一种新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于化学免疫分析领域，具体涉及一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒；本发明专利技术的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1中含有ACES

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)抗原检测试剂盒


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)的主要结构蛋白包括核衣壳蛋白(N)、刺突蛋白(S)、胞膜蛋白(E)和囊膜蛋白(M)等，其中N蛋白是新型冠状病毒的核心成分，合成数量多，具有多个特异性抗原决定簇且稳定性高，所以，N蛋白是理想的抗原检测靶标，具有较高的检测敏感性和特异性。而S蛋白由S1、S2两个功能亚基组成，其中S1亚基关键结构域S1
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受体结合域(RBD)和/或S1
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N末端结构域(NTD)可与宿主细胞的ACE2受体结合，将病毒和宿主细胞的细胞膜融合，介导病毒进入宿主细胞。
[0003]目前，新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)检测方法有分子检测(如PCR核酸检测)、抗原检测、血清学(抗体)检测、免疫比浊法等，其中分子诊断诊断新冠感染的准确度高，但耗时长、成本相对高，且需要专业人员和工具；抗原检测可快速检测，操作简单、成本低，但灵敏度低；血清学(抗体)检测需在出现症状2周后结果比较可靠，可用于回顾分析，但可能有假阳性。
[0004]使用胶乳免疫比浊法检测也有报道，例如CN112730827A公开了一种新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括各自独立包装的试剂1与试剂2，试剂2至少包括包被有新冠蛋白的胶乳微粒，用于与被测样本中的新型冠状病毒抗体发生抗原抗体反应，以形成凝集使浊度改变并得到被测样本中的新型冠状病毒抗体含量，但是对于同时针对新型冠状病毒S蛋白和N蛋白的抗原检测并没有一种灵敏、稳定的检测方法。
[0005]因此寻找一种优化的胶乳增强免疫比浊法新型冠状病毒抗原检测试剂盒，在发挥胶乳增强免疫比浊法优势的同时，增强其检测精度和良好稳定性是亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，针对靶标为新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)的N蛋白和S蛋白，采用优化的胶乳增强免疫比浊法，并且通过改进胶乳颗粒制备工艺，使用新型胶乳颗粒增敏剂和胶乳颗粒稳定剂，科学配比，优化了反应体系，极大的提高了试剂的稳定性，显著增强了试剂的分析灵敏度和抗干扰能力。
[0007]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；
[0009]所述试剂R1包括如下含量的组分：
[0010]缓冲液A30～50mmol/L
[0011]胶乳颗粒增敏剂10～20mL/L
[0012]防腐剂0.3～0.5g/L；
[0013]所述试剂R2包括如下含量的组分：
[0014][0015][0016]所述防腐剂为碘丙炔醇丁基氨甲酸酯。
[0017]进一步的，所述R1试剂和所述R2试剂的体积比为3:1。
[0018]进一步的，试剂R1中，所述缓冲液A为25℃下pH＝6.85的ACES
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CABS缓冲液；试剂R2中，所述缓冲液B为25℃下pH＝7.05的ACES
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CABS缓冲液。
[0019]进一步的，试剂R1中，所述胶乳颗粒增敏剂的制备方法为：N,N
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二羟乙基
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N
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对十八烷基苯磺酰胺丙基铵基丙磺酸盐加入去离子水中，搅拌溶解，加入氯化钾、聚乙二醇10000，溶解，冷却，调节pH，最后加入胎牛血清、木糖醇，溶解后去离子水定容，得到胶乳颗粒增敏剂。
[0020]进一步的，试剂R2中，所述胶乳颗粒稳定剂的制备方法为：聚乙烯吡咯烷酮K90加入水中，搅拌溶解，冷却，加入麦芽糖醇、水苏糖、十一烯基单乙醇酰胺琥珀酸酯磺酸钠，搅拌溶解，调节pH，得到胶乳颗粒稳定剂。
[0021]进一步的，试剂R2中，鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液的制备步骤包括：
[0022](1)按体积比3～5：1～1.5，将112～125nm羧基胶乳颗粒的溶液混合266～305nm羧基胶乳颗粒的溶液，得混合液A；
[0023](2)混合液A加入pH值为7.05的ACES
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CABS缓冲液，搅拌混匀，振荡0.5～1h，得混合液B；
[0024](3)抗体稀释液稀释鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体，振荡12～15h，得到鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体稀释液，加入到混合液B中，得到混合液C；
