一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法技术

本发明专利技术提供一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，包括以下步骤：收集新鲜虎杖的茎，对其进行愈伤诱导，形成愈伤组织；对所述愈伤组织进行匀浆处理后得到浆液，往所述浆液中加入果胶酶和纤维素酶进行酶解，得到酶解液；将所述酶解液加入提取液后，在超声条件下进行提取得到粗体液，将所述粗体液浓缩后，得到白藜芦醇提取液；将所述白藜芦醇提取液采用进行柱层析，得到所述白藜芦醇。本发明专利技术中，通过诱导新鲜虎杖的茎部成为愈伤组织，可以随时取用新鲜的虎杖。同时，采用了酶解的方式使外植体和愈伤组织中的成分充分释放，辅助超声进行提取，提高提取效率，最后采用柱层析的方式提高产物纯度；本方法白藜芦醇的提取效率高，产物纯度高。纯度高。纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法


[0001]本专利技术属于药物提纯领域，具体涉及一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法。

技术介绍

[0002]有关于从天然植物中提取白藜芦醇成为被广泛的应用在白藜芦醇制备中，而虎杖成为提取白藜芦醇的最为广泛的原料。
[0003]现有的研究发现，随着虎杖的储藏时间越久，其白藜芦醇的含量越低，致使其提纯不能获得较高产率，而新鲜虎杖意味着随摘随用，其运输保存难度较大，因此难以进行工业化的生长。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，旨在实现新鲜虎杖在提取白藜芦醇的工业中应用难度大的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术主要提供一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，包括以下步骤：
[0006]步骤S10:收集新鲜虎杖的茎，对其进行愈伤诱导，形成愈伤组织；
[0007]步骤S20:对所述愈伤组织进行匀浆处理后得到浆液，往所述浆液中加入果胶酶和纤维素酶进行酶解，得到酶解液；
[0008]步骤S30:将所述酶解液加入提取液后，在超声条件下进行提取得到粗体液，将所述粗体液浓缩后，得到白藜芦醇提取液；
[0009]步骤S40:将所述白藜芦醇提取液采用进行柱层析，得到所述白藜芦醇。
[0010]可选地，所述步骤S10包括：
[0011]步骤S101：收集生长时间为3个月的新鲜虎杖的茎，切断后，进行消毒；
[0012]步骤S102：将消毒后的茎段置于含有激素的培养基中，在暗光条件下诱导后，再于光下培养，得到所述愈伤组织。
[0013]可选地，所述步骤S20中，加入所述纤维素酶的质量为所述浆液质量的0.2％～0.8％；和/或，
[0014]加入所述果胶酶的质量为所述浆液质量0.5％～1％。
[0015]可选地，所述提取液包括体积比为1：(0.5～1)的N,N
‑
二甲基甲酰胺和乙醇。
[0016]可选地，所述步骤S30包括：
[0017]步骤S301：将所述酶解液加入提取液后，在超声条件下进行提取，收集液体后，得到所述粗提液；
[0018]步骤S302：重复所述步骤S301 2～4次，并将每次得到的所述粗体液合并后，进行浓缩，得到所述白藜芦醇提取液。
[0019]可选地，所述酶解液与所述提取液的质量比为1：(5～10)。
[0020]可选地，在所述步骤S30中，所述超声的功率为200W～300W；和/或，
[0021]所述提取的时间为3小时～4小时。
[0022]可选地，所述步骤S40包括：
[0023]步骤S401:将所述白藜芦醇提取液中，加入乙酸乙酯，萃取后，收集有机相；
[0024]步骤S402:将所述有机相采用氧化铝层析柱进行所述柱层析，收集产物，得到所述白藜芦醇。
[0025]可选地，所述步骤S20中，所述酶解的pH为3.5～5；和/或，
[0026]所述酶解的温度为45℃～55℃；和/或，
[0027]所述酶解的时间为5小时～8小时。
