的方法，但将经冻干技术长时间保存的红细胞膜碎片用常规试剂复溶后的抗原性难以满足血型检测的需求。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种冻干红细胞膜碎片复溶液及复溶方法，具体技术方案如下。
[0005]一方面，本专利技术提供了一种冻干细胞膜碎片复溶液，包括11～ 15％vol(体积百分比)的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠和0.1～ 1.5％wt(重量/质量百分比)的叠氮钠。
[0006]优选的，所述冻干细胞膜碎片复溶液包括：15％vol的二甲基亚砜、 100mmol/L的氯化钠、0.1％wt的叠氮钠；或者，13％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、0.2％wt的叠氮钠；或者，12％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、1.5％wt的叠氮钠；或者，11％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、1％wt的叠氮钠。
[0007]另一方面，本专利技术还提供了一种冻干细胞膜碎片的复溶方法，所述方法包括采用上述任一项所述的冻干细胞膜碎片复溶液对冻干细胞膜碎片进行复溶，得到复溶混合物，然后将复溶混合物进行旋转蒸发，得到复溶浓缩液，即完成复溶。
[0008]进一步的，所述冻干细胞膜碎片复溶液的使用体积与冻干前的新鲜细胞膜碎片体积相等。
[0009]进一步的，所述旋转蒸发在30～40℃下进行。
[0010]进一步的，所述复溶浓缩液的体积为所述复溶混合物体积的1/4 至1/2；优选的是，所述复溶浓缩液的体积为所述复溶混合物体积的 1/2。
[0011]进一步的，所述冻干细胞膜碎片在冻干前与细胞膜碎片保护液进行混合后再进行
冻干，所述细胞膜碎片保护液包括10mM
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20mM的葡萄糖、6mM
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12mM的乳糖、121mM
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141mM的海藻糖、29mM
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39mM 的NaCl、4.3mM
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5.3mM的KCl、0.115mM
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0.125mM的KH2PO4和 0.6mM
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1.2mM的Na2HPO4。
[0012]优选的，所述细胞膜碎片保护液包括20mM的葡萄糖、10mM的乳糖、140mM的海藻糖、39mM的NaCl、5.3mM的KCl、0.125mM 的KH2PO4和1.2mM的Na2HPO4。
[0013]由上述复溶方法复溶得到的红细胞膜碎片。
[0014]另一方面，本专利技术还提供了上述红细胞膜碎片在血型反定型检测中的应用。
[0015]进一步的，所述红细胞膜碎片用于Elisa平板或斑点杂交检测，所述红细胞膜碎片作为抗原原料被包被于硝酸纤维素膜。
[0016]有益技术效果
[0017]本专利技术提供的冻干细胞膜碎片复溶液及复溶方法，不但能够很好地保护了经冻干的细胞膜碎片表面血型抗原的抗原性，甚至还可以进一步提高其抗原性。此外，本专利技术提供的冻干细胞膜碎片复溶液及复溶方法还可以提高后续血型抗原/抗体检测的灵敏度，及减少膜上血型抗原作为原料包被到硝酸纤维素膜(NC膜)上的使用量，从而降低了血型检测的成本，具备可用于血液中相关抗体的标准化检测的潜力。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0019]图1为不同复溶液复溶的红细胞膜碎片与新鲜红细胞膜碎片抗原性检测保存7天对比的结果；
[0020]图2为水复溶的红细胞膜碎片片与新鲜红细胞膜碎片抗原性检测保存7天对比的结果；
[0021]图3为40℃浓缩温度下将复溶混合物浓缩至不同体积的抗原性检测结果；
[0022]图4为不同浓缩温度下浓缩复溶混合物的抗原性检测结果；(以上各图中横坐标显示标准品抗体的稀释倍数，纵坐标显示OD450 值)。
具体实施方式
[0023]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者装置中还存在另外的相同要素。
[0025]如在本说明书中使用的，术语“大约”，典型地表示为所述值的 +/
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5％，更典型的是所述值的+/
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4％，更典型的是所述值的+/
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3％，更典型的是所述值的+/
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2％，甚至更典型的是所述值的+/
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1％，甚至更典型的是所述值的+/
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0.5％。
[0026]在本说明书中，某些实施方式可能以一种处于某个范围的格式公开。应该理解，这种“处于某个范围”的描述仅仅是为了方便和简洁，且不应该被解释为对所公开范围的僵化限制。因此，范围的描述应该被认为是已经具体地公开了所有可能的子范围以及在此范围内的独立数字值。例如，范围的描述应该被看作已经具体地公本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种冻干细胞膜碎片复溶液，其特征在于，包括：15％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、0.1％wt的叠氮钠；或者，13％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、0.2％wt的叠氮钠；或者，12％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、1.5％wt的叠氮钠；或者，11％vol的二甲基亚砜、100mmol/L的氯化钠、1％wt的叠氮钠。2.一种冻干细胞膜碎片的复溶方法，其特征在于，所述方法包括：使用权利要求1所述的冻干细胞膜碎片复溶液对冻干细胞膜碎片进行复溶，得到复溶混合物；将所述复溶混合物进行旋转蒸发，得到复溶浓缩液，即完成复溶。3.根据权利要求2所述的一种冻干细胞膜碎片的复溶方法，其特征在于，所述冻干细胞膜碎片复溶液的使用体积与冻干前的新鲜细胞膜碎片体积相等。4.根据权利要求2所述的一种冻干细胞膜碎片的复溶方法，其特征在于，所述旋转蒸发在30～40℃下进行。5.根据权利要求2所述的一种冻干细胞膜碎片的复溶方法，其特征在于，所述复溶浓缩液的体积为所述复溶混合物的体积的1/4至1/2。6.根据权利要求5所述的一种冻干细胞膜碎片...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞伟，杜欣军，李萍，杜婷，康青，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：