基于外泌体递送NF-KB抑制剂的用途制造技术

本公开涉及使用包含NF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于外泌体递送NF
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KB抑制剂的用途


[0001]本公开涉及使用包含NF
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κB抑制剂的外泌体治疗急性肾损伤的方法。本公开涉及使用包含NF
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κB抑制剂的外泌体治疗脓毒症诱导的疾病的方法。

技术介绍

[0002]AKI不仅促进短期不良结果，而且生存者可能要遭受慢性肾病(CKD)并且甚至是终末期肾病(ESRD)。作为发病机制中最重要因素之一，NF
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κB的系统性抑制影响AKI的严重程度。由叶酸诱导的疾病模型中，NF
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κB的抑制通过降低RelA和NF
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κB2的活化来缓解AKI损伤。
[0003]已知超过800种合成和天然材料部分地涉及调节NF
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κB活化。一些研究已经显示NF
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κB信号转导阻断，诸如肾素
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血管紧张素
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醛固酮系统(RAAS)阻断或肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)阻断剂，能够缓解肾脏损伤。然而，他们的作用机制是多向性的并且缺乏特异性。纳米技术的最近进展使得产生特异性基因序列或者纳米颗粒以靶向NF
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κB信号转导成为可行。然而，尚没有商业上批准用于人类使用的NF
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κB抑制剂。
[0004]失控性炎症是脓毒性反应的显著特征。由Toll样受体(TLR)调控的宿主
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病原相互作用刺激促炎症细胞因子、趋化因子和免疫激活分子的产生。该促炎症反应之后是涉及到免疫细胞的各种数量上和功能上缺陷的补偿性免疫抑制反应。病原诱导细胞修饰伴随着宿主基因表达的显著变化，核因子κB(NF
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κB)转录因子在调控这些变化上起着首要作用。包括肿瘤坏死因子(TNF)
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α和白介素(IL)
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1的几种受NF
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κB调节控制的细胞因子能够诱导转录因子的进一步激活，导致炎症反应和脓毒性休克的加强。此外，NF
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κB涉及细胞凋亡反应，主要通过增强抗凋亡基因诸如Bcl
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x
L
、A1和A20的转录。因此，通过促炎症介质的增加表达和被激活产生促炎症分子并且直接参与急性炎症过程的细胞群体诸如中性粒细胞的延长的生命周期的两种相互作用机制能够加重与NF
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κB激活相关的炎症。
[0005]存在脓毒症引发的多种疾病，诸如肺炎、细胞因子风暴综合征、呼吸窘迫综合征和器官衰竭。脓毒症是由于急性微生物感染而激活先天性免疫系统从而引发的全身炎症反应综合征，并且一直是重症监护室中死亡的主因。而且，由脓毒症引发的各种疾病具有截然不同的症状，有些症状是致命性的。很不幸，脓毒症的一般治疗(即抗生素)可能对于治疗由脓毒症引起的不同疾病，诸如细胞因子综合征和受损器官没有效果。当前，对于由脓毒症引起的疾病并没有临床有用的治疗。因此，迫切需要有效的替替代治疗的开发。尽管已经报告有超过700种NF
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κB的抑制剂，目前尚无抑制剂被批准作为治疗剂。而且，已知各种甾族和非甾族抗炎剂阻滞NF
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κB，但是他们抑制NF
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κB的作用并没有特异性。
[0006]成功的基因和药物递送需要选择合适的载体，以用于稳定地递送靶分子至作用部位，且不引起接受者的不良反应。据报道，包括重组腺病毒、脂质体、配体缀合纳米颗粒和超声微泡的各种类型的载体对药物递送有效，得益于其稳定性和高的载荷能力。然而，他们的应用仍涉及一些担忧和受限。尽管他们能够被网状内皮系统快速识别和清理，他们的不一致的粒度尺寸和非特异性的摄取模式限制了他们作为生物载体的应用。腺病毒载体的高免疫原性在给药后可能引发免疫应答，并且病毒本身在大剂量时可能有毒。脂质体的应用也
可能诱导不利的免疫原性反应和非IgE介导的超敏反应。
[0007]当前的递送治疗蛋白的传统策略包括在合成纳米颗粒内包封该蛋白。最优选的蛋白递送系统是脂质体和聚合物纳米颗粒(PNP)。脂质体是具有在水环境下自组装成各种尺寸和形状的磷脂膜的合成囊泡。PNP是大小在10
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1000nm之间的固体胶体颗粒，并且由可生物降解的聚合物制成，其中，货物蛋白可以陷入、封装或附着于纳米颗粒基质。然而，脂质体趋向于相互融合或聚集，导致脂质体货物经过一段时间提前释放。PNP可以比脂质体具有更好的稳定性，但是他们的生物相容性和长期潜在安全性仍旧是个问题。此外，包封蛋白至脂质体和PNP需要合成或重组蛋白的生成以及离体封装过程，而EXPLOR技术需要能够经过天然外泌体生物合成来产生载货物的外泌体的稳定细胞的生成和维持。此外，外泌体具有很多理想蛋白递送系统的期望特征，诸如生物相容性、最小或没有固有毒性、在循环中的长半衰期和靶向组织的内在能力。
[0008]近来，外泌体作为用于基因/药物递送的新生物载体已经引起极大关注。外泌体是在细胞
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细胞交流中起重要作用的细胞外囊泡(EV)，其细胞交流通过传递生物活性物质到受体细胞或者影响靶细胞的信号通路。相较于其他生物活性剂，外泌体更易于存储并且展示出更大稳定性。外泌体具有克服生物屏障的高能力，并且能够载有靶向特定细胞类型的表面分子，因此，更少地引起脱靶效应。

