本发明专利技术涉及一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球及其制法，具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球包括多个载药纳米颗粒与丝素蛋白分子I，丝素蛋白分子I之间相互作用形成微米颗粒，多个载药纳米颗粒分散在微米颗粒内；载药纳米颗粒由六味地黄复方有效成分提取物与丝素蛋白分子II构成，丝素蛋白分子II之间相互作用形成纳米颗粒，六味地黄复方有效成分提取物分散在纳米颗粒内；制备方法：先制备六味地黄复方有效成分提取物，再制备载药纳米颗粒，最后制备六味地黄丝素蛋白微球。本发明专利技术的产品可实现不同药物的多级梯度缓释功能，本发明专利技术的制备方法，提高了药物有效成分的纯度。分的纯度。分的纯度。
【技术实现步骤摘要】
具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球及其制法
[0001]本专利技术属于生物医学材料
，涉及一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球及其制法。
技术介绍
[0002]六味地黄丸原名地黄圆，始创于北宋名医钱仲阳的《小儿药症直诀》，由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、白茯苓组成，主要用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精。随着医疗领域的逐渐发展，现代六味地黄丸主要用于治疗糖尿病、糖尿病肾病、高血压、围绝经期综合征、骨质疏松、慢性肾脏病、胰岛素抵抗、老年性阴道炎、肝肾阴虚症等疾病及证候。由于六味地黄丸用于治疗多种慢性疾病，因此需其在体内缓慢溶化吸收。传统六味地黄制剂将六种药材粉碎成细粉，混以粘合剂制成。如中国专利(申请号：202110485915.6)所述的一种六味地黄丸的制备方法，将熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓和泽泻粉碎过筛制成粉末，然后在膏粉混合物中加入占制成药物总量25～50％比例的粘合剂，混合均匀制成丸剂。该法的优点是全粉入药，没有丢失任何成分，但是有效成分含量比例低，患者服用量过大，同时药物的生物利用度低，半衰期短。因此需要一种高效的药物提纯方法来提高有效成分的含量，同时可利用载体材料将药物分子转化为微纳米颗粒，改善药物用量大、体内半衰期短等问题。
[0003]现代中药提取在水煎煮的基础上，引入了各种不同的提取纯化方法，如常用的“水提醇沉法”，它能在一定程度上除去杂质，但也会去除一些具有生物活性的物质如多糖类。此外，对纯度要求比较高的品种，醇沉仅是初级分离，尚需进一步提纯处理。分离纯化新技术如大孔吸附树脂分离法，工艺操作简单、环境友好、选择性好、生产成本低、再生方便，可对中药提取液中生物碱、黄酮类、皂苷类、醌蒽、萜类、多糖、色素进行良好的分离纯化。如中国专利(申请号：201510434596.0)所述采用大孔树脂、阴离子交换树脂联用对六味地黄复方进行分离纯化，得到三种粉末，将这三种粉末均匀混合和制丸后，其有效成分大大增加。然而，该专利技术前期水煎提取，会导致一些药效成分的破坏和损失。如山茱萸中熊果酸为醇溶性、不溶于水提液，且牡丹皮中丹皮酚50℃以上易随水蒸气挥发。因此有必要更加高效地对六味地黄复方中的有效成分进行提取。
[0004]丝素蛋白是家蚕丝中的主要成分，来源丰富，且其作为一种天然高分子材料具有优良的生物相容性、可控的生物降解性，此外其加工条件温和，可被制备成薄膜、凝胶、多孔支架、微针、颗粒等多种形式，在组织工程和药物缓释领域内应用广泛。中国专利(申请号：201510918623.1)利用聚乙二醇和丝素蛋白水溶液共混形成乳液制备丝素蛋白微球，该法操作流程简单易行、不添加有机溶剂，生物安全性高，但是通过该方法制备的载药微纳米球对于有些小分子药物来说，缓释速率较快，难以更好得控制药物的缓释行为。
[0005]因此，研究一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球及其制法，以解决现有技术中六味地黄丸的有效成分低、缓释速率较快、难以控制药物的缓释行为的问题具有十分重要的意义。
技术实现思路
[0006]为了制备出有效成分含量高以及缓释行为分级可控的载药微球，本专利技术提供了一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球及其制法。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，包括多个载药纳米颗粒与丝素蛋白分子I，丝素蛋白分子I之间相互作用形成微米颗粒，多个载药纳米颗粒分散在微米颗粒内；
[0009]载药纳米颗粒由六味地黄复方有效成分提取物与丝素蛋白分子II构成，丝素蛋白分子II之间相互作用形成纳米颗粒，六味地黄复方有效成分提取物分散在纳米颗粒内。
[0010]本专利技术的六味地黄丝素蛋白微球具有多级梯度缓释功能，由于六味地黄复方有效成分提取物被分散在由丝素蛋白分子II组成的纳米颗粒中形成载药纳米颗粒，载药纳米颗粒被分散在由丝素蛋白分子I组成的微米颗粒中形成六味地黄丝素蛋白微球，因此六味地黄复方有效成分提取物从纳米颗粒中扩散时会遇到阻碍，使其缓慢持续地从丝素蛋白微球中释放出来。在制备过程中，丝素蛋白分子I中可以混入六味地黄有效成分提取物，也可以不混入。不混入时，由于载药纳米颗粒外层有丝素蛋白分子I的包裹也会延缓药物的释放，延长药物的缓释时间；当混入六味地黄有效成分提取物时，可以使丝素蛋白分子I中的药物被首先释放出来，然后是丝素蛋白分子II中的药物释放，最后伴随着丝素蛋白分子I和II的降解过程继续释放药物以达到梯度释放的功能。
[0011]本专利技术中I和II仅仅是为了区分形成微米颗粒的丝素蛋白分子和形成载药纳米颗粒的丝素蛋白分子，丝素蛋白分子I与丝素蛋白分子II可以相同，也可以不同。
[0012]作为优选的技术方案：
