抗纤维化剂及具有抗纤维化作用的细胞外囊泡的制造方法技术

本发明专利技术的课题在于提供一种由治疗效果高的细胞外囊泡的群体构成的治疗用制剂、尤其抗纤维化剂。本发明专利技术涉及一种抗纤维化剂以及作为这种抗纤维化剂的细胞外囊泡的制造方法，所述抗纤维化剂将来源于间充质干细胞的细胞外囊泡作为有效成分，所述细胞外囊泡通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得，或/及所述细胞外囊泡来源于通过成纤维细胞生长因子施加了刺激的间充质干细胞。长因子施加了刺激的间充质干细胞。长因子施加了刺激的间充质干细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗纤维化剂及具有抗纤维化作用的细胞外囊泡的制造方法


[0001]本专利技术涉及一种使用了间充质干细胞来源细胞外囊泡的抗纤维化剂。

技术介绍

[0002]认为来源于细胞的作为由脂质二重膜构成的小型膜囊泡的细胞外囊泡(Extracellular vesicle)担负经由内含的mRNA或microRNA等核酸或者蛋白质的搬运进行的细胞间信息传递(非专利文献1)。
[0003]并且，间充质干细胞(Mesenchymal stem cell，以下有时简称为“MSC”)为来源于中胚层组织的成体干细胞。MSC能够从脂肪、骨髓及脐带基质等中分离，但认为均具有粘接性、CD105、CD73、CD90阳性、CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA
‑
Class II(DR)阴性、分化成骨、脂肪、软骨的能力等共同点。
[0004]近年来，启示了细胞外囊泡与各种疾病有关的可能性。并且，报告有通过超离心法从来源于间充质干细胞的细胞外囊泡获取的细胞外囊泡具有抗纤维化作用(抗纤维化效果)(非专利文献2)。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：国际公开WO2016/088689
[0008]非专利文献
[0009]非专利文献1：Mathieu M,Martin
‑
Jaular L,Lavieu G,Thery C(2019)Specificities of secretion and uptake of exosomes and other extracellular vesicles for cell
‑
to
‑
cell communication.Nat Cell Biol,21(1)：9
‑
17
[0010]非专利文献2：Ferruson et al.(2018)The microRNA regulation landscape of MSC
‑
developed exosomes：a systems view.Scientific Rep，8(1)：1419

