来自体外培养物的生物质的标准化植物提取物、其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及来自巴尔干巨苔(HR)的体外培养物的生物质的标准化植物提取物，其含有生物活性化合物和它们的初级次级代谢物，以重量％计，包含如下：4.0

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】来自体外培养物的生物质的标准化植物提取物、其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及标准化植物提取物，特别是来自体外培养物的生物质的提取物，其中所述植物提取物包含有价值的生物活性化合物(BAC)和次级代谢物，并且可用于制备用于药物、化妆品或食品工业的试剂，以及涉及制备此类提取物的方法。

技术介绍

[0002]自然界中的植物含有各种各样的BAS，并且它们的来源、生长条件、收获时间、提取技术等影响产物的质量。
[0003]栽培的药用植物比野生植物具有许多优点。可以监测它们的生长并且可以在最有利的时间收获它们，同时可以避免接近不合适的植物物种。
[0004]苦苣苔(Haberlea)是单型属，巴尔干巨苔(H.rhodopensis Friv.(Rhodopean Silivryak))，或简称为(HR)，是其仅有的成员。该植物是第三纪的遗迹，分布于中保加利亚和南保加利亚，发现于巴尔干山和视紫红质山、以及东北希腊
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视紫红质山、蒙古山和法拉克罗山。几个世纪以来，巴尔干巨苔传统上用于民族药物学和地方传统医学(1)。
[0005]已知植物提取物分离自HR叶。分离自植物提取物的生物化合物是基本天然成分的来源。除水果和蔬菜外，植物中还发现多酚、糖苷、糖等，并且由于它们的生理功能，它们在人类健康中起重要作用。已知HR的乙醇提取物通过喷雾干燥完整植物，随后在室温下在搅拌下进行3小时乙醇提取，过滤，分离不溶物，随后真空浓缩和冷冻干燥以获得提取物而获得。相同的来源也提供了水性HR提取物的信息，其中将完整植物喷雾干燥，在高压釜中用120℃热水提取20分钟，然后通过在高温下过滤分离不溶物，并冷冻干燥。所得提取物具有抗衰老、抗氧化、亮肤和免疫刺激作用(5)。
[0006]存在通过水醇提取(乙醇/水，未指定的制备方法)获得并在Sephadex LH
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20上通过凝胶过滤色谱法纯化HR提取物的报道，所述提取物含有分离的级分，所述分离的级分特别富含负责苦苣苔提取物的生物活性的苯乙醇苷类－甘露糖苷(myconoside)。在相同的来源中，观察到提取物的有效性，并且报道甘露糖苷刺激皮肤的抗氧化保护，以通过刺激细胞外结构的合成来改进其弹性，并且具有细胞保护和紫外线保护作用，作为皮肤抗老化剂保护其免受氧化，增加其弹性，增强其光泽并且具有潜在的化妆品应用(3)。
[0007]还已知HR叶的70％乙醇提取物的植物化学组成含有一大组主要生物活性化合物，包括次级代谢物，例如：酚酸、类黄酮、脂肪酸、植物甾醇、类胡萝卜素、可溶性脂质、寡糖和多糖、游离糖、多元醇、有机酸(包括甘露糖苷)，具有已证实的抗氧化和保肝作用(1)。
[0008]也可用通过使用含有两种酚糖苷：甘露糖苷和桃花苷(pauciflooside)的液/液萃取、制备和半制备HPLC的组合制备的HR叶的甲醇提取物的植物化学特征的数据。富含甘露糖苷的级分(咖啡酰氧基苯乙醇苷)在植物存活中具有潜在的作用，并且由于在其苯环中存在咖啡酰氧基和两个游离羟基而具有抗氧化活性。在正常生长期间和植物发育的干燥期间在各种HR提取物中发现的主要BAC组和次级代谢物是有机酸、脂肪酸、氨基酸、酚酸和糖
(4)。
[0009]如今，直接从自然生长的物种中获得的HR提取物已经成功地应用于化妆品、顺势疗法和药学中，这是由于它们已证明的抗微生物、抗病毒、抗氧化剂、免疫调节、细胞毒性、抗癌、化学预防、基因保护和辐射保护特性。
[0010]另一方面，作为特别有价值和稀有的地方性物种，HR属于禁止从自然界收集的植物物种。近年来，例如，已经建立了用于HR再生和微繁殖的体外系统，目的是保护这种稀有植物物种的天然群体。已经建立了来自不同地点的HR植物的体外库。相同的来源还描述了再生和微繁殖的有效方法，其中植物物种的种子用70％EtOH灭菌1分钟，用次氯酸盐处理6
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10分钟，用0.1％HgCl2处理3
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5分钟，并用蒸馏水三次冲洗，并将所得无菌HR种子置于经典的无激素MS培养基(以及MS B5、WPM)上，发芽3
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4个月并获得幼苗。将植物簇传代培养1
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1.5个月，得到完全发育的植物的体外系统，在受控温室环境中在非无菌条件下准备在6
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7个月进程中进行转化(2)。
[0011]同时，植物生物技术，特别是植物细胞的体外培养，已经成为用于从植物可持续和连续生产BAC的有希望的工具。已经针对不同于HR的其它植物物种描述了固体和液体营养培养基中植物细胞培养和植物细胞繁殖的原理，以及与植物细胞的建立和培养相关的一般过程。
[0012]根据(6)，已经获得来自蔷薇属的植物细胞培养物的分离提取物，其包含有价值的天然产物(NP)用于美容皮肤和毛发护理，防止老化体征。根据(7)，植物细胞生物质用于从Ajuga repens生产苯丙素，和从齐墩果(Olea europea)、紫丁香(Syringa vulgaris)或Appia citobara生产毛蕊花苷，以及从紫丁香细胞培养物生产毛蕊花苷标准化的提取物，其具有已证实的抗氧化活性、有效治疗痤疮和预防脱发。
[0013]根据(8)，还制备了旨在用于治疗皮肤老化和皮肤炎症的刺阿干(Argania spinosa)的体外培养提取物形式的制剂。
[0014]根据(9)，从青兰(Dracocephalum ruyschiana)的体外未分化植物细胞获得的标准化提取物，其含有具有经证实的抗自由基活性和用于皮肤保护和再生的美容应用的BAC，其中在半固体或液体培养基中生长的青兰的体外繁殖的未分化细胞已经在黑暗中或在光周期下获得14
