一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法，大黄粉末与壳聚糖进行机械无定形分散研磨后均匀地分散在壳聚糖表面，并转化为水溶性好的无定形状态，以水作为提取溶剂实现提取。本发明专利技术建立了一种便捷的壳聚糖辅助机械无定形分散提取的方法，同时从大黄样品中提取了芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚五种化合物。与传统方法相比，本发明专利技术以水为提取试剂绿色环保，避免了有机试剂的使用，简单快捷。简单快捷。简单快捷。

【技术实现步骤摘要】
一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法


[0001]本专利技术属于中药中疏水性化合物提取领域，涉及一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法。

技术介绍

[0002]大黄，主要包括药用大黄、唐古特大黄和掌叶大黄，作为一种著名的中草药，常用于治疗便秘、血瘀、肝炎、胰腺炎、高血压、高脂血症、胆囊炎、胃炎、动脉硬化和慢性肾衰竭，由于大黄功能多样，因此许多国家已经有数千年的药用历史。大黄含有多种活性物质成分，其中多糖、鞣质、二蒽醌类、蒽醌类以及茋类的研究报道较多。据报道，大黄中的蒽醌类化合物例如大黄素、大黄酸、芦荟大黄素和大黄酚等，具有抗癌、抗氧化、抗病毒、抗菌和抗动脉粥样硬化等多种生物和药理活性，因此建立可靠的蒽醌含量测定方法对大黄产品的质量控制具有重要意义。目前，建立的蒽醌类化合物的分离方法包括高效液相色谱、超高效液相色谱、高速逆流色谱，胶束电动色谱，超临界流体色谱和毛细管电泳色谱，其中，高效液相色谱结合紫外检测和二极管阵列检测因其高选择性、灵敏度和分析时间短而被广泛应用。
[0003]色谱分析前样品中分析物的提取是建立分析方法的关键步骤。目前提取蒽醌类化合物的方法有热回流提取、超声辅助提取、浸渍提取、索氏提取、超临界流体萃取等。但是，上述方法消耗的有机溶剂量大，提取时间较长，仪器设备复杂。此外，当目标分析物浓度较低且样品基质干扰严重时，这些方法受到限制，导致一系列耗时且依赖溶剂的纯化分离步骤。因此开发一种简便、快捷、绿色的大黄样品提取方法具有重要意义。
[0004]机械无定形分散提取技术是一种被开发应用于生物活性化合物的提取的新型技术，该方法的建立和发展与机械化学和无定形分散技术密切相关，它是指样品于分散剂在球磨机中进行研磨后，在机械力作用下晶型发生改变，转化为无定形分散状态，从而提高材料的水溶性，因此在后续提取步骤中，可以用水代替传统的有机溶剂作为提取溶剂。机械无定形分散技术以其高效、操作温度低、不消耗或少消耗有机溶剂等优点在活性物质的提取方面具有巨大优势。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是旨在建立一种绿色、新型、高效的壳聚糖辅助机械无定形分散提取与超高效液相色谱(UHPLC)联用技术，同时提取和分离大黄中疏水性化合物(芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚)。采用壳聚糖作为分散剂，纯水作为洗脱溶剂，实现高提取效率与环保价值。为验证该专利技术的有效性和实用性，采用单因素试验对工艺过程中相关参数进行优化。结果表明，这种新型方法在用水提取重要中疏水化合物方面具有广泛的应用前景。
[0006]本专利技术方法采用以下具体技术方案：
[0007]步骤(1)、大黄样品预处理：粉碎后过100目筛；
[0008]步骤(2)、目标化合物的提取：
[0009]将一定量的大黄样品和壳聚糖放入球磨罐进行机械无定形分散研磨1～10分钟，得到混合粉末；将混合粉末移出至反应容器中，加入一定体积的水作为提取溶剂，磁力搅拌提取2～10分钟；所述壳聚糖为羧化壳聚糖；所述大黄样品与壳聚糖的质量比为500：200～250。
[0010]作为优选，所述大黄样品与壳聚糖的质量比为500：250；
[0011]作为优选，所述机械无定形分散研磨时间为10分钟；
[0012]作为优选，所述磁力搅拌提取时间为2分钟；
[0013]作为优选，所述大黄样品与提取溶剂的固液比为500毫克：10～15毫升，更优选为500毫克：10毫升。
