一种用于治疗肺纤维化的干细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗肺纤维化的干细胞制剂。所述干细胞制剂包括间充质干细胞和纳米制剂，纳米制剂连接在间充质干细胞表面；所述纳米制剂为包载有抗肺纤维化药物的纳米载体。本发明专利技术以间充质干细胞作为递送载体高效递送抗肺纤维化药物达到治疗肺纤维化的目的，间充质干细胞的炎症趋向性使其高效靶向至受损肺部，在肺部病理微环境条件下，间充质干细胞和纳米制剂响应性分离，释放的纳米制剂通过胶原酶C降解纤维化病灶部位过量蓄积的胶原，靶向肺部大量增殖的成纤维细胞并释放抗肺纤维化药物，抑制其激活；间充质干细胞可分化为肺泡上皮细胞，重建肺部结构，最终修复肺功能。最终修复肺功能。最终修复肺功能。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗肺纤维化的干细胞制剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于药物制剂
，具体涉及间充质干细胞负载纳米制剂靶向受损肺部治疗肺纤维化的干细胞制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]肺纤维化是一类起病隐匿、易发于中老年男性的肺部进行性疾病。其发病机制为环境、年龄或基因突变触发肺泡上皮细胞持续性损伤，进而引起成纤维细胞异常增殖，导致细胞外基质过度沉积，纤维化瘢痕取代正常组织，最终导致器官功能异常。临床药物尼达尼布和吡非尼酮通过抑制炎症反应和成纤维细胞激活延缓疾病的进展，但由于缺乏高效的递送策略，仅通过口服给药难以使药物有效突破胶原基质并在病灶部位高效蓄积，最终导致临床疗效不佳。
[0003]因此，亟待设计一种能够突破胶原基质高效递送药物并有效修复受损的肺泡上皮细胞的药物递送系统。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供一种用于治疗肺纤维化的干细胞制剂。
[0005]本专利技术的干细胞制剂包括间充质干细胞和纳米制剂，纳米制剂连接在间充质干细胞表面。
[0006]进一步地，所述间充质干细胞选自脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或皮肤间充质干细胞。间充质干细胞具有炎症趋向性，可靶向受损肺部，实现药物的高效递送。在本专利技术的一个实施例中，采用脂肪间充质干细胞。
[0007]间充质干细胞与纳米制剂的连接方式包括：受体
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配体作用，静电吸附作用，物理穿插，共价结合作用。在本专利技术中，采用A6肽与间充质干细胞上的CD44受体发生生物偶联反应相互连接。
[0008]进一步地，所述纳米制剂为包载有抗肺纤维化药物的纳米载体，纳米载体由磷脂、胆固醇、DSPE
‑
PEG
2000
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MAL、胶原酶、A6肽（KPSSPPEECGPLGIAGQC）和成纤维细胞激活蛋白靶向肽（FAP靶向肽，DRGETGPAC）制成。A6肽可以特异性结合间充质干细胞表面CD44受体，FAP靶向肽可以靶向成纤维细胞。
[0009]进一步地，所述抗肺纤维化药物为抑制成纤维细胞的激活及抑制胶原生成的药物中的一种或几种。选自尼达尼布、吡非尼酮、硼替佐米、西罗莫司、阿那白滞素、氯沙坦、秋水仙碱、干扰素
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γ、脯氨酸
‑4‑
羟化酶抑制剂中的一种或多种。
[0010]进一步地，所述磷脂为大豆磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或合成磷脂（如DPPC、DSPC、DPPG等）中的一种或几种。
[0011]进一步地，所述胶原酶为I型胶原酶、II型胶原酶、III型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶、明胶酶、基质溶素或溶血素。
[0012]进一步地，磷脂和胆固醇的质量比为4：1～8：1，磷脂和DSPE
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PEG
2000
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MAL的质量比
为10：1～3：1，磷脂和胶原酶的质量比为15：1～5：2，胶原酶和A6肽的质量比为30：1～10：1，A6肽和FAP靶向肽的质量比为2：1～1：2。
[0013]本专利技术的另一目的是提供上述干细胞制剂的制备方法。具体包括以下步骤：步骤1，制备包载抗肺纤维化药物的纳米粒；步骤2，将纳米粒依次与胶原酶、A6肽和FAP靶向肽进行孵育，得到纳米制剂；步骤3，将纳米制剂与间充质干细胞共培养，得到所述干细胞制剂。
[0014]本专利技术的目的之三是提供上述干细胞制剂在制备肺纤维化治疗药物中的应用。
[0015]进一步地，所述肺纤维化治疗药物同时适用于青年患者和老年患者。