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16小时，分离细胞生物质，随后用乙醇或乙醇、甘油和水以20:20:60
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50:50:0(v/v)的比例提取生物质，干燥生物质并用相同的提取剂进一步提取。
[0015]迄今为止，还没有从HR体外培养物的生物质中提取BAC和次级代谢物的报道。
[0016]尽管事实上，用于培养植物细胞的一般原理不适用于用于生产目的的大规模细胞增殖，并且需要开发特定的技术过程。为了在体外培养条件下维持植物的体外培养物(分化的或未分化的)，重要的是确定生长调节剂(植物生长素、细胞分裂素和赤霉素)的优化的严格特定的比率，并且为每种细胞系(每种植物物种)建立它。细胞培养条件的变化以及激发剂、前体和吸收基质的使用对于特定生物活性化合物/代谢物的产生是至关重要的，并且对于所用的植物物种和所需的目标化合物是特异性的。
[0017]然而，在体外培养物中合成有价值的BAC和代谢成分是具有许多未知参数的复杂过程。天然成分和次级代谢物在细胞生物质中的积聚是由生物合成、生物转化和生物降解之间的动态平衡引起的。重要的是为完整植物固有的每种成分选择合适和优化的条件－营养培养基和刺激因子。
[0018]通常，从传统提取物获得的天然产物的均匀性不足，并且当与从体外培养物获得的那些相比时，目标治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.来自体外培养生物质的标准化植物提取物，其含有生物活性化合物和它们的初级和次级代谢物，其特征在于，所述提取物通过巴尔干巨苔(HR)的体外培养物产生，并且以重量％计，包含如下：4.0
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6.0的有机酸、0.5
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1.5的脂肪酸、8.0
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12.0的氨基酸、0.5
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1.0的甾醇、3.0
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6.0的游离酚、45
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55的糖和25.0
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35.0的多酚，其中多酚级分中的主要甘露糖苷含量为70
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96％，构成总提取物的18％
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35％。2.根据权利要求1所述的含有标准化提取物的组合物，其特征在于，所述组合物还含有甘油，其中甘露糖苷含量为0.01％
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15.00％。3.用于通过根据权利要求1所述的体外培养物制备标准化植物提取物的方法，其特征在于，将HR外植体用无菌蒸馏水重复洗涤1
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240分钟，用40
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85％乙醇处理10
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190秒，随后在添加或不添加洗涤剂的情况下用2
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10％消毒剂处理10
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60分钟，用无菌蒸馏水重复洗涤并干燥1
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20分钟，在18
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32℃下在黑暗或光/暗光周期中在添加或不添加生长调节剂的pH 5
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6.2的半固体或液体无菌营养培养基上培养所得无菌外植体8
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16小时，以获得85
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100％分化或未分化的培养物2
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5周，随后在18
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32℃下在相同光周期下，在添加或不添加生长调节剂以及添加或不添加还原剂和/或抗氧化剂的半固体无菌营养培养基上独立生长体外培养物15
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45天，以获得所产生的体外株系的总数的5
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30％的所选择的过量生产甘露糖苷的并且形态上稳定的体外培养株系，将其在添加或不添加生长调节剂的新鲜半固体培养基上维持20
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35天，其中将所得高产体外培养物在添加碳源、生长调节剂和/或抗氧化剂的无菌液体营养培养基中培养以用于进一步适应，以获得70
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1...

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：伊诺瓦生物材料有限责任公司，
类型：发明
国别省市：