[0013]如上所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，丝素蛋白分子I中还混有六味地黄复方有效成分提取物。
[0014]如上所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，六味地黄丝素蛋白微球的缓释总时长≥240h，前24h累计释放率≥19.2％，中间48h累计释放率为≤30.8％，最后累计释放率为≤27％。
[0015]如上所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，载药纳米颗粒的粒径为10～1000nm，六味地黄丝素蛋白微球的粒径为0.2～100μm，载药纳米颗粒中六味地黄复方有效成分提取物的含量为0.001～80wt％，六味地黄丝素蛋白微球中六味地黄复方有效成分提取物的含量为0.001～80wt％。
[0016]如上所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，六味地黄复方有效成分提取物中有效成分的含量为0.001～50wt％，六味地黄复方有效成分提取物中的成分种类繁多，目前检测最多的成分是马钱苷和莫诺苷，本专利技术利用高效液相色谱法选择其中的最常见特征成分马钱苷作为标定成分，对六味地黄复方有效成分提取物中有效成分的含量进行测定(即本专利技术的测试对象是马钱苷)。
[0017]本专利技术还提供一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球的制备方法，包括以下步骤：
[0018](1)制备六味地黄复方有效成分提取物；
[0019](2)制备载药纳米颗粒；
[0020]将步骤(1)得到的六味地黄复方有效成分提取物和丝素蛋白水溶液混合，加入可与丝素蛋白水溶液混溶的溶剂(乙醇、聚乙二醇
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600、甲醇等)后依次进行搅拌、冷冻、室温解冻和去除溶剂，得到载药纳米颗粒；
[0021]丝素蛋白水溶液的浓度为0.5～10.0wt％，搅拌速率为1～1000rpm，搅拌时间为0.1～15min；
[0022]载药纳米颗粒的形成机理为：丝素蛋白特定的疏水、亲水链段相互排列类似于嵌段共聚物结构，决定了丝素蛋白水溶液在较低浓度时能够发生自组装而形成胶束，甲醇、乙醇等溶剂的加入会引起丝素蛋白脱去水合层以及降低介电常数，从而增加带电质点的相互作用，致使丝素蛋白从本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，其特征在于，包括多个载药纳米颗粒与丝素蛋白分子I，丝素蛋白分子I之间相互作用形成微米颗粒，多个载药纳米颗粒分散在微米颗粒内；载药纳米颗粒由六味地黄复方有效成分提取物与丝素蛋白分子II构成，丝素蛋白分子II之间相互作用形成纳米颗粒，六味地黄复方有效成分提取物分散在纳米颗粒内。2.根据权利要求1所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，其特征在于，丝素蛋白分子I中还混有六味地黄复方有效成分提取物。3.根据权利要求1或2所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球，其特征在于，载药纳米颗粒的粒径为10～1000nm，六味地黄丝素蛋白微球的粒径为0.2～100μm，载药纳米颗粒中六味地黄复方有效成分提取物的含量为0.001～80wt％，六味地黄丝素蛋白微球中六味地黄复方有效成分提取物的含量为0.001～80wt％；六味地黄丝素蛋白微球的缓释总时长≥240h，前24h累计释放率≥19.2％，中间48h累计释放率为≤30.8％，最后累计释放率为≤27％。4.一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备六味地黄复方有效成分提取物；(2)制备载药纳米颗粒；将步骤(1)得到的六味地黄复方有效成分提取物和丝素蛋白水溶液混合，加入可与丝素蛋白水溶液混溶的溶剂后依次进行搅拌、冷冻、室温解冻和去除溶剂，得到载药纳米颗粒；丝素蛋白水溶液的浓度为0.5～10.0wt％，搅拌速率为1～1000rpm，搅拌时间为0.1～15min；(3)制备六味地黄丝素蛋白微球；将步骤(2)得到的载药纳米颗粒和丝素蛋白水溶液混合，加入聚乙二醇水溶液后混合均匀形成乳液，静置孵育后洗去聚乙二醇，得到具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球。5.根据权利要求4所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球的制备方法，其特征在于，步骤(1)的过程如下：(1.1)牡丹皮加蒸馏水浸泡后蒸馏，过滤，得到挥发油和牡丹皮药渣备用；(1.2)山茱萸加乙醇水溶液回流，过滤，得到山茱萸药渣和滤液备用；(1.3)将熟地黄、山药、泽泻、茯苓研磨成粉末，然后与步骤(1.1)得到的牡丹皮药渣和步骤(1.2)得到的山茱萸药渣混合，加水浸泡、煎煮后合并、过滤浓缩得到提取液；(1.4)采用含有大孔吸附树脂的层析柱对步骤(1.2)得到的滤液与步骤(1.3)得到的提取液的混合液进行处理，得到提纯液；(1.5)将步骤(1.1)得到的挥发油和步骤(1.4)得到的提纯液混合后，冷冻干燥，研磨，得到六味地黄复方有效成分提取物。6.根据权利要求5所述的一种具有多级梯度缓释功能的六味地黄丝素蛋白微球的制备方法，其特征在于，步骤(1.1)中，浸泡时间为0.1～48...
【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，严佳，韩植芬，张悦，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：
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