本发明专利技术公开了一种VHH抗体或其抗原片段的突变体及其应用。具体涉及一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体包括重链可变区(VHH)，所述重链可变区包括以下根据Kabat编号的互补决定区(CDR)或其突变：氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的CDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的CDR2；和氨基酸序列如SEQ ID NO:11或14所示的CDR3；其中，所述突变为在所述VHH的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列的基础上分别具有5、4、3、2或1个氨基酸的插入、缺失或替换。本发明专利技术制备获得的抗体对包含如SEQ ID NO:1所示的人α链的抗原具有高亲和力结合，序列新颖。序列新颖。
【技术实现步骤摘要】
一种VHH抗体或其抗原片段的突变体及其应用
[0001]本专利技术涉及纳米抗体
，具体而言，涉及一种抗体或其抗原结合片段、以及所述抗体或其抗原结合片段的制备方法和应用。
技术介绍
[0002]垂体前叶激素包括人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)、促卵泡激素CTP融合蛋白(FSH
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CTP)、人促黄体生成素(hLH)、垂体前叶分泌的激素(TSH)，均是由α和β二个单位通过离子键和疏水键结合在一起，其中α亚单位是垂体前叶激素所共有的亚基，而β亚单位则存在差异，在免疫活性上可予区别。
[0003]HCG是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白。血清中的HCG水平检查，可以为早期妊娠的诊断及异位妊娠、葡萄胎、不完全流产、精原细胞睾丸癌等与HCG相关性疾病的诊断、鉴别诊断及判断预后提供临床依据。
[0004]FSH是由脑垂体前叶释放的促性腺激素，对女性的卵泡发育成熟和男性的精子发育具有重要意义。测定血清促卵泡激素对了解垂体内分泌功能，间接了解下丘脑及卵巢的功能状态、预测排卵时间、对不孕和内分泌疾病的诊断治疗都有重要的意义。FSH
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CTP是指FSH的CTP融合蛋白，其作用为延长FSH的体内半衰期。
[0005]hLH是由腺垂体分泌的一种促性腺激素，它的主要作用于性腺，导致卵泡成熟，以及进一步分泌雄激素，排卵以及黄体的生成和维持。在临床上可以用来鉴别闭经的原因，监测排卵期等。排卵期的监测有助于不孕不育的诊断和研究避孕药物的作用机制。
[0006]TSH是垂体前叶分泌的激素之一，其主要功能是控制、调节甲状腺的活动。测定血清(浆)中的促甲状腺激素是诊断和治疗甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症以及研究下丘脑
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垂体
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甲状腺轴的重要指标之一。在诊断甲状腺功能低下和鉴别诊断原发性和继发(下丘脑性或垂体性)甲状腺功能低下等方面是不可缺少的工具。甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症治疗时，其TSH可作为疗效的判断指标。此外还可用于观察垂体TSH的储备功能，并可进一步区别下丘脑和垂体的病变。TSH检测是查明甲状腺功能的初筛试验。游离甲状腺浓度的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显著调整。
[0007]这类激素在血液中的含量低，需要灵敏、高效、稳定性高的检测抗体，以有效检测或者监控血液中激素的含量。现有技术的相关抗体存在结合活性低等缺陷，没有能够高效结合HCG、FSH、hLH、TSH、FSH
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CTP等共有α链的抗体。
[0008]羊驼血清中存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体(heavy
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chainantibody，hcAb)。而单域重链抗体(single domain antibody，sdAb)是指仅由重链抗体可变区(Variable region)组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体(variable domain of heavychain of heavy
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chain antibody，VHH antibody)或纳米抗体(Nanobody，Nb)或单域抗体。与传统抗体相比，单域抗体具有分子量小，稳定性高，水溶性好等优点。
技术实现思路
[0009]本专利技术实际所要解决的技术问题是为了克服现有技术中抗体与诸如FSH、HCG、TSH、hLH、FSH
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CTP等包含α链(SEQ ID NO:1)的异二聚体蛋白结合活性差等缺陷，本专利技术提供了一种抗体或其抗原结合片段以及其制备方法、其在检测上述异二聚体蛋白、或在制备药物中的应用。本专利技术的抗体对包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子(例如FSH、HCG、TSH、hLH、FSH
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CTP等)结合活性较好、灵敏度高，检测例如FSH、HCG、TSH、hLH、FSH
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CTP等包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子时方法便捷、操作简单。
[0010]本专利技术第一方面提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体包括重链可变区(VHH)，其中，所述重链可变区包括以下根据Kabat编号的互补决定区(CDR)或其突变：氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的CDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的CDR2；和，氨基酸序列如SEQ ID NO:11或14所示的CDR3；其中，所述突变为在所述VHH的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列的基础上分别具有5、4、3、2或1个氨基酸的插入、缺失或替换。
[0011]较佳地，所述CDR1的突变为在如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列上具有R2N/G、T3L、F4V/A、S5D、S6V/R/G/N、Y7D/H，和/或A8N/D的氨基酸替换，其氨基酸序列优选如SEQ ID NO:12、15、18、21、22、25任一所示；所述CDR2的突变为在如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列上具有M2T/S/N、W3Q、D6G、和/或S7N的氨基酸替换，其氨基酸序列优选如SEQ ID NO:10、16、19、23、26任一所示；所述CDR3的突变为在如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列上具有L4I/T或缺失、Q5D、E6G/V、和/或E7Q/S/P的氨基酸替换，或为在如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列上具有G9D和/或Y14F的氨基酸替换，其氨基酸序列优选如SEQ ID NO:17、20、24、27任一所示。
