一种检测血清DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测血清DNA的方法，包括以下步骤：S1、包被：用包被缓冲液将单克隆抗体浓度稀释；S2、封闭：加入封闭液，1h后用缓冲液洗涤；S3、抗原抗体反应：封闭完成后，相应的反应管中加入标准品或检测样品；S4、抗体结合：抗原抗体反应完成后，每个反应管加入抗体；S5、链亲和素结合：抗体结合完成后，每个反应管加入链亲和素；S6、DNA结合：链亲和素结合完成后，每个反应管加入DNA；S7、实时荧光定量PCR反应：以洗涤完成后每个反应管所得DNA为模板分别进行实时荧光定量PCR反应；S8、确定检测样品的DNA含量。通过上述方式，本发明专利技术能够为肿瘤患者血清学诊断和治疗前后的连续检测、预后，提供实验检测依据。实验检测依据。

【技术实现步骤摘要】
一种检测血清DNA的方法


[0001]本专利技术属于血清学检测
，特别是涉及一种检测血清DNA的方法。

技术介绍

[0002]血清或血浆cfDNA的大小在166bp左右，其释放入血的生物机制尚未被完全揭示，目前认为主要来自细胞凋亡，其他来源包括坏死肿瘤细胞的溶解、白细胞的分解、新合成核酸的自主释放、细菌病毒等病原体的分解等。cfDNA在血液与蛋白质或膜结合颗粒形成天然复合物，能抵抗核酸酶的降解。正常健康人群的cfDNA水平较低，一般在0～100ng/mL，但在某些病理情况下会显著升高，比如恶性肿瘤、手术和创伤、中风、心衰、自身免疫性疾病、胰腺炎、重症监护相关状况、运动员大量训练后等。癌症患者与健康个体相比有较高的cfDNA水平。这些升高的cfDNA主要来自癌细胞。近年来，随着DNA提取、检测、测序等分子生物学技术发展，使得cfDNA的研究取得了长足进步，与疾病之间的关系逐渐被揭示出来。cfDNA作为生物标志物，在疾病筛查、诊断、治疗监控、预后、疾病复发等方面具有广泛应用。

技术实现思路

[0003]本专利技术主要解决的技术问题是提供一种检测血清DNA的方法，为肿瘤患者血清学诊断和治疗前后的连续检测、预后，提供实验检测依据。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种检测血清DNA的方法，包括以下步骤：
[0005]S1、包被：用包被缓冲液将单克隆抗体浓度稀释至10μg/ml，然后加入到实时荧光定量PCR反应管中，每个反应管加入30μl，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0006]S2、封闭：加入封闭液，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0007]S3、抗原抗体反应：封闭完成后，相应的反应管中加入30μl的标准品或检测样品，4℃过夜，弃去液体，然后用缓冲液洗涤；
[0008]S4、抗体结合：抗原抗体反应完成后，每个反应管加入30μl的抗体，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0009]S5、链亲和素结合：抗体结合完成后，每个反应管加入30μl的链亲和素，37℃，30min，缓冲液洗涤；
[0010]S6、DNA结合：链亲和素结合完成后，每个反应管加入30μl的DNA，37℃，30min后用缓冲液洗涤；
[0011]S7、实时荧光定量PCR反应：以洗涤完成后每个反应管所得DNA为模板分别进行实时荧光定量PCR反应；
[0012]S8、确定检测样品的DNA含量：根据标准曲线，按照每孔检测样品的循环数确定其DNA含量。
[0013]进一步地说，步骤S7中的PCR反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性45s，60℃退火30s，72℃延伸30s；35～40个循环结束后于72℃延伸10分钟。
[0014]进一步地说，步骤S2中的封闭液为5mg/ml BSA。
[0015]进一步地说，步骤S2中的所述的标准品为梯度浓度稀释的抗体标准品；所述的检测样品为待测血清。
[0016]本专利技术的有益效果是：本专利技术能够为肿瘤患者血清学诊断和治疗前后的连续检测、预后，提供实验检测依据。
具体实施方式
[0017]下面对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0018]实施例：一种检测血清DNA的方法，本专利技术包括以下步骤：
[0019]S1、包被：用包被缓冲液将单克隆抗体浓度稀释至10μg/ml，然后加入到实时荧光定量PCR反应管中，每个反应管加入30μl，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0020]S2、封闭：加入封闭液，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0021]S3、抗原抗体反应：封闭完成后，相应的反应管中加入30μl的标准品或检测样品，4℃过夜，弃去液体，然后用缓冲液洗涤；
[0022]S4、抗体结合：抗原抗体反应完成后，每个反应管加入30μl的抗体，37℃，1h后用缓冲液洗涤；
[0023]S5、链亲和素结合：抗体结合完成后，每个反应管加入30μl的链亲和素，37℃，30min，缓冲液洗涤；
[0024]S6、DNA结合：链亲和素结合完成后，每个反应管加入30μl的DNA，37℃，30min后用缓冲液洗涤；
[0025]S7、实时荧光定量PCR反应：以洗涤完成后每个反应管所得DNA为模板分别进行实时荧光定量PCR反应；
[0026]S8、确定检测样品的DNA含量：根据标准曲线，按照每孔检测样品的循环数确定其DNA含量。
[0027]步骤S7中的PCR反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性45s，60℃退火30s，72℃延伸30s；35～40个循环结束后于72℃延伸10分钟。
[0028]步骤S2中的封闭液为5mg/ml BSA。
[0029]步骤S2中的所述的标准品为梯度浓度稀释的抗体标准品；所述的检测样品为待测血清。
[0030]以上所述仅为本专利技术的实施例，并非因此限制本专利技术的专利范围，凡是利用本专利技术说明书所作的等效结构变换，或直接或间接运用在其他相关的
，均同理包括在本专利技术的专利保护范围内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血清DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、包被：用包被缓冲液将单克隆抗体浓度稀释至10μg/ml，然后加入到实时荧光定量PCR反应管中，每个反应管加入30μl，37℃，1h后用缓冲液洗涤；S2、封闭：加入封闭液，37℃，1h后用缓冲液洗涤；S3、抗原抗体反应：封闭完成后，相应的反应管中加入30μl的标准品或检测样品，4℃过夜，弃去液体，然后用缓冲液洗涤；S4、抗体结合：抗原抗体反应完成后，每个反应管加入30μl的抗体，37℃，1h后用缓冲液洗涤；S5、链亲和素结合：抗体结合完成后，每个反应管加入30μl的链亲和素，37℃，30min，缓冲液洗涤；S6、DNA结合：链亲和素结合完成后，每个反应管加入30μl的DNA，37℃，30min后用缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱润芝，王海波，梁聚芳，潘燕，杨宏伟，
申请(专利权)人：昆山美卡生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：