[0028]本专利技术中，通过诱导新鲜虎杖的茎部成为愈伤组织，可以随时取用新鲜的虎杖。同时，采用了酶解的方式使外植体和愈伤组织中的成分充分释放，辅助超声进行提取，提高提取效率，最后采用柱层析的方式提高产物纯度；本方法白藜芦醇的提取效率高，产物纯度高。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0030]图1为本专利技术一实施例的制备流程图。
[0031]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0033]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]鉴于现有技术从新鲜虎杖中提取白藜芦醇在工业上难以实现的技术问题，本专利技术提供一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，包括以下步骤：
[0035]步骤S10:收集新鲜虎杖的茎，对其进行愈伤诱导，形成愈伤组织；
[0036]步骤S20:对所述愈伤组织进行匀浆处理后得到浆液，往所述浆液中加入果胶酶和纤维素酶进行酶解，得到酶解液；
[0037]步骤S30:将所述酶解液加入提取液后，在超声条件下进行提取得到粗体液，将所述粗体液浓缩后，得到白藜芦醇提取液；
[0038]步骤S40:将所述白藜芦醇提取液采用进行柱层析，得到所述白藜芦醇。
[0039]本专利技术中，通过诱导新鲜虎杖的茎部成为愈伤组织，可以随时取用新鲜的虎杖。同时，采用了酶解的方式使外植体和愈伤组织中的成分充分释放，辅助超声进行提取，提高提取效率，最后采用柱层析的方式提高产物纯度；本方法白藜芦醇的提取效率高，产物纯度高。
[0040]在一些实施例中，所述步骤S10包括：
[0041]步骤S101：收集生长时间为3个月的新鲜虎杖的茎，切断后，进行消毒；
[0042]步骤S102：将消毒后的茎段置于含有激素的培养基中，在暗光条件下诱导后，再于光下培养，得到所述愈伤组织。
[0043]通过本专利技术研究团队发现，通过提取虎杖茎中的白藜芦醇，可以有效的提高产量。
[0044]在一些实施例中，所述步骤S20中，加入所述纤维素酶的质量为所述浆液质量的0.2％～0.8％，加入所述果胶酶的质量为所述浆液质量0.5％～1％。
[0045]需要说明的是，加入纤维素酶和果胶酶主要用于充分释放外植体中的白藜芦醇，使外植体与愈伤组织中的白藜芦醇均可进行利用。而通过研究发现，纤维素酶和果胶酶以上述含量加入时，可以在提高白藜芦醇含量的同时，进一步的提高酶的利用率。
[0046]需要说明的是，所述步骤S20中，所述酶解的pH可以根据酶解效果进行调节，具体地为3.5～5时，其酶解效率更佳；需要说明的是，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S10:收集新鲜虎杖的茎，对其进行愈伤诱导，形成愈伤组织；步骤S20:对所述愈伤组织进行匀浆处理后得到浆液，往所述浆液中加入果胶酶和纤维素酶进行酶解，得到酶解液；步骤S30:将所述酶解液加入提取液后，在超声条件下进行提取得到粗体液，将所述粗体液浓缩后，得到白藜芦醇提取液；步骤S40:将所述白藜芦醇提取液采用进行柱层析，得到所述白藜芦醇。2.如权利要求1所述的从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，其特征在于，所述步骤S10包括：步骤S101：收集生长时间为3个月的新鲜虎杖的茎，切断后，进行消毒；步骤S102：将消毒后的茎段置于含有激素的培养基中，在暗光条件下诱导后，再于光下培养，得到所述愈伤组织。3.如权利要求1所述的从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，其特征在于，所述步骤S20中，加入所述纤维素酶的质量为所述浆液质量的0.2％～0.8％；和/或，加入所述果胶酶的质量为所述浆液质量0.5％～1％。4.如权利要求1所述的从新鲜虎杖中分离纯化白藜芦醇的方法，其特征在于，所述提取液包括体积比为1：(0.5～1)的N,N
‑
二甲基甲酰胺和乙醇。...

【专利技术属性】
技术研发人员：车发展，车驰，郭允启，白晨艳，游世娟，
申请(专利权)人：东明格鲁斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：