一种小分子有机酸的检测方法技术

本发明专利技术提出了一种小分子有机酸的检测方法，用液相色谱检测液体、半固体、固体中的多种小分子有机酸含量。液相色谱检测的条件为：色谱柱为Agilent Eclipse plus C18；流动相为乙腈和十二烷基三甲基氯化铵混合物；柱温为20

【技术实现步骤摘要】
一种小分子有机酸的检测方法


[0001]本专利技术涉及G01N30/02
，更具体地，涉及一种小分子有机酸的检测方法。

技术介绍

[0002]不同种类的小分子有机酸的存在会影响可食用品的风味和品质，草酸等的存在可以在一定程度上提高可食用品的保存能力，柠檬酸、苹果酸、马富酸等的存在可以在一定程度上赋予可食用品一定的水果香味，但是这些有机酸的酸味较强，在可食用品中含量过多会提高酸性，降低适口度。
[0003]中国专利CN105092739B提供了一种用液相色谱测定黄酒中有机酸的方法，采用含有磺酸基团、羧酸基团、共聚物键合苯磺酸基团这些基团的阳离子交换柱对黄酒样品前处理，以降低液相色谱检测时其他出峰物质对有机酸检测的影响。中国专利CN111175409A提供了一种高效液相色谱检测番茄中有机酸的方法，采用C18色谱柱，所用流动相为含有甲醇的磷酸氢二钾溶液，在40℃的柱温下进行检测，提高了有机酸检测的精确度。
[0004]本申请提出了一种小分子有机酸的检测方法，可以用于检测液体、半固体、固体中的小分子有机酸，检测快速，精确度高、灵敏度高。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出了一种小分子有机酸的检测方法，包括以下步骤：
[0006](1)配置对照品溶液：分别取草酸标准品、酒石酸标准品、苹果酸标准品、乳酸标准品、柠檬酸标准品、丁二酸标准品、富马酸标准品，用溶剂配置成一系列浓度梯度的对照品溶液；
[0007](2)对照品溶液检侧：将对照品溶液用液相色谱检测，得到标准曲线；<br/>[0008](3)样品制备：将样品进行前处理，得到样品溶液；
[0009](4)样品检测：将制备好的样品溶液进行液相色谱检测。
[0010]在一种优选的实施方式中，所述步骤(1)中草酸标准品、酒石酸标准品、丁二酸标准品的梯度浓度为0.1mg/mL，0.2mg/mL，0.5mg/mL，1.0mg/mL， 2.0mg/mL；所述步骤(1)中苹果酸标准品、乳酸标准品、柠檬酸标准品的浓度为0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.2mg/mL，0.5mg/mL，1.0mg/mL；所述步骤(1) 中富马酸标准品的梯度浓度为1μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL。
[0011]在一种优选的实施方式中，所述液相色谱检测的条件如下：
[0012]色谱柱为Agilent Eclipse plus C18；
[0013]流动相为乙腈和十二烷基三甲基氯化铵混合物；
[0014]柱温为20
‑
30℃；
[0015]检测波长为200
‑
400nm；
[0016]进样量为2
‑
10μL；
[0017]流速为0.5
‑
1.2mL/min。
[0018]在一种优选的实施方式中，所述液相色谱检测的条件如下：
[0019]色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，规格为250*4.6，5μm；
[0020]流动相为乙腈和十二烷基三甲基氯化铵混合物；
[0021]pH为7.8；
[0022]柱温为25℃；
[0023]检测波长为210nm；
[0024]进样量为10μL；
[0025]流速为1.0mL/min。
[0026]Agilent Eclipse plus C18的填充物为十八烷基硅烷键合硅胶，采用硅胶填充柱来进行小分子有机酸的液相色谱检测，可以降低与小分子有机酸之间发生的不可逆吸附反应，减少样品的损失，提高检测准确度。但是硅胶填充柱的使用会降低不同种类小分子有机酸的分离效果，还可能由于对杂质吸附能力较差导致液相色谱检测时杂质含量增多。
[0027]在一种优选的实施方式中，所述流动相中乙腈和十二烷基三甲基氯化铵的体积比为(1
‑
5)：(99
‑
95)。
[0028]在一种优选的实施方式中，所述流动相中乙腈和十二烷基三甲基氯化铵的体积比为5:95。
[0029]在一种优选的实施方式中，所述十二烷基三甲基氯化铵中还加入了磷酸氢盐。
[0030]在一种优选的实施方式中，所述磷酸氢盐为磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的混合物质。
[0031]申请人在实验过程中发现，以乙腈和十二烷基三甲基氯化铵作为流动相，可以提高小分子有机酸的紫外吸收强度，提高小分子有机酸的检出灵敏度。申请人推测可能的原因是十二烷基三甲基氯化铵自身具有一定的紫外吸收能力，还可以与小分子有机酸缔合形成疏水性的缔合物，提高小分子有机酸的紫外吸收强度，提高灵敏度。
