一种人体蠕形螨体外培养原液及其培养液和复合培养液制造技术

本发明专利技术公开了一种人体蠕形螨体外培养原液，其原料按质量百分比包括：甘油三酯40

【技术实现步骤摘要】
一种人体蠕形螨体外培养原液及其培养液和复合培养液


[0001]本专利技术涉及蠕形螨培养
，尤其涉及一种人体蠕形螨体外培养原液，及一种人体蠕形螨体外培养液，及一种人体蠕形螨复合培养液及其制备方法，及一种人体蠕形螨的培养方法。

技术介绍

[0002]蠕形螨(demodicidmite)是一类在人体寄生的螨类，主要有毛囊蠕形螨(Demodexfolliculorum)和皮脂蠕形螨(Demodexbrevis)两种。以往认为蠕形螨是不致病或低致病性的，因为绝大多数人体蠕形螨感染者无自觉症状，表现为无症状的带虫者，或仅有轻微痒感或烧灼感。所表现的临床症状因患者的免疫状态、营养状况、寄生的虫种及感染度等因素有关。
[0003]这些年研究发现，人体蠕形螨成虫具有坚硬的螯肢、须肢、带刺的4对足等，它们在皮肤内活动时对上皮细胞和腺细胞造成机械性破坏，使毛囊、皮脂腺失去正常的结构和功能，引起毛囊扩张，上皮变性。当寄生虫体较多时，可引起角化过度或角化不全，皮脂腺分泌阻塞及真皮层毛细血管增生并扩张等病变；虫体的机械刺激和其分泌物、代谢物的化学刺激可引起皮肤组织的炎症反应，导致宿主局部皮肤的非细菌性炎症反应。此外，虫体代谢物可引起变态反应，虫体的进出活动携带其他病原生物进入毛囊或皮脂腺可致继发感染，引起毛囊周围细胞浸润，纤维组织增生。临床上常见的症状有患处皮肤轻度潮红和异常油腻，继而出现弥漫性潮红、充血，继发性红斑湿疹或散在的针尖至粟粒大小不等的红色痤疮状丘疹、脓疮、结痂及脱屑，皮脂异常渗出、毛囊口扩大，表面粗糙，皮肤有瘙痒感及烧灼感等。此外，酒渣鼻、毛囊炎、痤疮、脂溢性皮炎和睑缘炎等皮肤病患者的蠕形螨感染率及感染度均显著高于健康人及一般皮肤病患者，表明这些现象可能与蠕形螨的感染有关。
[0004]正因为蠕形螨的致病性越来越被肯定，所以对于蠕形螨病的防治也成为研究热点，特别是对杀蠕形螨具有抑杀作用的药物(或日化品)这些年大量出现涌现。我们在确定一种药物(或日化品)是否对蠕形螨具有杀灭作用时，要进行体外实验。即通过挤压刮拭法或者透明胶纸法将蠕形螨采集到后，加入待测样品，计算杀螨率。但是蠕形螨一旦离开人体后很快就会自行死亡，这给蠕形螨药物(或日化品)体外杀螨效果的验证带来很大困难，因为无法知道是因为药物作用的死亡还是因为蠕形螨自行的死亡。
[0005]为了解决这个问题，目前发现有技术利用培养细胞的方法对蠕形螨进行培养，即用RPMI
‑
1640细胞培养液(含胎牛血清)作为营养液培养蠕形螨，该方法虽然延长了蠕形螨的体外存活时间，26℃条件下，蠕形螨的平均存活时间在96小时左右，存活时间还不够理想，无法满足体外试验要求。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种人体蠕形螨体外培养原液，及一种人体蠕形螨体外培养液，及一种人体蠕形螨复合培养液及其制备方法，及
一种人体蠕形螨的培养方法。
[0007]一种人体蠕形螨体外培养原液，其原料按质量百分比包括：甘油三酯40
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50％，胆固醇22
‑
26％，角鲨烯16
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20％，甘油二酯8
‑
12％，蜡脂1
‑
3％，余量为吐温
‑
80。
[0008]基于蠕形螨以人体的皮脂分泌物为食物，因此本专利技术采用特定比例的甘油三酯、胆固醇、角鲨烯、甘油二酯、蜡脂配伍，可明显延长蠕形螨的体外存活时间。但角鲨烯是由6个异戊二烯构成的无环三萜烯，分子中的六个双键俱为反式，是一种非环三萜结构，由于其含六个双键，极不稳定，容易氧化，因此形成的皮脂液中由于角鲨烯易氧化，导致配比无法满足蠕形螨的营养需求。
[0009]一种人体蠕形螨体外培养液，包括：上述人体蠕形螨体外培养原液和生理盐水，上述人体蠕形螨体外培养原液和生理盐水的体积比为0.5
‑
1.5：100。
[0010]优选地，还包括：增稳角鲨烯，增稳角鲨烯与上述人体蠕形螨体外培养液的体积比为0.4
‑
0.8：0.5
‑
1.5。
[0011]优选地，增稳角鲨烯采用如下具体步骤制取：将1,2
‑
丙二醇加入生理盐水混合均匀得到预混料；将吐温
‑
80、胶原蛋白加入角鲨烯中搅拌均匀，然后滴加至预制料中得到增稳角鲨烯。
