CXCL10结合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CXCL10结合蛋白及其用途
[0001]相关申请数据
[0002]本申请要求于2019年12月20日提交的标题为“CXCL10结合蛋白及其用途(XCL10 binding protein and uses Its)”的澳大利亚专利申请号2019904859的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请以电子形式与序列表一起提交。序列表的全部内容通过引用并入本文。


[0005]本公开涉及CXCL10结合蛋白及其用途。

技术介绍

[0006]趋化因子干扰素
‑
γ诱导蛋白(也称为C
‑
X
‑
C基序趋化因子配体10；CXCL10；干扰素诱导蛋白10或IP
‑
10)是CXC趋化因子家族的成员，通过在表达相应趋化因子受体的细胞中产生趋化活性，在白细胞运输中发挥重要作用。
[0007]CXCL10具有激动和拮抗活性，并参与趋化作用、诱导细胞凋亡、调节细胞生长和介导血管抑制作用。CXCL10通过特异性激活受体CXCR3发挥其生物学效应，CXCR3是一种七次跨膜G蛋白偶联受体，主要表达于活化的T淋巴细胞(Th1)、自然杀伤(NK)细胞、炎性树突状细胞、巨噬细胞和B细胞。CXCL10的增殖或抗增殖作用似乎依赖于细胞类型和/或依赖于其受体CXCR3的亚型。此外，例如通过肽精氨酸脱亚胺酶(PAD)对 CXCL10进行脱氨或瓜氨酸化，或通过二肽基肽酶IV(DPP4)等蛋白酶截短NH2末端等翻译后修饰有助于通过产生能够结合CXCR3但不诱导信号传导的显性阴性形式来促进其生物学效应。
[0008]CXCL10与多种人类疾病有关，包括传染病、中枢神经系统疾病、慢性炎症、免疫功能障碍和癌症。
[0009]鉴于其与许多人类疾病的广泛关联，CXCL10一直是一种极具吸引力的生物标志物和靶向治疗的候选者。然而，由于无法区分蛋白质的不同生物学相关形式，所以市售诊断剂的应用受到限制。
[0010]基于前述内容，本领域技术人员将清楚的是，本领域急需能够准确靶向所有形式的 CXCL10以作为潜在生物标志物的化合物(例如，抗体和抗体衍生的蛋白质)。

