血液中多种维生素的提取及含量检测方法技术

本发明专利技术公开了血液中多种维生素的提取及含量检测方法，包括步骤：利用干血采集系统定量获取血液，干燥制成干燥血样本；将干燥血样本中的待测物经提取溶剂提取、纯化，进而得到待检测的维生素样品；用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
血液中多种维生素的提取及含量检测方法


[0001]本专利技术属于血液检测
，具体涉及血液中多种维生素的提取及含量检测的方法。

技术介绍

[0002]血液中的B族维生素是具有多种生物活性的水溶性维生素。水溶性B族维生素参与许多重要的代谢反应，对维持我们的健康至关重要。B族维生素缺乏会导致许多不同类型的疾病，如痴呆、贫血、心血管疾病、神经管缺陷、克罗恩病、乳糜泻和艾滋病毒。VB1是一种重要的辅酶，参与碳水化合物代谢，并直接参与神经功能。VB2是能量代谢中几种还原氧化酶的辅助因子。VB2还作为叶酸、VB12、VB6和同型半胱氨酸代谢的辅酶。VB3和VB5都参与神经传递和脂肪酸合成、氧化/还原反应或一碳代谢。由于B族维生素的重要性，必须保持这些维生素的最佳营养状态。
[0003]脂溶性维生素是健康发育、生长、新陈代谢和细胞调节所必需的多种生化微量营养素。我们无法完全合成脂溶性维生素，也无法达到所需的浓度。维生素A对人的一生至关重要，它与其衍生物一起调节多种过程，包括生殖、胚胎发生、视觉、生长、细胞分化和增殖、上皮细胞完整性的维持和免疫功能，有研究表明，维生素A还与扰乱认知的精神和发育障碍有关。维生素E由于其在脂溶性维生素组中的高浓度而调节体内的氧化还原平衡，并且普遍存在于整个身体中。脂溶性维生素缺乏或过量会导致许多健康问题。
[0004]血浆是定量B族维生素和脂溶性维生素最容易获得的样品基质。然而，由于其复杂性和其他分析挑战(例如，脂溶性维生素对光、氧、热、pH的敏感性、化学异质性、标准品可用性)，开发一种在生理浓度下同时定量多种水溶性和脂溶性维生素的方法一直具有挑战性。
[0005]目前行业内对血液中测定B族维生素和脂溶性维生素的方法有：高效液相色谱法和液相色谱
‑
质谱联用法。目前常用的检测人体的B族维生素和脂溶性维生素是采用血浆检测，血浆样本需要专业人员采集静脉血，容易造成血液污染，且样品需要冷链运输，途中十分不便。采用血清的检测方法前处理较复杂，需要分别提取出血清中水溶性维生素和脂溶性维生素进行检测。而目前已有的通过手工提取干血斑检测多种维生素的检测方法为，采用十份干血斑样本，通过甲醇、甲酸和水的混合溶剂同时提取出干血斑样本中的水溶性和脂溶性维生素，该方法所需的干血斑样本量大，在实际应用中一次性采集同一位受试者十个干血斑的难度较大，难以适用于大样本的人群的疾病诊断和健康监测需要，且该方法提取出的水溶性维生素B3和脂溶性维生素A的萃取效率较低，影响了维生素定量的准确度。