[0032]但是仅仅用乙腈和十二烷基三甲基氯化铵作为流动相，不能很好的分离不同种类的小分子有机酸，并且十二烷基三甲基氯化铵的紫外吸收能力还会在液相检测峰型中形成干扰峰，影响检测结果。
[0033]申请人在实验过程中发现，在流动相中加入磷酸氢盐，特别是加入磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的混合物，可以促进不同种类小分子有机酸的分离，申请人推测可能的原因是磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的加入，抑制了不同种类小分子有机酸不同阶段下的电离进程，提高了小分子有机酸在检测溶液中的稳定，提高了检测结果的准确性。
[0034]在一种优选的实施方式中，所述十二烷基三甲基氯化铵的摩尔浓度为 10mmol/L。
[0035]在一种优选的实施方式中，所述磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的质量比为 (10
‑
15)：1，更优选的，所述磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的质量比为14:1。
[0036]在一种优选的实施方式中，所述磷酸氢二钾在十二烷基三甲基氯化铵溶液中的质量浓度为5.6g/L。
[0037]在一种优选的实施方式中，所述步骤(3)的具体操作如下：精密称取样品，置于容量瓶中，用溶剂定容至刻度，摇匀，过滤，得到样品溶液。
[0038]更优选的，所述步骤(3)的具体操作如下：精密称取样品2g，置于10mL 容量瓶中，用溶剂定容至刻度，摇匀，过滤，得到样品溶液。在本申请中，采用此步骤制备的样品是液态
样品，样品的种类不做具体限制，可列举的有非奶质品饮料、市售饮用水、自来水、过滤后的河水等。
[0039]在一种优选的实施方式中，所述步骤(3)的具体操作如下：精密称取样品，置于离心管中，加入溶剂后在10000
‑
12500r/min的转速下均质提取，后离心取上层提取液于容量瓶中，离心管中残留物重复提取一遍，合并提取液于同一容量瓶中，用溶剂定容至刻度，摇匀、过滤，得到样品溶液。
[0040]更优选的，所述步骤(3)的具体操作如下：精密称取样品5g，置于50mL 塑料离心管中，加入20mL溶剂后，在12000r/min的转速下均质提取2min， 4000r/min离心5min，取上层提取液至50mL容量瓶中，离心管中残留物再用 20mL溶剂重复提取一次，合并提取液于同一容量瓶中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小分子有机酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配置对照品溶液：分别取草酸标准品、酒石酸标准品、苹果酸标准品、乳酸标准品、柠檬酸标准品、丁二酸标准品、富马酸标准品，用溶剂配置成一系列浓度梯度的对照品溶液；(2)对照品溶液检侧：将对照品溶液用液相色谱检测，得到标准曲线；(3)样品制备：将样品进行前处理，得到样品溶液；(4)样品检测：将制备好的样品溶液进行液相色谱检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中草酸标准品、酒石酸标准品、丁二酸标准品的梯度浓度为0.1mg/mL，0.2mg/mL，0.5mg/mL，1.0mg/mL，2.0mg/mL；所述步骤(1)中苹果酸标准品、乳酸标准品、柠檬酸标准品的浓度为0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.2mg/mL，0.5mg/mL，1.0mg/mL；所述步骤(1)中富马酸标准品的梯度浓度为1μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测的条件如下：色谱柱为Agilent Eclipse plus C18；流动相为乙腈和十二烷基三甲基氯化铵混合物；柱温为20
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30℃；检测波长为200
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400nm；进样量为2
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10μL；流速为0.5
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【专利技术属性】
技术研发人员：梁景辉，魏安凯，张雪梅，张晓蕾，赵赛楠，
申请(专利权)人：陕西微谱检测技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：