技术实现思路

[0009]本公开提供治疗有需要的受试者急性肾损伤(AKI)的方法，包括：向所述受试者给药有效量的包括包含有NF
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κB抑制剂的外泌体的组合物。
[0010]本公开还提供治疗有需要的受试者的脓毒症引发疾病的方法，包括：向所述受试者给药有效量的包括包含有NF
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κB抑制剂的外泌体的组合物。
附图说明
[0011]图1.从HEK293T生产的工程化外泌体的表征
[0012](A)用于生产负载超阻遏物
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IκB的外泌体(Exo
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srIκB)的DNA构建体的(上)和使用光可逆蛋白质
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蛋白质相互作用(被称为EXPLOR技术)生物合成携带货物蛋白外泌体(下)的示意图。(B)Exo
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天然和Exo
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srIκB的代表性TEM图像。比例尺：100nm。(C)Exo
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天然(上)和Exo
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srIκB(下)的浓度和尺寸分布通过Zetaview仪器确定。(D)对HEK293T细胞和HEK293T细胞源性外泌体进行免疫印迹以分析靶蛋白(srIκB、mCherry、CD9和GFP)、外泌体阳性标志物(CD63、TSG101、Alix和GAPDH)和外泌体阴性标志物(细胞器标志物；抗增殖蛋白、钙联蛋白、GM130和核孔蛋白p62)的表达。天然细胞和Exo
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天然用作Exo
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srIκB的阴性对照。
[0013]图2.Exo
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗有需要的受试者急性肾损伤(AKI)的方法，包括：向所述受试者给药有效量的包括包含NF
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κB抑制剂的外泌体的组合物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述NF
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κB抑制剂选自由以下组成的组：NF
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κB抑制蛋白、其片段及其混合物。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述NF
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κB抑制剂选自由以下组成的组：超阻遏物(SR)
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IκB(srIκB)、IκB
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α、IκB
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β、IκB
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ε、BCL
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3、其突变体和其混合物。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物是通过口服、经皮、腹腔内、静脉内、肌肉内、皮下或混合途径给药。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括向所述受试者给药抗炎剂。6.根据前述权利要求中...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔哲熙，崔暻善，俞在光，
申请(专利权)人：伊利亚斯生物制品公司，
类型：发明
国别省市：