技术实现思路

[0006]为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供血液中多种维生素(包含水溶性维生素和脂溶性维生素)的提取及含量检测方法，该方法对样本中多种水溶性和脂溶性维生素萃取效率高，定量结果更准确。
[0007]本专利技术一方面提供了血液中多种维生素的提取方法，包括以下步骤：
[0008](1)利用干血采集系统获取血液，干燥制成干燥血样本；
[0009](2)将干燥血样本中的待测物经提取溶剂提取、纯化，进而得到待检测的维生素样品；
[0010]其中，所述提取溶剂为水与甲醇
‑
乙腈溶液的混合提取溶剂。
[0011]作为优选，步骤(1)中，所述干血采集系统为干血斑采集卡(DBS)或体积吸收微量采样器(VAMS)。
[0012]作为优选，步骤(1)中，所述干燥的时间为0.5
‑
4小时。
[0013]本专利技术通过提取溶剂及加入顺序的优化，可实现对干燥血样本中水溶性和脂溶性多种维生素的萃取，萃取效率高，定量结果更准确。
[0014]作为优选，步骤(2)中，所述甲醇
‑
乙腈溶液中，甲醇与乙腈的体积比为1:2
‑
2:1。
[0015]在本专利技术提供的一些实施例中，所述甲醇
‑
乙腈溶液中，甲醇与乙腈的体积比优选为1:1.5
‑
1.5:1。
[0016]作为优选，步骤(2)中，所述混合提取溶剂中，水与甲醇
‑
乙腈溶液的体积比为1
‑
2:2
‑
1。
[0017]为保证充分萃取，作为优选，步骤(2)中，所述提取溶剂的加入样本的顺序为先加入水，再加入甲醇
‑
乙腈溶液；
[0018]作为优选，样本中加入水后提取5
‑
30min，再加入甲醇
‑
乙腈溶液提取5
‑
30min；
[0019]作为优选，所述提取溶剂同时提取一个以上干燥血样本。
[0020]作为优选，步骤(2)中纯化的方式为离心，所述离心的时间为3
‑
10min。
[0021]本专利技术另一方面提供了血液中多种维生素的含量检测方法，包括步骤：
[0022](1)采用上述的血液中多种维生素的提取方法制备得到待检测的维生素样品；
[0023](2)将待检测的维生素样品用液相色谱
‑
质谱联用仪分析，采用内标法定量；
[0024]其中，所述液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以七氟丁酸
‑
甲酸水溶液为流动相A，以乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：
[0025][0026][0027]作为优选，所述流动相A中，七氟丁酸的质量浓度为0.05
‑
0.1％，甲酸的质量浓度为0.05
‑
0.1％。
[0028]在本专利技术提供的一些实施例中，所述流动相A中，七氟丁酸的质量浓度为0.05％，甲酸的质量浓度为0.1％。
[0029]作为优选，所述流速为0.4
‑
0.6mL/min；柱温为25
‑
45℃。
[0030]作为优选，所述质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子模式；检测方式：多反应监测MRM；气帘气压力：20
‑
50psi；离子喷雾电压：3000
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5500V；温度：300
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550℃；雾化气：30
‑
60psi；辅助加热气：30
‑
60psi。
[0031]本专利技术与现有技术相比，具有如下优点：
[0032]本专利技术提供了血液中多种维生素的提取及含量检测方法，将血液采用干血采集系统收集干燥血样本，采样过程简单，便于运输保存。
[0033]本专利技术采用的提取方法对干燥血样本中多种水溶性和脂溶性维生素的萃取效率高，并结合液相色谱
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串联质谱(LC
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MS)联用仪进行含量检测，该检测方法简单、快速、准确、以期为开展大样本的人群的疾病诊断和健康监测需要研究提供科学依据。
[0034]本专利技术通过对干血采集系统中多种水溶性和脂溶性维生素含量测定方法进行线性、精密度、耐用性试验(稳定性)、专属性试验(空白)、检出限、定量限、准确度(回本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）利用干血采集系统定量获取血液，干燥制成干燥血样本；（2）将干燥血样本中的待测物经提取溶剂提取、纯化，进而得到待检测的维生素样品；其中，所述提取溶剂为水与甲醇
‑
乙腈溶液的混合提取溶剂。2.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，所述干血采集系统为干血斑采集卡DBS或体积吸收微量采样器VAMS。3.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，所述干燥的时间为0.5
‑
4小时。4.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述甲醇
‑
乙腈溶液中，甲醇与乙腈的体积比为1:2
‑
2:1，优选为1:1.5
‑
1.5:1。5.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述提取溶剂中，水与甲醇
‑
乙腈溶液的体积比为1
‑
2:2
‑
1。6.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述提取溶剂加入样本的顺序为先加入水，再加入甲醇
‑
乙腈溶液，优选的，先加入水提取5
‑
30min，再加入甲醇
‑
乙腈溶液提取5
‑
30min。7.根据权利要求1所述的一种血液中多种维生素的提取方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，苏昭仑，贺瑞坤，张旭光，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：