[0012]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:9所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:10所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:11所示的CDR3氨基酸序列。
[0013]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:12所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:13所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:14所示的CDR3氨基酸序列。
[0014]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:15所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:16所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:17所示的CDR3氨基酸序列。
[0015]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:18所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:19所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:20所示的CDR3氨基酸序列。
[0016]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:21所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:13所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:14所示的CDR3氨基酸序列。
[0017]在某一较佳实施例中，所述重链可变区包括以下序列：如SEQ ID NO:22所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:23所示的CDR本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种单域抗体，其靶向含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白，所述单域抗体包括重链可变区，其特征在于，所述重链可变区包括以下根据Kabat编号的互补决定区(CDR)：如SEQ ID NO:15所示的CDR1氨基酸序列；如SEQ ID NO:16所示的CDR2氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:17所示的CDR3氨基酸序列。2.如权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述重链可变区还包括羊驼抗体或人抗体的框架区(FWR)。3.如权利要求2所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。4.如权利要求1
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3任一项所述的单域抗体，其特征在于，所述含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白选自FSH、HCG、TSH、FSH
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CTP和hLH中的一种或多种。5.一种分离的核酸，其编码如权利要求1
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4任一项所述的单域抗体。6.一种重组表达载体，其包含如权利要求5所述的分离的核酸。7.如权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体。8.如权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于，所述病毒载体为逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体或腺相关病毒载体。9.一种转化体，其为在宿主细胞中包含如权利要求6
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8任一项所述的重组表达载体。10.如权利要求9所述的转化体，其特征在于，所述宿主细胞为酵母。11.如权利要求10所述的转化体，其特征在于，所述酵母为酿酒酵母、霉菌、细菌或细胞表达系统。12.一种嵌合抗原受体，其包含如权利要求1
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4任一项所述的单域抗体。13.一种基因修饰的细胞，其特征在于，其包含如权利要求12所述的嵌合抗原受体。14.如权利要求13所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为真核细胞。15.如权利要求13所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为分离的人细胞。16.如权利要求13所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为免疫细胞。17.如权利要求16所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述免疫细胞为T细胞或NK细胞。18.如权利要求1
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4任一项所述的单域抗体的制备方法，其包含以下步骤：培养如权利要求9
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11任一项所述的转化体，从培养物中获得所述单域抗体。19.一种抗体药物偶联物，包括抗体部分和偶联部分，所述抗体部分包含如权利要求1
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4任一项所述单域抗体。20.如权利要求19所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述偶联部分包括可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合，所述抗体部分和偶联部分通过化学键或接头进行偶联。21.一种药物组合物，其包含如权利要求1
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4任一项所述单域抗体、...
【专利技术属性】
技术研发人员：王征，徐云霞，郑雷雷，
申请(专利权)人：苏州晟济药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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