技术实现思路

[0011]在产生本专利技术时，专利技术人试图生产与CXCL10的生物学相关形式结合的试剂。专利技术人生产了一种与全长(即，生物活性)CXCL10结合的抗体，以及一种与全长CXCL10以及N
‑
末端截短和瓜氨酸化(即，无活性)形式结合的抗体。令人惊讶的是，专利技术人发现检测不同形式的CXCL10，特别是不同形式的CXCL10之间的比率，能够区分良性和恶性病症。专利技术人还发现，不同形式的CXCL10之间的比率能够区分疾病是否存在(良性或恶性)和不存在(即健康个体)。本专利技术人还惊奇地发现，检测不同形式的CXCL10与其他生物标志物(例如，DPP4、CA
‑
125、GM
‑
CSF、IL
‑
6、TNF
‑
RII、HE4和/或IL
‑
8)之间的比率能够区分I期(即早期)癌症或癌前病变和良性病症。
[0012]在一个示例中，本公开提供了一种CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白与全长人CXCL10、N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10结合。
[0013]在上述示例的一个实施方式中，所述CXCL10结合蛋白与全长人CXCL10、N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10的表位NH2
‑
LSRTVRCTCISISNQPVNPRSLE
‑
COOH(SEQ IDNO：26)结合。
[0014]在一个实例中，CXCL10结合蛋白：(i)以50nM或更小的K
D
与全长人CXCL10结合；和/或(ii)以5nM或更小的K
D
与N
‑
末端截短的人CXCL10结合。
[0015]在一个示例中，CXCL10结合蛋白以5nM或更小的K
D
与全长人CXCL10结合或特异性结合。例如，CXCL10结合蛋白以约50nM，或约40nM，或约30nM，或约20nM，或约10nM的K
D
与全长人CXCL10结合或特异性结合。在一个示例中，CXCL10结合蛋白以49nM的K
D
与全长人CXCL10结合或特异性结合。
[0016]在上述示例的一个实施方式中，CXCL10结合蛋白需要表位 NH2
‑
VPLSRTVRCTCISISNQPVNPRSLE
‑
COOH(SEQ ID NO：25)的N
‑
末端缬氨酸和/或脯氨酸与全长人CXCL10结合。
[0017]在一个示例中，CXCL10结合蛋白以5nM或更小的K
D
与N
‑
末端截短的人CXCL10结合或特异性结合。例如，CXCL10结合蛋白以约5nM，或约4nM，或约3nM，或约2nM，或约1nM的K
D
与N
‑
末端截短的人CXCL10结合或特异性结合。在一个示例中，CXCL10 结合蛋白以3nM的K
D
与N
‑
末端截短的人CXCL10结合或特异性结合。
[0018]本公开还提供了一种CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白以50nM或更小的K
D
与全长人CXCL10结合，但不与N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10结合。
[0019]在一个示例中，CXCL10结合蛋白既不能可检测地也不会显著地与N
‑
末端截短的 CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10结合。
[0020]用于确定CXCL10结合蛋白与多肽结合的方法对技术人员来说是显而易见的。例如，多肽被固定在固体或半固体表面上并且CXCL10结合蛋白与固定的多肽接触。然后，例如通过表面等离子共振(SPR)成像来确定该结合。
[0021]在一个示例中，结合水平(例如，由K
D
确定)通过表面等离子共振(SPR)成像测量。
[0022]在一个示例中，本公开的CXCL10结合蛋白包括可变区或抗原结合结构域。
[0023]在一个示例中，结合蛋白选自以下组成的组：
[0024](i)Fv；
[0025](ii)单链Fv片段(scFv)；
[0026](iii)二聚体scFv(di
‑
scFv)；
[0027](iv)单域抗体；
[0028](v)微型抗体；
[0029](vi)双链抗体；
[0030](vii)三链抗体；
[0031](viii)四链抗体；
[0032](ix)Fab；
[0033](x本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种C
‑
X
‑
C基序趋化因子配体10(CXCL10)结合蛋白，其中所述结合蛋白与全长人CXCL10、N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10结合。2.根据权利要求1所述的CXCL10结合蛋白，所述CXCL10结合蛋白与全长人CXCL10、N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10的表位NH2
‑
LSRTVRCTCISISNQPVNPRSLE
‑
COOH(SEQ ID NO：26)结合。3.根据权利要求1或2所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白：(i)以50nM或更小的K
D
与全长人CXCL10；和/或(ii)以50nM或更小的K
D
与N
‑
末端截短的人CXCL10结合。4.一种C
‑
X
‑
C基序趋化因子配体10(CXCL10)结合蛋白，其中所述结合蛋白以50nM或更小的K
D
与全长人CXCL10结合，但不与N
‑
末端截短的CXCL10和瓜氨酸化的CXCL10结合。5.根据权利要求4所述的CXCL10结合蛋白，所述CXCL10结合蛋白需要表位NH2
‑
VPLSRTVRCTCISISNQPVNPRSLE
‑
COOH(SEQ ID NO：25)的N
‑
末端缬氨酸和/或脯氨酸与全长人CXCL10结合。6.根据权利要求1至5中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白包括可变区或抗原结合结构域。7.根据权利要求1至6中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白选自以下组成的组：(i)Fv；(ii)单链Fv片段(scFv)；(iii)二聚体scFv(di
‑
scFv)；(iv)单域抗体；(v)微型抗体；(vi)双链抗体；(vii)三链抗体；(viii)四链抗体；(ix)Fab；(x)F(ab')2；(xi)抗体(xii)抗体模拟物(xiii)仅重链免疫球蛋白；(xiv)T细胞受体；(xv)阿德内丁蛋白；(xvi)抗运载蛋白；(xvii)亲和体；(xviii)阿维默；(xix)设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)；或者(xx)连接至抗体的恒定区、Fc或重链恒定结构域(C
H
)2和/或C
H
3的(i)至(xix)中的一种。8.根据权利要求1至7中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白竞争性地抑
制抗体或其抗原结合片段与CXCL10的结合，所述抗体或其抗原结合片段包括：(i)包含SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区(V
H
)和包含SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区(V
L
)；和/或(ii)包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的V
H
和包含SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的V
L
。9.根据权利要求1至8中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白包括：(i)包含与SEQ ID NO：3所示序列具有至少90％同一性的序列的V
H
和包含与SEQ ID NO：4所示序列具有至少90％同一性的序列的V
L
；或(ii)包含与SEQ ID NO：11所示序列具有至少90％同一性的序列的V
H
和包含与SEQ ID NO：12所示序列具有至少90％同一性的序列的V
L
。10.根据权利要求1至9中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白是抗体或其抗原结合片段，包括：(i)包含SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的V
H
和包含SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的V
L
；(ii)包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的V
H
和包含SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的V
L
。11.根据权利要求1至9中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白是抗体或其抗原结合片段，包括：(i)V
H
，其包含：a)包含SEQ ID NO：3中氨基酸25
‑
34所示序列的CDR1；b)包含SEQ ID NO：3中氨基酸49
‑
65所示序列的CDR2；和c)包含SEQ ID NO：3中氨基酸98
‑
108所示序列的CDR3；和V
L
，其包含：a)包含SEQ ID NO：4中氨基酸23
‑
33所示序列的CDR1；b)包含SEQ ID NO：4中氨基酸49
‑
55所示序列的CDR2；和c)包含SEQ ID NO：4中氨基酸88
‑
96所示序列的CDR3；或(ii)V
H
，其包含：a)包含SEQ ID NO：11中氨基酸25
‑
34所示序列的CDR1；b)包含SEQ ID NO：11中氨基酸49
‑
65所示序列的CDR2；和c)包含SEQ ID NO：11中氨基酸98
‑
108所示序列的CDR3；和V
L
，其包含：a)包含SEQ ID NO：12中氨基酸23
‑
33所示序列的CDR1；b)包含SEQ ID NO：12中氨基酸49
‑
55所示序列的CDR2；和c)包含SEQ ID NO：12中氨基酸88
‑
96所示序列的CDR3。12.根据权利要求1至11中任一项所述的CXCL10结合蛋白，其中所述结合蛋白是抗体或其抗原结合片段，包含：(i)V
H
，其包含：a)包含SEQ ID NO：5所示序列的CDR1；b)包含SEQ ID NO：6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：哈德森医学研究院，
类型：发明
国别省市：