一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液制造技术

本申请公开了一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液。本申请利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液，由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F

【技术实现步骤摘要】
一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液


[0001]本申请涉及成体干细胞保存
，特别是涉及一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液。

技术介绍

[0002]成体干细胞是指存在于各种分化组织中，具有自我更新、高度增值和多向分化潜能的尚未分化的干细胞。成体干细胞普遍采用低温保存，即分散于保存液中，在保存液的保护下进行低温冻存。
[0003]现有的成体干细胞低温保存液主要由二甲基亚砜和血清组成，虽然能够长期冻存；但是，一方面，二甲基亚砜本身对细胞具有损伤，长期冻存这种损伤作用会增强；另一方面，现有的保存液保存后，复苏过程中会导致干细胞损伤和分化潜能降低。
[0004]因此，如何避免或进一步减少低温冻存对成体干细胞的损伤，是本领域的研究重点。

技术实现思路

[0005]本申请的目的是提供一种新的利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液。
[0006]本申请采用了以下技术方案：
[0007]本申请公开了一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液，由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F
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12培养液、二甲基亚砜、人参皂苷和黄酮类化合物组成；血清和DMEM/F
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12培养液的体积比为1:1，二甲基亚砜的浓度为5
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8％，人参皂苷的浓度为5
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15μg/mL，黄酮类化合物的浓度为2
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6ng/mL。
[0008]需要说明的是，本申请的血清是取自成体干细胞物种来源的血清，优选同一个体来源的血清，能够更好的对成体干细胞进行保护；并且，本申请降低了二甲基亚砜的用量，通过血清、DMEM/F
‑
12培养液、二甲基亚砜、人参皂苷和黄酮类化合物的有机组合，能够更大程度的减少冻存和复苏过程中成体干细胞的损伤。
[0009]优选的，人参皂苷为人参皂苷Rh1、人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc中的至少一种。
[0010]优选的，本申请的利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液中，人参皂苷由人参皂苷Rh1，以及人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc中的一种或两种组成。
[0011]优选的，人参皂苷由人参皂苷Rh1、人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc组成，且三者的比例为人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1。
[0012]需要说明的是，本申请的利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液，原则上只要添加5
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15μg/mL人参皂苷即可；但是，研究发现，人参皂苷Rh1、aPPD和Rc三者的使用效果较好；尤其是Rh1，与aPPD和Rc的一种或两种的组合效果较佳，其中又以人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1的效果最佳。
[0013]优选的，黄酮类化合物为木犀草素、紫杉叶素和山奈酚中的至少一种。
[0014]本申请的有益效果在于：
[0015]本申请利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液，通过血清、DMEM/F
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12培养液、二甲基亚砜、人参皂苷和黄酮类化合物的有机组合，能够减少冻存和复苏过程中成体干细胞的损伤，提高细胞复苏的成活率，为成体干细胞冻存提供了一种新的方案。
具体实施方式
[0016]下面通过具体实施例对本申请进行详细说明。以下实施例仅用于对本申请进行说明，不应理解为对本申请的限制。
[0017]实施例
[0018]一、主要材料和仪器
[0019]人间充质干细胞(弗元生物，FY200001)，人血清(恒远生物，HY
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10069)，DMEM/F
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12培养液(赛默飞)，二甲基亚砜(分析纯1083196)，人参皂苷Rh1(春秋生物，CAS号:63223
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86
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9)，人参皂苷aPPD(春秋生物，CAS号:30636
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90
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9)，人参皂苷Rc(乐美天医药，CAS号:11021
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14
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0)，木犀草素(MCE，HY
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N0162)，紫杉叶素(MCE，HY
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N0136)，山奈酚(MCE，HY
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14590)。
[0020]二、成体干细胞低温保存冻存液配制
[0021]本例分别配制了不同配方的低温保存冻存液，具体如表1所示。
[0022]表1低温保存冻存液配方
[0023]编号DMEM/F
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12血清二甲基亚砜黄酮类化合物人参皂苷11mL1mL5％木犀草素5ng/mL15μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)21mL1mL8％紫杉叶素5ng/mL15μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)31mL1mL8％山奈酚5ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)41mL1mL8％紫杉叶素6ng/mL5μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)51mL1mL8％紫杉叶素4ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD＝2:1)61mL1mL8％紫杉叶素3ng/mL10μg/mL(Rh1:Rc＝2:1)71mL1mL8％紫杉叶素2ng/mL10μg/mL(Rh1)81mL1mL8％紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(aPPD)91mL1mL8％紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(Rc)101mL1mL8％紫杉叶素5ng/mL无111mL1mL8％无10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)121mL1mL无紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)131mL无8％紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)14无1mL8％紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)151mL1mL10％紫杉叶素5ng/mL10μg/mL(Rh1:aPPD:Rc＝2:1:1)
[0024]按照表1的配方，本例配制了15个低温保存冻存液，分别用于低温保存试验。
[0025]三、保存试验
[0026]细胞经1000rpm，10min离心倒掉上清液，用本例配制的低温保存冻存液重悬，装入无菌细胞冻存管中。
[0027]冻存方式为，4℃条件下放置1h，
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20℃放置2h，
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80℃放置10h，然后直接放入液氮中长期保存。本例在液氮中保存1周后，取出进行复苏试验。本例每个低温保存冻存液设计三个重复，复苏的活细胞率为三者的平均值。
[0028]细胞复苏方式为，冻存管从液氮取出后，在37℃水浴中摇晃至溶解，1500rp离心10min，弃上清，加入DMEM/F
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12培养液，在37℃、5％CO2培养箱中培养，台盼兰染色计数细胞活性率。
[0029]四、结果及分析
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液，其特征在于：由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F
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12培养液、二甲基亚砜、人参皂苷和黄酮类化合物组成；所述血清和DMEM/F
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12培养液的体积比为1:1，所述二甲基亚砜的浓度为5
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8％，所述人参皂苷的浓度为5
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15μg/mL，所述黄酮类化合物的浓度为2
‑
6ng/mL。2.根据权利要求1所述的成体干细胞低温保存冻存液，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐驰，陶勇，谢思思，李稳，黄坤城，
申请(专利权)人：深圳知因细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：