[0016]本专利技术以间充质干细胞作为递送载体高效递送抗肺纤维化药物达到治疗肺纤维化的目的。间充质干细胞负载的纳米制剂借助炎症趋向能力归巢至纤维化肺部，病理微环境条件下纳米制剂和干细胞响应性分离，纳米制剂的胶原酶能够有效降解纤维化病灶致密的胶原层，高效递送抗肺纤维化药物并抑制成纤维细胞的激活，恢复胶原基质稳态，同时间充质干细胞能调控免疫微环境，分化为肺泡上皮细胞，修复肺功能。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：（1）本专利技术创新利用间充质干细胞作为递送载体，实现抗肺纤维化药物的高效靶向递送，以肺纤维化中大量增殖的成纤维细胞作为治疗靶点，为肺纤维化药物制剂高效递送及逆转治疗提供了一种新的途径。
[0018]（2）本专利技术所采用的间充质干细胞具有强大的免疫调控能力，使肺部病理微环境趋向正常化，同时，间充质干细胞能分化为肺泡上皮细胞，重建肺功能。
附图说明
[0019]图1为本专利技术干细胞制剂制备的流程示意图。
[0020]图2为实施例1中间充质干细胞的流式鉴定图。
[0021]图3为实施例1中纳米制剂的粒径图。
[0022]图4为实施例1中纳米制剂的电位图。
[0023]图5为实施例1中干细胞制剂的扫描电镜图。
[0024]图6为试验例1中干细胞制剂体内程序化治疗过程。
[0025]图7为试验例2中干细胞制剂对青年鼠肺纤维化治疗的效果分析。
[0026]图8为试验例3中干细胞制剂对老年鼠肺纤维化治疗的效果分析。
具体实施方式
[0027]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步详细说明，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
[0028]实施例1一、间充质干细胞的提取和鉴定（一）间充质干细胞的提取1、组织处理：雄性SD大鼠脱颈处死，75%乙醇浸泡5
‑
10 min消毒。无菌手术剪剪取
大鼠附睾脂肪或肾周脂肪，并将其快速剪碎；将组织碎块转移至EP管中，加入等体积PBS（0.1 M，pH7.4），晃匀后加入I型胶原酶，封口，37℃消化15 min；加入FBS终止消化，1600 rpm离心5 min；弃去上清，加2 mL PBS重悬，过200目筛网滤除不溶物，收集滤液，1600 rpm离心5 min；弃去上清，加2 mL红细胞裂解液室温裂解2 min，加入3 mL PBS混匀，1600 rpm离心5 min；弃去上清，加3 mL PBS重悬，1600 rpm离心5 min，此步操作重复2～3次；弃去上清，加5 mL 含10%胎牛血清的DMEM重悬，转移至T25培养瓶中培养。
[0029]2、细胞培养：原代细胞接种后，需置于37℃、含5%二氧化碳的培养箱中进行培养，3天左右间充质干细胞贴壁，镜下呈梭状，此时需更换培养基去除杂细胞；待原代间充质干细胞长至80～90%时，进行传代培养。
[0030]（二）间充质干细胞的鉴定间充质干细胞接种于6孔板中，密度为1
×
105个/孔，培养24 h后，细胞密度达到90%，加入荧光标记的CD29、CD44、CD45和CD90抗体，孵育1 h后，收集细胞，使用流式细胞仪进行检测。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干细胞制剂，其特征在于：包括间充质干细胞和纳米制剂，纳米制剂连接在间充质干细胞表面；所述纳米制剂为包载有抗肺纤维化药物的纳米载体，纳米载体由磷脂、胆固醇、DSPE
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PEG
2000
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MAL、胶原酶、A6肽和成纤维细胞激活蛋白靶向肽制成。2.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于：所述间充质干细胞选自脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或皮肤间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于：所述抗肺纤维化药物为抑制成纤维细胞的激活及抑制胶原生成的药物中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的干细胞制剂，其特征在于：所述抗肺纤维化药物选自尼达尼布、吡非尼酮、硼替佐米、西罗莫司、阿那白滞素、氯沙坦、秋水仙碱、干扰素
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γ、脯氨酸
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羟化酶抑制剂中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于：所述磷脂为大豆磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或合成磷脂中的一种或几种...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜虎林，韩蒙蒙，何兴跃，唐玲，邢磊，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：