一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于微生物发酵技术领域，尤其涉及一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法及应用，所述制备方法包括：菌种活化：通过画线和摇菌，进行菌种活化，得到活化好的菌种；药材准备：将四物汤药材当归、川芎、白芍和熟地黄进行粉碎过筛，得到药材半成品；发酵：将活化好的菌种和药材半成品混合均匀，进行发酵培养，得发酵液，将发酵液静置后过滤，滤液高温灭菌，使菌种失活，将灭菌后的发酵滤液离心，收集上清液，即得到所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆。本发明专利技术利用双歧杆菌对当归、川芎、白芍和熟地黄进行复合发酵，产出一种美白、安全、温和以及与肌肤亲和性好的发酵液，为美白产品的生物开发和推广应用提供依据。依据。

【技术实现步骤摘要】
一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法及应用


[0001]本专利技术属于微生物发酵
，尤其涉及一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]四物汤最早出现在晚唐蔺道人所著的《仙授理伤续断秘方》，被用于治疗外伤淤血作痛等症。宋代被载于中国第一部国家药典《太平惠民合剂局方》中。随着现代医药科学发展，药理学研究以及临床研究显示，四物汤还具有抗自由基损伤、免疫调节、抑制痤疮、治疗黄褐斑、调节内分泌失调等功效。
[0003]当归是伞形科植物的干燥根，具有补血和血，抗癌、抗老防老、免疫之功效。川芎为多年生草本植物。其根状茎入药，性温、味辛，有活血、行气、祛斑养颜等多种功效。川芎的主要成分有挥发油、内酯类、生物碱类、酚类等多类成分，其中阿魏酸(4
‑
羟基
‑3‑
甲氧基苯丙烯酸)具有较强的生理活性。
[0004]行气、活血类中药是常用的美白中药，例如四物汤所含的当归和川芎。当归补血生肌，川芎行气活血，均促进人体血液循环，增加体内营养输送，达到美白及防衰老的功效。当归和川芎的主要成分阿魏酸能抑制酪氨酸酶单酚酶活力，延长酪氨酸酶反应的迟滞时间，从而达到美白效果。
[0005]白芍又名青羊参，多年生草质藤本。
[0006]中医理论自古便有“以色治色”一说，一些炮制品、原植物颜色偏白或名字带“白”的中药，很多都被认为有美白作用，经由现代科学考察验证，白芷、白茯苓、白芍、白鼓、白术、白芨、白附子等，确实具有良好的美白效果。
[0007]地黄来源于玄参科植物地黄的块根，是临床最常用中药之一。
[0008]由于黑色素的生长与细胞内外的氧化反应有关，所以，一些具有抗氧化作用的中药亦同时具有美白功效。葛根中所含的黄酮类物质具有较强的总还原能力，对DPPH
·
、
·
OH和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用，从而具有较强的美白作用。四物汤的其中一味药熟地对DPPH自由基的清除能力比生地和维生素E都大，能够减少体内氧自由基，减少酪氨酸转化为多巴，再由多巴转换为黑色素的条件，使得肌肤保持白皙光泽。
[0009]在化妆品配方中采用植物性药材是大趋势所向，越来越多的合成成分被天然植物成分替代。