技术实现思路

[0011]专利技术要解决的技术课题
[0012]然而，本专利技术人对通过超离心法从来源于间充质干细胞的细胞外囊泡获取的细胞外囊泡的抗纤维化作用进行了验证的结果，得知该作用较弱，且不足以进行产业利用。鉴于所述情况，本专利技术的课题在于提供一种由治疗效果更高的细胞外囊泡的群体构成的治疗用制剂、尤其抗纤维化剂。
[0013]用于解决技术课题的手段
[0014]本专利技术人等为了解决上述课题，对通过各种细胞外囊泡的获取方法选择性回收的细胞外囊泡进行深入研究的结果，发现通过利用了对磷脂酰丝氨酸(PS)具有亲和性的物质的方法(PS亲和法)获取的具有PS阳性等特点的细胞外囊泡的群体或/及来源于通过成纤维细胞生长因子施加了刺激的间充质干细胞的细胞外囊泡的群体作为抗纤维化剂具有高效果，从而完成了本专利技术。
[0015]即本专利技术中，其基本方式为如下：
[0016](1)一种抗纤维化剂，将来源于间充质干细胞的细胞外囊泡作为有效成分，其中，细胞外囊泡通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得，或/及细胞外囊泡来源于通过成纤维细胞生长因子施加了刺激的间充质干细胞；
[0017](2)根据上述(1)所述的抗纤维化剂，其中，所述间充质干细胞为来源于iPS细胞的细胞、或者来源于选自包含脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜及胎盘的组中的1种以上的组织的细胞；
[0018](3)根据上述(1)或(2)所述的抗纤维化剂，其中，所述间充质干细胞通过转化生长因子β施加了刺激；
[0019](4)根据上述(3)所述的抗纤维化剂，其中，转化生长因子β为TGFβ1或TGFβ3；
[0020](5)根据上述(1)～(4)中任一个所述的抗纤维化剂，其中，所述细胞外囊泡通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得；
[0021](6)根据上述(5)所述的抗纤维化剂，对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质为Tim蛋白质；
[0022](7)根据上述(6)所述的抗纤维化剂，其中，Tim蛋白质为选自Tim4蛋白质、Tim3蛋白质及Tim1蛋白质的蛋白质；
[0023](8)根据上述(1)或(2)所述的抗纤维化剂，其中，所述细胞外囊泡来源于通过转化生长因子β施加了刺激的间充质干细胞，并且通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得。
[0024]并且本专利技术也是作为这种抗纤维化剂的细胞外囊泡的制造方法，具体而言如下：
[0025](9)一种具有抗纤维化作用的细胞外囊泡的制造方法，其包括：通过使用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法从间充质干细胞来源的细胞外囊泡获得细胞外囊泡的工序；或/及从通过转化生长因子β施加了刺激的间充质干细胞获得细胞外囊泡的工序；
[0026](10)根据上述(9)所述的细胞外囊泡的制造方法，所述方法包括通过使用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法从间充质干细胞来源的细胞外囊泡获得细胞外囊泡的工序；
[0027](11)根据上述(10)所述的细胞外囊泡的制造方法，其中，对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质为Tim蛋白质；
[0028](12)根据上述(11)所述的细胞外囊泡的制造方法，其中，Tim蛋白质为选自Tim4蛋白质、Tim3蛋白质及Tim1蛋白质的蛋白质；
[0029](13)根据上述(9)～(12)所述的细胞外囊泡的制造方法，所述方法包括从通过转化生长因子β施加了刺激的间充质干细胞获得细胞外囊泡的工序。
[0030]专利技术效果
[0031]根据本专利技术，提供一种将来自间充质干细胞的具有抗纤维化作用的细胞外囊泡作为有效成分的抗纤维化剂。关于本专利技术所提供的抗纤维化剂，由于具有作为组织的纤维化所涉及的因子例如纤维症相关基因的Collagen(胶原蛋白)III、Collagen(胶原蛋白)V、α
‑
SMA胶原蛋白的产生调整作用，因此通过抑制活体组织或器官的纤维化的进行，能够实现陷入功能障碍或功能不全的活体组织及器官的功能再生。
附图说明
[0032]图1是表示通过NTA法(纳米粒子追踪分析法)分析了通过PS亲和法及超离心分离法所获取的MSC来源细胞外囊泡的粒径分布的结果的图。
[0033]图2是表示通过蛋白质印迹法检测了通过PS亲和法及超离心分离法所获取的MSC来源细胞外囊泡的CD9、CD63及CD81的结果的图。
[0034]图3是表示定量PCR中所使用的引物的图。
[0035]图4是表示以Collagen(胶原蛋白)III的mRNA显现量为指标评价了骨髓MSC来源细胞外囊泡的抗纤维化作用的结果的图。
[0036]图5是表示以Collagen(胶原蛋白)V的mRNA显现量为指标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗纤维化剂，将来源于间充质干细胞的细胞外囊泡作为有效成分，其中，细胞外囊泡通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得。2.根据权利要求1所述的抗纤维化剂，其中，所述间充质干细胞为来源于iPS细胞的细胞、或者来源于选自由脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜及胎盘组成的组中的1种以上的组织的细胞。3.根据权利要求1所述的抗纤维化剂，其中，所述细胞外囊泡通过利用对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质的方法而获得。4.根据权利要求3所述的抗纤维化剂，其中，对磷脂酰丝氨酸具有亲和性的物质为Tim蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：山根昌之，石止贵将，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：