一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法技术

一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，包括以下步骤:1）粉碎：将胀果甘草的根和茎部位使用破碎机进行粉碎；2）去甘草酸：将粉碎的胀果甘草粉末与溶剂、纤维素酶共同混合后进行提取，提取后分离，得到去甘草酸的草渣；3）提取：向去酸草渣加入乙醚溶剂萃取；4）分离：将步骤3）得到的萃取液采用梯度pH萃取法，分离水层和乙醚层，收集并混合水相滴加盐酸进行酸化处理，得到酸化液；5）结晶：抽滤得到沉淀，溶剂洗涤两遍后，干燥，即得到甘草查尔酮A纯品。本申请提供的甘草查尔酮A制备方法，步骤简单，成本低，且提取率高，适合大规模工业化生产。适合大规模工业化生产。适合大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法


[0001]本专利技术属于中药提取
，尤其涉及一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法。

技术介绍

[0002]胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat）为豆科（Leguminosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国传统中药，其地下部分为名贵药材。它分布非常广泛，在我国的西北、东北以及华北地区均有分布，具有抗寒、抗盐碱、耐热、耐旱等优良特性。富含多种营养成分，包括蛋白质、氨基酸、多糖、脂肪、以及维生素C等。在医药以及化妆品领域具有十分重要的作用。
[0003]甘草查尔酮A是胀果甘草中所含有的一种特异性异黄酮成分，其含量约为0.4%。据报道，陈向荣等采用自由基清除法对其进行抗氧化能力的研究显示，其清除自由基的百分比呈剂量依赖性，并且当甘草查尔酮A浓度为64μg/mL时，显示了甘草查尔酮A的最佳抗氧化能力。崔永明等以二甲苯所致的小鼠耳肿胀和角叉菜胶所致的大鼠足肿胀研究了甘草查尔酮A的抗炎效果，结果表明甘草查尔酮A（5、10 mg/kg）能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀。Ewelina Szliszka 等通过TRALL检测甘草查尔酮A对前列腺癌细胞的细胞凋亡的作用和细胞毒性，结果显示甘草查尔酮A能显著增强介导细胞的凋亡、细胞毒作用，在前列腺癌细胞证实了甘草查尔酮A在化学预防前列腺癌的重要作用。Jiazhang Qiu 等在研究中通过免疫印迹检查、肿瘤坏死因子的释放实验、小鼠T细胞增殖实验、实时逆转录聚合酶链反应用来评估抑菌浓度的甘草查尔酮A对由金黄色葡萄球菌分泌的两个主要物质（SEA 和 SEB）的抑制效果，实验结果显示：甘草查尔酮A可以显著减少用以抑制甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分泌SEA和SEB的用药剂量。综上所述，甘草查尔酮A具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性，可广泛应用于化妆品、药品等行业领域。
[0004]甘草黄酮类化合物的研究中，其提取分离纯化部分是难点，找到最优的提取方法，才能实现其重要价值。目前，甘草查尔酮A的提取分离主要有柱色谱法、制备色谱法、高速逆流法、生物合成法等。柱色谱法是目前最常用的方法，但目前所用的柱层析方法需要多次柱层析分离才能得到较高纯度的样品，操作时间以及生产周期长，且成本较高。如何降低提取成本，且满足工业化生产的制备工艺成为现阶段亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，以解决甘草查尔酮A生产周期长、提取率低、设备要求高、无法大规模工业化生产的技术问题。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术的一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的具体技术方案如下：1）粉碎：将胀果甘草的根和茎部位使用破碎机进行粉碎；2）去甘草酸：将粉碎的胀果甘草粉末与溶剂、纤维素酶共同混合后在一定温度下
进行提取，提取后分离，得到去甘草酸的草渣；3）提取：向去酸草渣加入乙醚溶剂萃取；4）分离：将步骤3）得到的萃取液采用梯度pH萃取法，分离水层和乙醚层，收集并混合水相滴加盐酸进行酸化处理，得到酸化液；5）结晶：抽滤得到沉淀，溶剂洗涤两遍后，干燥，即得到甘草查尔酮A纯品。
[0007]优选的，步骤2）中甘草粉末与溶剂的料液比为1：10