技术实现思路

[0010]为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法及应用，本专利技术利用双歧杆菌对当归、川芎、白芍和熟地黄进行复合发酵，产出一种美白、安全、温和以及与肌肤亲和性好的发酵液，为美白产品的生物开发和推广应用提供依据。
[0011]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，包括以下步骤：
[0013](1)菌种活化：
[0014]配置1L的双歧杆菌培养基，具体操作为：称取双歧杆菌培养基45g，包括蛋白胨10g，肝浸粉5g，牛肉浸粉3g，酵母浸粉5g，胰酪蛋白胨8g，可溶性淀粉0.5g，氯化钠1g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1g，葡萄糖10g，7水硫酸铁0.01g，硫酸锰0.005g，半胱氨酸0.5g。加入1ml吐温80，搅拌均匀后定容至1L，分装至100Ml锥形瓶中，其中一部分作为液体培养基，另一部分加0.6g琼脂粉配置成固体培养基，用高压蒸汽灭菌锅灭菌后放在室温下备用。
[0015]将保藏的菌液从冰箱中取出解冻，放在冰盒中备用。用微波炉融化固体培养基，在超净工作台上，将培养基均匀倒在灭过菌的培养皿中，加入抗生素。待凝固后，用接种环蘸取菌液，在平板上进行划线。放在37度培养箱中过夜培养。
[0016](2)材料准备：
[0017]将四物汤药材当归、川芎、白芍和熟地黄进行清洗、干燥，粉碎后过100目筛，加工成具有一定质量规格的中药材半成品。
[0018](3)发酵：
[0019]24小时后，用灭过菌的牙签挑取单菌落放置在双歧杆菌液体培养基中，28
‑
35℃培养4
‑
12小时后，选取较浓稠的一瓶菌液。
[0020]吸取菌液，按1
‑
3％的比例接种至另一瓶双歧杆菌液体培养基中。28
‑
35℃培养4
‑
12小时后测OD值，直至达到0.4
‑
0.6左右时进行发酵。
[0021]将双歧杆菌菌液按1
‑
5％的比例接种，药材按10％的比例混入，28
‑
35℃培养36
‑
72小时后，得发酵液；
[0022]将发酵液静置后过滤，滤液在120
‑
130℃的温度下高压灭菌15
‑
20min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在3000
‑
8000r/min离心20
‑
35min，收集上清液，检测酪氨酸酶抑制率和DPPH清除率。
[0023](4)抗氧化效果检验
[0024]自由基(DPPH)清除实验方法：
[0025]使用10mL试管设立样品管(T)、样品本底(T0)、DPPH管(C)和溶剂本底(C0)，每一样品的每个受试浓度的样品管(T)需设立3支平行管，同时DPPH管(C)也需设立3支平行管。在样品管(T)和样品本底(T0)中各加入1mL相同浓度的样品溶液。在所有试管中(T、T0、C、C0)补充溶剂，水溶性样品用水，油溶性样品用95％乙醇，补足3mL，混匀。在样品管(T)和DPPH管(C)中加入DPPH乙醇溶液1mL，样品本底(T0)和溶剂本底(C0)用95％乙醇代替，轻轻摇匀，室温下静置5分钟。将各支反应溶液移入1cm比色皿中，在517nm处测定吸光值。
[0026](5)美白效果检验
[0027]酪氨酸酶活性抑制实验方法：
[0028]使用10mL试管设立样品管(T)、样品本底(T0)、酶反应管(C)和溶剂本底(C0)，每一样品的每个受试浓度的样品管(T)需设立3支平行管，同时酶反应管(C)也需设立3支平行管。在样品管(T)和样品本底(T0)中各加入1mL相同浓度的样品溶液，酶反应管(C)和溶剂本底(C0)则分别加入1mL磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲液。在样品管(T)和酶反应管(C)中各加入0.5mL酪氨酸酶溶液，样品本底(T0)与溶剂本底(C0)以0.5mL磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲液代
替，将样品和酪氨酸酶充分混匀，置37℃水浴槽孵育10分钟。依次在各管中加入2mL的左旋多巴溶液，控制每管反应时间为5分钟，即刻将各管反应溶液移入比色皿中，在475nm处测定吸光值。
[0029](6)刺激性检验
[0030]斑贴试验步骤：
[0031]选用面积为40mm2、深度约1mm的合格斑贴试纸。试验处理：
[0032]将0.025mL发酵液滴入试纸内，将加有发酵液的试纸用无纺布贴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌种活化：通过画线和摇菌，进行双歧杆菌菌种活化，得到活化好的菌种；（2）药材准备：将四物汤药材当归、川芎、白芍和熟地黄进行粉碎过筛，得到药材半成品；（3）发酵：将步骤（1）得到的活化好的菌种和步骤（2）得到的药材半成品混合均匀，进行发酵培养，得发酵液，将发酵液静置后过滤，滤液高温灭菌，使菌种失活，将灭菌后的发酵滤液离心，收集上清液，即得到所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆。2.根据权利要求1所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述菌种活化具体包括以下步骤：配置双歧杆菌培养基，分装至锥形瓶中，其中一部分作为液体培养基，另一部分加琼脂粉配置成固体培养基，用高压蒸汽灭菌锅灭菌后放在室温下备用；将保藏的菌液取出解冻，融化固体培养基，将培养基均匀倒在灭过菌的培养皿中，加入抗生素，待凝固后，用接种环蘸取菌液，在平板上进行划线，放在37度培养箱中过夜培养；24小时后，用灭过菌的牙签挑取单菌落放置在双歧杆菌液体培养基中，28
‑
35℃培养4
‑
12小时后，选取较浓稠的一瓶菌液备用。3.根据权利要求2所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，其特征在于，所述双歧杆菌培养基包括以下重量份的组分：蛋白胨10份、肝浸粉5份、牛肉浸粉3份、酵母浸粉5份、胰酪蛋白胨8份、可溶性淀粉0.5份、氯化钠1份、磷酸氢二钾1份、磷酸二氢钾1份、葡萄糖10份、7水硫酸铁0.01份、硫酸锰0.005份、半胱氨酸0.5份、吐温80 1份。4.根据权利要求2所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述发酵具体包括以下步骤：吸取步骤（1）所选取的较浓稠的菌液，按1
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3%的比例接种至另一瓶双歧杆菌液体培养基中，28
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35℃培养4
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12小时后测OD值，直至达到0.4
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0.6时进行发酵；将双歧杆菌菌液按1
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5%的比例接种，药材按10%的比例混入，28
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35℃培养36
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72小时后，得发酵液；将发酵液静置后过滤，滤液在120
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130
°
C的温度下高压灭菌15
‑
20min，使菌种失活；将灭菌后的发酵滤液在3000
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8000r/min离心20
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35min，收集上清液，即得到所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆。5.根据权利要求1所述的具有美白功效的中草药双歧杆菌发酵原浆的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青，周娟，李雪，
申请(专利权)人：加来济南生活科技有限公司，
类型：发明
国别省市：