一种高效产角蛋白酶的方法技术

本发明专利技术属于角蛋白酶发酵技术领域，尤其涉及一种高效产角蛋白酶的方法。本发明专利技术所述方法包括以下步骤：（1）菌种活化：配置LB培养基，在LB培养基上培养菌落；（2）发酵：将培养的菌落在不同条件下进行发酵培养；（3）酶活验证：检测酶的活力。本发明专利技术通过对角蛋白酶的生产菌株产酶条件的优化研究，获得了产角蛋白酶活力较好且表达量较高的生产条件。旨在促使菌株发酵水平进一步提高，降低角蛋白酶生产和使用成本，为角蛋白类物质的开发利用提供新的科学方法。角蛋白类物质的开发利用提供新的科学方法。

【技术实现步骤摘要】
一种高效产角蛋白酶的方法


[0001]本专利技术属于角蛋白酶发酵
，尤其涉及一种高效产角蛋白酶的方法。

技术介绍

[0002]角蛋白酶(Keratinase)是一种可特异催化降解角蛋白的酶，由微生物产生，在饲料、皮革、纺织、医药等领域具有十分重要的应用价值。以前对角蛋白酶的研究基本上是关于产角蛋白酶菌的分离、筛选以及角蛋白酶的分离纯化和理化性质的研究。近些年随着分子生物学的不断进步，国内外—些学者已经克隆出多个不同来源的角蛋白酶基因，并且进行角蛋白酶的基因工程方面研究，实现了这些基因的异源表达。
[0003]角蛋白酶的工业化生产及应用仍有很多问题。目前有活性的角蛋白酶胞外表达产量仍较低，难以满足工业化的需求。已商品化的角蛋白酶主要应用于饲料和医药行业，关于角蛋白酶在化妆品应用方面的研究较少。
[0004]为了开拓化妆品市场，给化妆品配方研发提供优良的实验材料，提高角蛋白酶的表达量迫在眉睫。角蛋白酶表达量的提高具有重要的理论价值和实际意义。

技术实现思路

[0005]为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效产角蛋白酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌种活化：配置LB培养基，在LB培养基上培养菌落；（2）发酵：将培养的菌落在不同条件下进行发酵培养；（3）酶活验证：检测发酵液中酶的活力。2.根据权利要求1所述的高效产角蛋白酶的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述LB培养基的配制包括以下步骤：称取以下重量份的原料胰蛋白胨10份、酵母提取物5份、氯化钠10份，加蒸馏水搅拌均匀，调PH至7.0，搅拌均匀后定容，分装，其中一部分作为液体培养基，另一部分加琼脂粉配置成固体培养基，用高压蒸汽灭菌锅灭菌后放在室温下备用。3.根据权利要求2所述的高效产角蛋白酶的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述培养菌落的具体方法为：将保藏的菌液从冰箱中取出解冻，放在冰盒中备用，用微波炉融化固体培养基，在超净工作台上，将培养基均匀倒在灭过菌的培养皿中，加入抗生素，待凝固后，用接种环蘸取菌液，在平板上进行划线，放在37℃培养箱中过夜培养。4.根据权利要求1所述的高效产角蛋白酶的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述发酵步骤中，菌落培养20
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36小时后，用灭过菌的牙签挑取单菌落放置在LB液体培养基中，30
‑
37℃、150
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300r摇菌4
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12小时后，选取较浓稠的一瓶菌液用于发酵。5.根据权利要求4所述的高效产角蛋白酶的方法，其特征在于，所述发酵的具体方法为：吸取权利要求4中选取的菌液，按1%
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3%的比例接种至另一瓶LB液体培养基中，30<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青，周娟，李雪，
申请(专利权)人：加来济南生活科技有限公司，
类型：发明
国别省市：