[0025](4)在33～37℃下，向混合液C中加入EDC，振荡20～30min，得到混合液D；
[0026](5)20～25℃下，向混合液D中加入微球封闭剂，得到鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液。
[0027]进一步的，(1)中，按体积比3：1，将112nm羧基胶乳颗粒的溶液混合305nm羧基胶乳颗粒的溶液，得混合液A。
[0028]进一步的，(3)中，所述抗体稀释液包括如下含量的组分：0.1mL/L HEPES、1g/L BSA、9g/L NaCl、50g/L海藻糖、0.01g/L N
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月桂酰基
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N
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羟乙基乙二胺丙酸盐、1mL/L PC
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300；所述鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体稀释液的浓度为0.7～2.2mg/mL。
[0029]进一步的，(5)中，所述微球封闭剂包括如下含量的组分：1mL/L乙二胺、5g/L BSA、0.05ml/L TWEEN20、20g/L甘露醇、0.02g/L顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠。
[0030]进一步的，本专利技术的新型冠状病毒抗原检测试剂盒还可以配合全自动生化分析仪
检测新型冠状病毒，优选日立7180全自动分析仪，检测主波长为570nm，检测方法为终点法，本领域技术人员认为可行的全自动生化分析仪均在本专利技术的保护范围之内。
[0031]本专利技术的有益效果在于：
[0032]1)本专利技术的新型冠状病毒抗原检测试剂盒，采用优化的胶乳增强免疫比浊法，具体为：采用新型偶联缓冲体系和封闭体系，提高了抗体
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胶乳包被效率；针对新型冠状病毒两种不同的结构蛋白，选用了新型鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液和鼠抗新冠S蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液，科学配比各组分，具有良好的检测精度；
[0033]2)本专利技术新型冠状病毒抗原检测试剂盒可以有效检测新冠状病毒含量，具有灵敏度高，稳定性好、线性范围宽等优点。免疫法中以胶乳免疫比浊法制备的试剂盒可适用于全自动生化分析仪，实现自动化操作，血清样本无需进一步前处理步骤即可检测，出结果时间短，在10～15min内可出检测结果；
[0034]3)采用胶乳颗粒增敏剂，通过科学配比，极大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括如下含量的组分：缓冲液A30～50mmol/L胶乳颗粒增敏剂10～20mL/L防腐剂0.3～0.5g/L；所述试剂R2包括如下含量的组分：所述防腐剂为碘丙炔醇丁基氨甲酸酯。2.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和所述试剂R2的体积比为3:1。3.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，所述缓冲液A为25℃下pH＝6.85的ACES
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CABS缓冲液；试剂R2中，所述缓冲液B为25℃下pH＝7.05的ACES
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CABS缓冲液。4.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，所述胶乳颗粒增敏剂的制备方法为：N,N
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二羟乙基
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N
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对十八烷基苯磺酰胺丙基铵基丙磺酸盐加入去离子水中，搅拌溶解，加入氯化钾、聚乙二醇10000，溶解，冷却，调节pH，最后加入胎牛血清、木糖醇，溶解后去离子水定容，得到胶乳颗粒增敏剂。5.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中，所述胶乳颗粒稳定剂的制备方法为：聚乙烯吡咯烷酮K90加入水中，搅拌溶解，冷却，加入麦芽糖醇、水苏糖、十一烯基单乙醇酰胺琥珀酸酯磺酸钠，搅拌溶解，调节pH，得到胶乳颗粒稳定剂。6.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中，鼠抗新冠N蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液或鼠抗新冠S蛋白单克隆抗体包被的胶乳溶液的制备步骤包括：(1)按体积比3～5：1～1.5，将112～125nm羧基胶乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志明，谢清华，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：