药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法技术

本申请涉及二甲硅油含量检测的技术领域，具体公开了一种药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法。该方法包括以下步骤：S1、取人用狂犬病疫苗水溶液，加乙醇和萃取剂，萃取，留亲油相，弃去水相；其中，人用狂犬病疫苗水溶液和乙醇体积比为1:1

【技术实现步骤摘要】
药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法


[0001]本申请涉及二甲硅油含量检测的
，更具体地说，它涉及一种药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法。

技术介绍

[0002]二甲硅油是无色、无味、无毒，不易挥发的油状液体，在药用卤化丁基橡胶塞生产工艺中，在最后会以二甲硅油对药用卤化丁基橡胶塞进行硅化处理。
[0003]人用狂犬病疫一般分为冻干人用狂犬疫苗和水针人用狂犬疫苗。针对其中的冻干人用狂犬疫苗，二甲硅油虽是惰性材料，但是当冻干人用狂犬疫药饼上的药粉脱落后将可能与药用卤化丁基橡胶塞接触，从而接触药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油；而脱落的药粉被二甲硅油吸附后，使得二甲硅油迁移至药物中并与药粉形成胶体或者药粉团；当脱落的药粉与药用卤化丁基橡胶塞的接触面积越大，所形成的胶体或者药粉团也就越多。使用时，将该疫苗经灭菌注射用水稀释后，因二甲硅油本身不溶于水，则会出现药液浑浊和药粉难溶现象，影响药液的澄清度。
[0004]针对其中的水针人用狂犬疫苗，当药液与药用卤化丁基橡胶塞长时间接触后，药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油会迁移到药液中，且随着接触时间的增加二甲硅油的迁入量也增加。此外，药用卤化丁基橡胶塞上的二甲硅油还会增加溶液的不溶性微粒的量，进而影响药液的澄清度。
[0005]因此，建立测定药用卤化丁基橡胶塞二甲硅油在冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)及人用狂犬病疫苗(Vero细胞)迁移量的检测方法是有必要的。目前相关研究中检测二甲硅油含量的方法为：以有机溶剂，如二氯甲烷、氯仿、正己烷、甲苯、乙醚等溶剂萃取二甲硅油，随后通过红外分光光度法或者傅里叶变换衰减全反射红外光谱法(ATR
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FTIR)检测二甲硅油的含量。但是，我国对药用卤化丁基橡胶塞表面二甲硅油残留量或药液中二甲硅油的检测并未建立法定标准规定，国内生产企业也未对出厂的胶塞表面二甲硅油残留量进行质量控制，更没有针对药液中二甲硅油迁移量的检测方法和质量控制方法。而直接采用上述方法检测二甲硅油含量时，存在检测结果不准确的问题。