[0012]增稳角鲨烯中生理盐水的用量为适量，该部分生理盐水应纳入人体蠕形螨体外培养液中所用生理盐水总量。
[0013]本专利技术采用低能乳化法，将角鲨烯包覆在水相中并形成纳米乳结构，不仅可有效隔绝与氧气接触，而且配合人体蠕形螨体外培养原液制备人体蠕形螨体外培养液，即使分散在体系中的角鲨烯全部被氧化，增稳角鲨烯也能缓慢释放其中的角鲨烯以补充该部分氧化的角鲨烯。本专利技术通过控制人体蠕形螨体外培养原液与增稳角鲨烯比例，可有效保证人体蠕形螨体外培养液中有效角鲨烯的含量，保证蠕形螨的正常机体活力，有效延长蠕形螨的体外存活时间；而在增稳角鲨烯制备过程中，采用胶原蛋白与角鲨烯结合并缓释至体系中，在保证角鲨烯稳定性的前提下，更易于被蠕形螨吸食，增强蠕形螨活力。
[0014]优选地，1,2
‑
丙二醇、吐温
‑
80、胶原蛋白、角鲨烯的质量比为1
‑
5：1
‑
2：1
‑
3：20
‑
25。
[0015]一种人体蠕形螨复合培养液，包括：上述人体蠕形螨体外培养液和改良RPMI
‑
1640培养液，上述人体蠕形螨体外培养液和改良RPMI
‑
1640培养液的体积比为10：1
‑
6；改良RPMI
‑
1640培养液包括：RPMI
‑
1640基础培养液5
‑
15g/L，胎牛血清1
‑
5g/L，葡萄糖1
‑
5g/L，白蛋白5
‑
15g/L，L
‑
谷氨酰胺0.1
‑
0.5g/L，岩藻多糖0.1
‑
0.2g/L，HEPES2
‑
10g/L，亚硒酸钠0.1
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0.2g/L，维生素C1
‑
2g/L，青霉素0.01
‑
0.1g/L，ATP6
‑
15mg/L，碳酸氢钠1
‑
5g/L。
[0016]上述人体蠕形螨复合培养液制备方法，包括如下步骤：
[0017](1)向RPMI
‑
1640基础培养液中加入胎牛血清、葡萄糖、白蛋白、L
‑
谷氨酰胺、岩藻多糖、HEPES、亚硒酸钠、维生素C、青霉素、碳酸氢钠混合均匀，过滤，在使用前加入ATP，得到改良RPMI
‑
1640培养液；
[0018](2)向上述人体蠕形螨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人体蠕形螨体外培养原液，其特征在于，其原料按质量百分比包括：甘油三酯40
‑
50％，胆固醇22
‑
26％，角鲨烯16
‑
20％，甘油二酯8
‑
12％，蜡脂1
‑
3％，余量为吐温
‑
80。2.一种人体蠕形螨体外培养液，其特征在于，包括：如权利要求1所述人体蠕形螨体外培养原液和生理盐水，如权利要求1所述人体蠕形螨体外培养原液和生理盐水的体积比为0.5
‑
1.5：100。3.根据权利要求2所述人体蠕形螨体外培养液，其特征在于，还包括：增稳角鲨烯，增稳角鲨烯与如权利要求1所述人体蠕形螨体外培养液的体积比为0.4
‑
0.8：0.5
‑
1.5。4.根据权利要求2所述人体蠕形螨体外培养液，其特征在于，增稳角鲨烯采用如下具体步骤制取：将1,2
‑
丙二醇加入生理盐水混合均匀得到预混料；将吐温
‑
80、胶原蛋白加入角鲨烯中搅拌均匀，然后滴加至预制料中得到增稳角鲨烯。5.根据权利要求4所述人体蠕形螨体外培养液，其特征在于，1,2
‑
丙二醇、吐温
‑
80、胶原蛋白、角鲨烯的质量比为1
‑
5：1
‑
2：1
‑
3：20
‑
25。6.一种人体蠕形螨复合培养液，其特征在于，包括：如权利要求2
‑
5任一项所述人体蠕形螨体外培养液和改良RPMI
‑
1640培养液，如权利要求2
‑
5任一项所述人体蠕形螨体外培养液和改良RPMI
‑
1640培养液的体积比为10：1
‑
6；改良RPMI
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1640培养液包括：RPMI
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1640基础培养液5
‑
15g/L，胎...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国庆，湛孝东，谷生丽，汪海波，张大存，牛雪彬，蒋峰，刘婷，汪婧璇，曹佳诚，李麟豪，夏钰婷，吴宇炀，付晓，陶畅，
申请(专利权)人：皖南医学院东平九鑫生物化学有限公司山东九鑫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：