一种肉制品氯霉素含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种肉制品氯霉素含量的检测方法，其属于氯霉素检测技术的技术领域，本发明专利技术优化了气相色谱法的前处理过程，并提高了该种方法的检测效果，节省了检测时间，并最终确定以水为加标溶剂、C

【技术实现步骤摘要】
一种肉制品氯霉素含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及氯霉素检测技术的
，特别是涉及一种肉制品氯霉素含量的检测方法。

技术介绍

[0002]氯霉素(CAP)是一种广谱抗生素，其可以抑制大多数的厌氧拟杆菌、革兰氏阴、阳性细菌和衣原体等，因而，CAP具有良好的抗菌能力。由于CAP在临床上对人和动物的细菌性疾病均具有很好的治疗效果，而且，其还同时具有价格低廉、药效稳定和良好的抗菌性等优点。所以，CAP在较长的时间中常用于畜牧业的饲料添加剂。但不久即发现CAP中带有硝基，从而导致其具有一定的毒性。个别病人因为使用氯霉素导致其人体骨骼的造血功能受损而患上再生障碍性贫血，因此，该因素限制了CAP在临床上的继续使用。同时，又发现其可以残留在动物性食品中，以对人体造成一定的伤害。所以，许多国家规定在食品动物饲养中禁止使用CAP，并要求对出售的家禽的肉制品进行CAP含量的检测。在许多国家的相关规定中，氯霉素的残留量要求控制在0~10ng/g内。美国和芬兰规定氯霉素不得检出，欧共体规定其应低于10ng/g，而我国则规定为2ng/g。基于此，中国专利CN111458438A公开了一种家禽氯霉素含量的检测方法，其通过对肉制品均浆后的提取、净化、衍生化的前处理操作，并在衍生化处理的过程中更改衍生试剂和催化剂，向第二具塞离心管内依次加入正己烷120
‑
150μL、硅烷化试剂120
‑
150μL，并进行均质处理；将均质处理结束后的第二具塞离心管放入干燥箱内反应，反应结束后对第二具塞离心管内的液体进行氮气吹干处理；以减轻气相色谱法在检测之前对检测液的预处理步骤对检测人员的安全造成威胁。
[0003]然而，上述所公开的一种家禽氯霉素含量的检测方法还存在检出限低、灵敏度低、稳定性差以及回收率低的技术问题。具体的，在上述所公开的一种家禽氯霉素含量的检测方法其主要应用了正己烷；所述正己烷一种低毒的无色液体，而硅烷化试剂又称硅烷保护剂，检测人员做好防护措施，带好口罩穿好防护服即可有效的对上述材料的副作用起到规避作用，因此，减轻了气相色谱法在检测之前需对检测液进行预处理步骤而对检测人员的安全造成威胁的不良情况。此外，上述的检测方法中还使用了铝珠浴，其也能减少微生物对材料的污染。但是，上述所公开的检测方法在实际的应用中，还存在检出限低的、灵敏度低、稳定性差以及回收率低的缺陷，在大规模的批量筛选中容易出现假阳性或假阴性的缺陷，其定量效果不好，从而导致了其检测效率低的情况。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要针对现有技术中肉制品氯霉素检测方法所存在的检测效率低的技术问题，提供一种肉制品氯霉素含量的检测方法。
[0005]一种肉制品氯霉素含量的检测方法，其包括如下步骤：S1：分别将5.00g的肉糜样品与以5mL4%氯化钠及20mL乙酸乙酯配成的提取液一并加入到100mL离心管中，再将肉糜样品与提取液充分混合2min后，用离心机对离心管进行离
心处理；然后，再吸取离心管的上层溶液加入到50mL的梨型瓶中；S2：接着，再以10mL的乙酸乙酯重复步骤S1的提取过程；接着，将梨型瓶置于45℃下水浴旋转蒸发至干；然后，再用1mL的乙酸乙酯洗涤梨型瓶；再将梨型瓶中的液体倒入10mL离心管中，接着，再用4mL的4%氯化钠溶液洗涤梨型瓶，也一并将梨型瓶中的液体倒入离心管中；然后，再将离心管置于氮吹仪下维持50℃的温度，直至将乙酸乙酯层吹干；S3：继续向步骤S2中的提取液中加入4mL正己烷后，再使离心机以6000r/min的速度对离心管离心处理5min；然后，再弃掉正己烷相，并重复此过程一次；S4：继续称取C
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填装到6mL固相萃取柱中，然后，用甲醇、三氯甲烷、甲醇以及水各5mL进行活化，提取液每秒一滴过柱；接着，再用5mL的水淋洗C
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柱，真空吹干C
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小柱后，微氮吹干柱内水分；再用2mL甲醇分两次洗脱C
