一种太白贝母种子石蜡切片方法技术

本发明专利技术涉及植物领域，特别涉及一种太白贝母种子的石蜡切片。本方法采用材料为重庆市巫溪县种植的太白贝母种子，主要步骤包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、脱蜡、染色、脱水透明、封片、观片等。本发明专利技术在取材、脱水、透明、浸蜡等步骤中较常规石蜡切片进行了改良，能够较好的固定太白贝母种子细胞组织，切片完整，清晰，易于观察，操作简单，有利于开展太白贝母种质资源解剖结构的观察和研究，为研究太白贝母种子打破休眠的分子机制提供基础。础。础。

【技术实现步骤摘要】
一种太白贝母种子石蜡切片方法


[0001]本专利技术涉及一种植物种子石蜡切片方法，特别涉及一种太白贝母种子的石蜡切片方法。

技术介绍

[0002]太白贝母(Fritillariae cirrhosae bulbus)为百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaria)多年生草本植物，常分布于1600m以上的高海拔地区，其生育期极短，仅为100天左右，耐严寒，怕高温，为典型的高山适应植物类型。同时，太白贝母也是大宗常用中药材，以干燥鳞茎入药，被誉为“润肺圣药”，始载于《神农本草经》,有清热润肺、化痰止咳的功效, 是止咳化痰良药, 以太白贝母为原料的中成药达100种以上，以川贝枇杷膏、川贝止咳糖浆、蛇胆川贝液等止咳类药物制剂为典型代表。
[0003]太白贝母种子对萌发条件要求较高，具有休眠期长，萌发率低，发育不整齐等特性。大大限制了太白贝母有性生殖的成功率，从而导致林下天然更新苗严重缺乏。太白贝母育苗技术复杂，繁殖难度大，特别是用种子繁殖速度非常慢。因此，开展对太白贝母种子休眠与萌发的研究既具有学术价值，又具有一定的实际意义。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种太白贝母种子石蜡切片方法，其特征在于按如下步骤进行：（1）取材：取饱满无缺口的太白贝母种子作为材料，用流水冲洗干净；（2）固定：将种子材料用吸水纸吸干表面水分，剥去种皮，用刀片去除种胚周围多余胚乳，然后迅速放入盛有FAA固定液的容器中固定，4℃冰箱放置24
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27h；（3）脱水：取固定好的种子材料，而后从低到高依次经过盛有50%
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60%
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70%
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80%
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90%
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100%
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100%系列浓度乙醇溶液的容器进行梯度脱水，每个浓度的梯度脱水时间为30min；（4）透明：采用盛有无水乙醇和二甲苯混合液的容器进行逐级透明，无水乙醇与二甲苯的比例依次为：4∶1
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3∶2
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2∶3
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1∶4
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0∶5
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0∶5，每级透明时间为6h；（5）浸蜡：从种子材料透明彻底的容器中倒出1/2或2/3的二甲苯，然后将熔点为52
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54℃的石蜡碎屑加入容器中，一直加到二甲苯完全饱和，容器置于混合蜡液在40℃下浸蜡24h，之后再用混合石蜡在温箱中60℃保温浸蜡，每天换两次混合蜡液，浸蜡72h；混合蜡液由熔点为50
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52℃和熔点为58
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60℃的石蜡按重量比1∶1的比例融合而成；（6）包埋：种子材料浸蜡结束后马上用镊子转移到装有液态混合石蜡的纸盒中，调整好种子材料位置，再将纸盒放在盛有冰水的盆中迅速冷却，待蜡液表面凝固后，迅速倒扣纸盒沉入水中，然后让其自然漂浮于水中，防止产生结晶；（7）切片：根据种子材料在蜡块中的位置和方向，将蜡块修成梯形，然后粘到切片机的蜡台上进行切片得到蜡带，控制切片厚度为6
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8μm；（8）粘片：在洁净的载玻片上均匀薄涂一层质量体积比为2%的明胶，将蜡带放在载玻片上...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁艳丽，张晓玉，杨秋雄，张国武，韩俊，胡于琴，赵敏，王硕，杨和团，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：