[0014]本专利技术的优点在于：
[0015]1.与传统有机溶剂法疏水性化合物相比，本专利技术建立的机械无定形分散提取技术具有环保、高效的优点。
[0016]2.本方法应用范围广泛，既可用于多种药材中疏水性化合物的提取和检测，在天然药材中提取中具有广泛的应用潜力。
[0017]此外，本专利技术通过单因素实验对影响萃取效率的壳聚糖种类、壳聚糖用量、研磨时间、提取时间、固液比等一系列参数进行了系统地优化。在最佳条件下进行了日内、日间精密度(RSD％)、重复性和回收率等实验。该专利技术可成功应用于大黄中的疏水性化合物(芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚)的定量分析。
附图说明
[0018]图1为壳聚糖辅助的机械无定形分散提取分离目标化合物的流程图。
[0019]图2为考察不同壳聚糖种类提取效果的柱状图。
[0020]图3为考察不同壳聚糖用量提取效果的柱状图。
[0021]图4为考察不同研磨时间提取效果的柱状图。
[0022]图5为考察不同提取时间提取效果的柱状图。
[0023]图6为考察不同固液比提取效果的柱状图。
[0024]其中图2
‑
图6中，1为芦荟大黄素，2为大黄素，3为大黄酸，4为大黄酚，5为大黄素甲醚。
具体实施方式
[0025]如前所述，鉴于现有技术的不足，本案专利技术人经长期研究和大量实践，提出了本专利技术的技术方案，其主要是依据至少包括：
[0026]大黄粉末与壳聚糖进行机械无定形分散研磨后，均匀地分散在壳聚糖表面，并转化为水溶性好的无定形状态，在加入提取溶剂水后实现提取。即本专利技术提供了一种绿色环保、简单、快速的能实现大黄中疏水性化合物提取的新方法，在天然药材中提取中具有广泛的应用潜力。
[0027]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要
彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0028]本专利技术一种壳聚糖辅助的机械无定形分散的大黄中疏水性化合物的提取、分离方法，具体是：
[0029]用粉碎机将大黄样品粉碎成100目粉末。准确称量500毫克大黄样品和100～300毫克高粘度壳聚糖(0.7～1Pa
·
s)、中粘度壳聚糖(0.25～0.65Pa
·
s)、低粘度壳聚糖(＜0.25Pa
·
s)或羧化壳聚糖放入球磨罐进行机械无定形分散研磨，研磨1～10分钟后，将混合粉末移出至25毫升锥形瓶中，加入10～15毫升的水，磁力搅拌2～10分钟。提取完成后，取上清液以13000转的速度离心5分钟后过滤收集。最后将得到的溶液进行UHPLC分析，通过UHPLC测定目标化合物的峰面积来表明该提取方法的有效性。每个实验重复3次。
[0030]上述过程及原理图如图1所示。
[0031]仪器条件：
[0032]样品使用Agilent 1290UHPLC系统进行分析，用Agilent SB
‑
C18色谱柱(1.8μm粒径，50
×
4.6mm i.d.)进行分离。流动相为0.1％甲酸水溶液(A)和甲醇溶液(B)，流速为0.4mL/min，检测波长设置为320nm。洗脱梯度如下：0
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2min，20
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)、大黄样品粉碎；步骤(2)、目标化合物的提取：将一定量的粉碎后大黄样品和壳聚糖放入球磨罐，进行机械无定形分散研磨1～10分钟得到混合粉末；将混合粉末移出至反应容器中，加入一定体积的水作为提取溶剂，磁力搅拌提取2～10分钟；所述壳聚糖为羧化壳聚糖；所述大黄样品与壳聚糖的质量比为500：200～250。2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖辅助的大黄中疏水性化合物的提取方法，其特征在于，所述大黄样品与壳聚糖的质量比为500：250。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：曹君，朱思晨，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：