一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用，其中，构建方法包括步骤：获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，所述铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；将所述克隆片段连接到载体pEX2B上，得到BIBP表达载体；将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲霉菌株。本发明专利技术构建得到的重组米曲霉菌株在外源添加铁的情况下对铁的富集能力较佳，最多能富集约0.7g/KG的铁，因此可将该重组米曲霉菌株用来富集铁。铁。铁。

【技术实现步骤摘要】
一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别涉及一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]米曲霉是世界公认的食品安全级的好气性丝状真菌，同时也是产复合酶的良好菌种，除了高产蛋白酶外，还能产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶、果胶酶等。由于它的易获得性与安全性，米曲霉被人们广泛地应用在食品行业中，是我国传统酿造食品酱和酱油的主要生产菌种。米曲霉在酿酒生产中常被用作糖化菌。此外，它还是曲酸的生产菌株。米曲霉对不良环境的耐受性极强，因此可广泛分布于自然界，诸如土壤、腐败的有机质、粮食和各种食品当中。
[0003]铁是生物体必需的一种重要营养元素，人体缺铁后会导致贫血，免疫功能下降，疾病感染的概率增大等。缺铁通常主要服用一些无机补铁盐防治，然而越来越多的研究表明，有机铁与无机铁相比具有生物效价高、吸收快，对胃肠道的刺激小的优势。铁结合蛋白具有类似于球壳的高度保守的三维结构，以安全、生物可利用的形式容纳大量铁。所有铁蛋白都容易与Fe(II)相互作用，在铁氧化酶中心催化的反应中诱导其氧化并以矿物形式沉积在空腔中。由于真菌源多肽较动物蛋白源多肽更易获得、更廉价，所以越来越多的关于铁整合肽的研究集中于真菌蛋白源方面。不仅如此铁还可以催化降解纤维素，从而提高生物质能源的利用率。

技术实现思路

[0004]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用，旨在解决现有米曲霉对铁的富集能力较差的问题。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法，其中，包括步骤：
[0007]获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，所述铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；
[0008]将所述克隆片段连接到载体pEX2B上，得到BIBP表达载体；
[0009]将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲霉菌株。
[0010]所述可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法，其中，获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段的步骤包括：
[0011]根据铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列设计对应引物序列，所述引物序列为SEQ ID NO.2
‑
3；
[0012]以血红蛋白DNA为模板，以所述引物序列SEQ ID NO.2
‑
3作为引物，对铁结合蛋白基因BIBP扩增处理，得到铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段。
[0013]所述可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法，其中，将所述克隆片段连接到载体
pEX2B上，得到BIBP表达载体的步骤包括：
[0014]将载体pEX2B用限制性内切酶PmlI和AflII进行线性化，得到线性化载体；
[0015]将所述克隆片段与线性化载体进行重组转化，得到BIBP表达载体。
[0016]一种可富集铁的重组米曲霉菌株，其中，采用本专利技术所述可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法制得。
[0017]一种可富集铁的重组米曲霉菌株的应用，其中，将本专利技术构建方法制得的重组米曲霉菌株用于富集铁。
[0018]有益效果：本专利技术将BIBP表达载体转化至米曲霉中，构建得到可富集铁的重组米曲霉菌株。本专利技术构建的重组米曲霉菌株对铁的富集能力显著升高，且对铁的耐受程度也高，数据表明，重组米曲霉菌株在外源添加铁的情况下，最多能富集约0.7g/KG的铁。
附图说明
[0019]图1为为本专利技术一种可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法流程图。
[0020]图2为实施例1中可富集铁的重组米曲霉菌株(Treated)和对比例1中空白重组米曲霉菌株(Control)进行富铁测试的结果图。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供一种可富集铁的重组米曲霉菌株及其构建方法与应用，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0022]请参阅图1，图1为本专利技术提供的一种可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法流程图，如图所示，其包括步骤：
[0023]S10、获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，所述铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；
[0024]S20、将所述克隆片段连接到载体pEX2B上，得到BIBP表达载体；
[0025]S30、将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲霉菌株。
[0026]具体来讲，本专利技术首先根据铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列设计对应引物序列，所述引物序列为SEQ ID NO.2
‑
3，以血红蛋白DNA为模板，以所述引物序列SEQ ID NO.2
‑
3作为引物，对铁结合蛋白基因BIBP扩增处理，得到铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段；然后将载体pEX2B用限制性内切酶PmlI和AflII进行线性化，得到线性化载体，将所述克隆片段与线性化载体进行重组转化，得到BIBP表达载体；最后利用农杆菌转化法将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲霉菌株。
[0027]本专利技术将BIBP表达载体转化至米曲霉中，构建得到可富集铁的重组米曲霉菌株。本专利技术构建的重组米曲霉菌株对铁的富集能力显著升高，且对铁的耐受程度也高，数据表明，重组米曲霉菌株在外源添加铁的情况下，最多能富集约0.7g/KG的铁，因此，可将本专利技术构建的重组米曲霉菌株用于富集铁。在本专利技术中，所述血红蛋白DNA包含表达人体血红蛋白的富铁核心区域的27个碱基以及576个可表达信号肽和保护结构的碱基组成。
[0028]在一些实施方式中，还提供一种可富集铁的重组米曲霉菌株，其采用本专利技术所述可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法制得。
[0029]在一些实施方式中，还提供一种可富集铁的重组米曲霉菌株的应用，将本专利技术构建方法制得的重组米曲霉菌株用于富集铁。
[0030]下面通过具体实施例对本专利技术做进一步的解释说明：
[0031]实施例1
[0032]步骤1)、获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，所述铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；
[0033]步骤2)、根据铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列设计对应引物序列，所述引物序列为SEQ ID NO.2
‑
3，以提取的人血液中血红蛋白DNA为模板，以所述引物序列SEQ ID NO.2
‑
3作为引物，对铁结合蛋白基因BIBP进行扩增处理，得到铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，将所述克隆片段连接到载体pEX2B中的PmlI和AflII两个克隆位点之间，得到BIBP表达载体；
[0034]步骤3)、利用农杆菌转化法将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤：获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段，所述铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；将所述克隆片段连接到载体pEX2B上，得到BIBP表达载体；将所述BIBP表达载体转化至米曲霉中，得到可富集铁的重组米曲霉菌株。2.根据权利要求1所述可富集铁的重组米曲霉菌株的构建方法，其特征在于，获取铁结合蛋白基因BIBP的克隆片段的步骤包括：根据铁结合蛋白基因BIBP的核苷酸序列设计对应引物序列，所述引物序列为SEQ ID NO.2
‑
3；以提取的人血液中血红蛋白DNA为模板，以所述引物序列SEQ ID NO.2
‑
3作为...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾斌，温云勇，
申请(专利权)人：深圳技术大学，
类型：发明
国别省市：