技术实现思路

[0006]为了提高检测卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的准确性，本申请提供一种药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法。
[0007]本申请提供的药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法采用如下的技术方案：药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法，包括以下步骤：
S1、取人用狂犬病疫苗水溶液，加乙醇和萃取剂，充分震荡萃取，形成双相，分别是亲油相和水相，留亲油相，弃去水相；其中，人用狂犬病疫苗水溶液和乙醇体积比为1:1
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2.5，人用狂犬病疫苗水溶液和萃取剂的体积比为1:0.5
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0.8，所述萃取剂选自乙醚、甲苯、正己烷和氯仿中的任意一种；S2、去除亲油相中的萃取剂后，得到粗品，于粗品中加入氯仿复溶，得到进样样品，将进样样品采用ATR法检测即可。
[0008]本申请要检测的是人用狂犬病疫苗中二甲硅油的含量，该二甲硅油是来自于卤化丁基橡胶塞的，因此，在人用狂犬病疫苗中二甲硅油的含量相对较低。此外，人用狂犬病疫苗中主要的组分是狂犬病毒相关的蛋白，包括糖蛋白、核蛋白、磷蛋白、基质蛋白和转录酶大蛋白等。通过有机溶剂萃取能够将二甲硅油和大部分杂质蛋白(糖蛋白、核蛋白等)分离，但是还是会有部分杂质蛋白是难以通过该方式和二甲硅油分开的。申请人发现，在萃取二甲硅油时，和亲油相比，若人用狂犬病疫苗中的某些蛋白质更倾向溶解在水中时，将会留在人用狂犬病疫苗水溶液中，从而和二甲硅油分开；若是人用狂犬病疫苗中的某些蛋白质更倾向溶解在萃取剂中时，将会和二甲硅油一起留在萃取剂中，则难以和二甲硅油分开。此外，蛋白质分别在人用狂犬病疫苗水溶液和萃取剂中的分配情况，是和人用狂犬病疫苗水溶液、萃取剂的极性有关的；同一类蛋白质仅仅是倾向于留在人用狂犬病疫苗水溶液或萃取剂中，并非完全留在人用狂犬病疫苗水溶液或萃取剂中；尤其是某类蛋白质(如部分基质蛋白、磷蛋白)既含有相对亲水的基团，又含有疏水的基团，该类蛋白质还有可能携带部分二甲硅油一起分配在人用狂犬病疫苗水溶液中，而人用狂犬病疫苗中二甲硅油的含量本来就相对较低，因此从一开始萃取阶段就出现萃取不完全的情况，使得最终检测结果不准确。
[0009]通过采用上述技术方案，首先申请人在最开始就结合乙醇、水和萃取剂将二甲硅油、杂质蛋白充分分离：其中，乙醇是能够和水以任意比例互溶的，因此，和萃取剂所在的亲油相比，乙醇更倾向于分配在人用狂犬病疫苗水溶液中；因此，实际上在该过程中，总共有两相，分别是乙醇和人用狂犬病疫苗水溶液所形成的亲水相，以及萃取剂所在的亲油相。二甲硅油不溶于水且微溶于乙醇，但是却易溶于萃取剂中，因此和亲水相相比，二甲硅油倾向完全分配在萃取剂中并且被亲水相所排斥；而水溶性蛋白则溶解在亲水相中；此外，由于亲水相中的乙醇还具有亲油性，使得部分既含有亲水的基团、又含有疏水基团的蛋白质更易分配在亲水相中，从而实现二甲硅油和该类既含有亲水的基团、又含有疏水基团的蛋白质的分离，保证二甲硅油被更加充分地萃取，从而保证该检测方法的准确性。在该方案中，使得人用狂犬病疫苗水溶液和乙醇体积比为1:1
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2.5，人用狂犬病疫苗水溶液和萃取剂的体积比为1:0.5
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0.8，能够进一步促进二甲硅油分配在亲油相，而其他杂质蛋白质(尤其是既含有亲水的基团、又含有疏水基团的蛋白质)分配在亲水相，进一步更加充分地萃取二甲硅油，从而保证该检测方法的准确性和灵敏度。此外，该方案中首先要做的就是将不易和二甲硅油分离的一类既含有亲水的基团、又含有疏水基团的蛋白质分离出去，避免在一开始这类杂质蛋白对检测结果的影响。
[0010]可选的，步骤S2中，去除萃取剂前还包括以70
‑
80℃热水处理亲油相后冷却至室温的步骤。
[0011]通过采用上述技术方案，通过热水处理，使得蛋白变性，进一步充分去除亲水性蛋白质，保证检测结果的准确性。这类杂质蛋白可能会携带部分二甲硅油，因此通过热水处理
后，将直接去除该类杂质蛋白，避免因这类杂质蛋白带来的二甲硅油的损失。同时这类杂质蛋白处理不完全，也会作为杂质影响后面的检测结果。
[0012]可选的，步骤S2中，热水处理亲油相时，包括以下步骤：于亲油相中加入水，水的添加量为萃取剂体积的1
‑
1.8倍，随后在水浴中保温后再冷却，留亲油相。
[0013]通过采用上述技术方案，采用以上水和萃取剂的体积比，能够使得检测结果更加准确。
[0014]可选的，水浴温度为90
‑
100℃，时间为5
‑
10min。
[0015]可选的，步骤S2中，热水处理前还包括以0.11
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0.18mol/L的氯化钠溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药用卤化丁基橡胶塞表面的二甲硅油在人用狂犬病疫苗中迁移量的ATR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取人用狂犬病疫苗水溶液，加乙醇和萃取剂，充分震荡萃取，形成双相，分别是亲油相和水相，留亲油相，弃去水相；其中，人用狂犬病疫苗水溶液和乙醇体积比为1:1
‑
2.5，人用狂犬病疫苗水溶液和萃取剂的体积比为1:0.5
‑
0.8，所述萃取剂选自乙醚、甲苯、正己烷和氯仿中的任意一种；S2、去除亲油相中的萃取剂后，得到粗品，于粗品中加入氯仿复溶，得到进样样品，将进样样品采用ATR法检测即可。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中，去除萃取剂前还包括以70
‑
80℃热水处理亲油相后冷却至室温的步骤。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中，热水处理亲油相时，包括以下步骤：于亲油相中加入水，水的添加量为萃取剂体积的1
‑
1.8倍，随后在水浴中保温后再冷却，留亲油相。4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，水浴温度为90
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100℃，时间为5
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10min。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓非，孙非非，栗生威，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：