‑
1：15。
[0008]优选的，步骤2）中提取方法可采用加入溶剂、纤维素酶混合均匀后在20
‑
30度的条件下进行提取2小时，也可采用加入溶剂、纤维素酶混合均匀后在25度的条件下进行提取半小时后，再升高温度至40度进行提取1小时。
[0009]优选的，步骤2）中所述的溶剂为水、5%甲醇溶液、5%乙醇溶液。
[0010]优选的，步骤2）中所述的甘草粉末：纤维素酶的比例为200：1
‑
400：1。
[0011]优选的，步骤3）中所述的乙醚溶剂添加量比例为去酸草渣：乙醚=1：4
‑
1：8。
[0012]优选的，步骤4）中所述的pH萃取法为向乙醚萃取液中加入碱性试剂，然后分离水层和乙醚层，并收集水相。
[0013]优选的，步骤4）中所述的梯度pH萃取法中反复萃取3次以上。
[0014]优选的，步骤4）中所述的梯度pH萃取法所用碱性试剂为5%的NaHCO3水溶液、5%的Na2CO3，2%的NaOH，4%的NaOH中的一种或几种。
[0015]优选的，步骤4）中所述的酸化条件pH为4.0
‑
4.5。
[0016]优选的，步骤5）中所述的洗涤溶剂为水、丙酮溶液。
[0017]本专利技术从胀果甘草中提取的甘草查尔酮A的方法具有以下优点：（1）甘草中含有大量甘草酸，呈粘稠胶冻状，此外还含有其它水溶性杂质及蛋白质和植物多糖等，对制备甘草查尔酮A产生较大干扰。本专利技术申请中在进行提取前先对以上干扰物质进行去除，采用酶解法对进行蛋白质、多糖以及甘草酸的去除，从而使后续提取工艺更加方便快捷，提取效率提高了30%。
[0018]（2）分离过程采用梯度pH萃取法对提取液进行分离，兼具提取和分离两个过程，操作方法简单，且不需要特殊的仪器设备，降低了生产成本和时间成本，更加方便大规模工业化生产。
[0019]（3）采用本专利技术工艺可将甘草中含量 0.4％左右的甘草查尔酮A浓缩至纯度为98％及以上。
[0020]（4）本专利技术方法操作简单，重现性好，其工艺较容易形成标准化操作，可以保证甘草查尔酮A制备的稳定性。
附图说明
[0021]图1为本专利技术的甘草查尔酮A工艺示意图；图2为实施例与对比例1、对比例2得率对比图；图3为实施例与对比例1、对比例2纯度对比图；图4为实施例与对比例3得率与纯度对比图；图5为实施例4中TLC检测色谱图：1为甘草查尔酮A标准品，2为Na2CO3萃取样品，3为NaOH萃取样品。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。
[0023]应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0024]实施例中，如无特别说明，所用手段均为本领域常规的手段。
[0025]本文中所用的术语“包含”、“包括”或其任何其它变形，意在覆盖非排他性的包括。例如，包括所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0026]此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0027]本专利技术实施例所用的试剂盒仪器均为市售产品。
[0028]本专利技术中甘草查尔酮A纯度检测采用高效液相色谱法进行检测，色谱检测条件采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，其特征在于，1）粉碎：将胀果甘草的根和茎部位使用破碎机进行粉碎；2）去甘草酸：将粉碎的胀果甘草粉末与溶剂、纤维素酶共同混合后进行提取，提取后分离，得到去甘草酸的草渣；3）提取：向去酸草渣加入乙醚溶剂萃取；4）分离：将步骤3）得到的萃取液采用梯度pH萃取法，分离水层和乙醚层，收集并混合水相滴加盐酸进行酸化处理，得到酸化液；5）结晶：抽滤得到沉淀，溶剂洗涤两遍后，干燥，即得到甘草查尔酮A纯品。2.根据权利要求1所述的一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，其特征在于， 步骤4）中所述的pH萃取法为向乙醚萃取液中加入碱性试剂。3.根据权利要求2所述的一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，其特征在于，所述的梯度pH萃取法中反复萃取2次以上。4.根据权利要求2所述的一种从胀果甘草中制备高纯度甘草查尔酮A的方法，其特征在于，所述的梯度pH萃取法所用碱性试剂为5%的NaHCO...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨春雨，王培培，郑春阳，
申请(专利权)人：守正创新生物科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：