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柱，将洗脱液收集于10mL的离心管中；S5：接着，将洗脱液在干式氮吹仪50℃下吹干；然后，再加入RegisBSTFA+TMCS,99:1100uL；漩涡30s后在70℃烘箱内密封衍生25min；微氮吹至近干，加入1mL正己烷溶解衍生物，漩涡混合30s，待测；S6：最后，将待测液体使用气相色谱法进行检测。
[0006]具体的，在上述步骤S1中，离心机对离心管以6000r/min的速度处理5min。
[0007]具体的，在步骤S3中，往提取液中加入4mL的正己烷后，先漩涡混合30s，再使用离心机对离心管进行离心处理。
[0008]具体的，在步骤S4中，提取液滴过柱后，再用2mL的水洗涤离心管并将管内的液体加入到固相萃取柱中。
[0009]具体的，在步骤S6中，气相色谱法检测的条件为：进样量：1uL；分流方式：不分流；载气：99.999%纯度的氮气，。
[0010]进一步的，气相色谱法的进样口温度设置为250℃；检测器温度设置为300℃。
[0011]进一步的，柱阶段升温程序设置为150℃保持1min，并以25℃/min升温至270℃保持12min；其柱流量设置为1mL/min。
[0012]综上所述，本专利技术一种肉制品氯霉素含量的检测方法具有检出限低、回收率高以及稳定性好的优点，其检出限为1.96ng/g，RSD值为1.58%至5.48%，回收率为90.93%至105.25%。具体的，本专利技术还优化了气相色谱法的前处理过程，并提高了该种方法的检测效果，节省了检测时间，并最终确定以水为加标溶剂、C
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为净化萃取柱、以5mL甲醇、5mL氯仿、5mL甲醇、5mL水为萃取柱活化方法、2
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2mL甲醇为洗脱剂、烘箱为衍生环境、70℃为衍生温度、25min为衍生时间。本专利技术一种肉制品氯霉素含量的检测方法解决了现有技术中肉制品氯霉素检测方法所存在的检测效率低的技术问题。
附图说明
[0013]图1为本专利技术一种肉制品氯霉素含量的检测方法所使用的固相萃取方法示意图。
具体实施方式
[0014]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不
违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。
[0015]在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肉制品氯霉素含量的检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：S1：分别将5.00g的肉糜样品与以5mL4%氯化钠及20mL乙酸乙酯配成的提取液一并加入到100mL离心管中，再将肉糜样品与提取液充分混合2min后，用离心机对离心管进行离心处理；然后，再吸取离心管的上层溶液加入到50mL的梨型瓶中；S2：接着，再以10mL的乙酸乙酯重复步骤S1的提取过程；接着，将梨型瓶置于45℃下水浴旋转蒸发至干；然后，再用1mL的乙酸乙酯洗涤梨型瓶；再将梨型瓶中的液体倒入10mL离心管中，接着，再用4mL的4%氯化钠溶液洗涤梨型瓶，也一并将梨型瓶中的液体倒入离心管中；然后，再将离心管置于氮吹仪下维持50℃的温度，直至将乙酸乙酯层吹干；S3：继续向步骤S2中的提取液中加入4mL正己烷后，再使离心机以6000r/min的速度对离心管离心处理5min；然后，再弃掉正己烷相，并重复此过程一次；S4：继续称取C
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填装到6mL固相萃取柱中，然后，用甲醇、三氯甲烷、甲醇以及水各5mL进行活化，提取液每秒一滴过柱；接着，再用5mL的水淋洗C
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柱，真空吹干C
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小柱后，微氮吹干柱内水分；再用2mL甲醇分两次洗脱C
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柱，将洗脱液收集于10mL的离心管中；S5：接着，将洗脱液在干式氮吹仪50℃下...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦永，黄路，
申请(专利权)人：广东方舟检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：