靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用及其研究方法技术

本发明专利技术公开了靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用及其研究方法，所述研究方法包括以下步骤，S1：从宿主细胞和肿瘤微环境两个角度分析乙肝感染促进肝癌进展的分子机理；S2：根据步骤S1的研究结果，确定ATX分子在调控乙肝阳性肝癌进展中的作用；S3：实验验证靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的作用。本发明专利技术利用酶及其底物分别来源于肝癌细胞及基质细胞，而酶促产物是最终的促肿瘤生长效应分子，从肿瘤细胞和肿瘤微环境两个方面以及两者相互作用的角度分析靶向ATX在调控乙肝相关肝癌进展中的作用，从而有望将靶向ATX开发成针对治疗乙肝阳性肝癌病人的分子靶向药物。癌病人的分子靶向药物。癌病人的分子靶向药物。

【技术实现步骤摘要】
靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用及其研究方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用及其研究方法。

技术介绍

[0002][0003]分子靶向药物是利用肿瘤细胞与正常细胞之间分子生物学上的差异(包括基因、酶、信号转导等不同特性)，抑制肿瘤细胞的生长增殖，最后使其死亡。分子靶向治疗比目前的化疗更为有效、副作用更小，是非常有希望的一种肿瘤治疗方法。例如:表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼主要用于治疗肺癌，利妥昔单抗主要用于治疗非霍奇金淋巴瘤，曲妥珠单抗用于治疗乳腺癌等，但目前并没有针对治疗肝癌，特别是乙肝相关肝癌的分子靶向药物，究其原因主要是对乙肝感染导致肝癌发生和发展的机制还不够了解，且过往关于乙肝感染在肝癌进展中的作用研究通常聚焦在宿主细胞本身，研究思路和角度比较局限和单一。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的问题，本专利技术旨在提供一种靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用及其研究方法，利用酶及其底物分别来源于肝癌细胞及基质细胞，而酶促产物是最终的促肿瘤生长效应分子，从肿瘤细胞和肿瘤微环境两个方面以及两者相互作用的角度分析靶向ATX 在调控乙肝相关肝癌进展中的作用，从而有望将靶向ATX开发成针对治疗乙肝阳性肝癌病人的分子靶向药物。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用，其特征在于：靶向分子ATX通过抑制肝癌细胞增殖及肝星状细胞活性发挥功能，实现对乙肝阳性肝癌细胞生长的抑制。
[0007]进一步的，靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，其特征在于，包括以下步骤，
[0008]S1：从宿主细胞和肿瘤微环境两个角度分析乙肝感染促进肝癌进展的分子机理；
[0009]S2：根据步骤S1的研究结果，确定ATX分子在调控乙肝阳性肝癌进展中的作用；
[0010]S3：实验验证靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的作用。
[0011]进一步的，步骤S1的具体操作包括以下步骤，
[0012]S101：对临床样本进行分析，明确乙肝感染与肝癌复发的关系；
[0013]S102：免疫组化研究分析ATX的表达分泌与乙肝感染的关系；
[0014]S103：体外细胞及分子实验研究分析乙肝感染与宿主细胞表达分泌ATX的关系，以及乙肝感染与肝星状细胞活化之间的关系；
[0015]S104：研究分析肝癌细胞表达分泌的ATX与活化的肝星状细胞分泌出来的LPC形成的酶促产物与肝癌进展之间的关系。
[0016]进一步的，步骤S102的具体操作包括以下步骤，
[0017]S1021：对肝癌病人肿瘤组织样本进行ATX免疫组化染色；
[0018]S1022：调取肝癌病人临床信息，结合ATX免疫组化染色结果，分析ATX的表达分泌与乙肝感染之间的关系。
[0019]进一步的，步骤S103的具体操作包括以下步骤，
[0020]S1031：用肝癌细胞系HepG2作为母本细胞，通过细胞转染试验获得能够稳定表达乙肝全基因组的肝癌细胞系，命名为HepG2
‑
HBV；
[0021]S1032：对肝癌细胞系HepG2和HepG2
‑
HBV进行细胞培养，细胞培养稳定后收集细胞裂解液及细胞培养上清，通过SDS
‑
PAGE变性电泳及蛋白免疫印记试验检测两种细胞中ATX的表达和分泌情况；
[0022]S1032：分别使用肝癌细胞系HepG2和HepG2
‑
HBV的细胞培养上清刺激肝星状细胞LX
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2，然后通过蛋白免疫印迹试验检测不同处理后LX
‑
2胞内活化因子a
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SMA的表达水平。
[0023]进一步的，步骤S104的具体操作包括以下步骤，
[0024]S1041：选取活化的肝星状细胞LX
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2及两株肝癌细胞系HepG2 和Huh7作为对照，用不含游离脂肪酸的血清培养基对三株细胞进行培养，培养48小时后收集细胞培养上清进行脂质含量检测；
[0025]S1042：根据步骤S1041的检测结果，确定肿瘤微环境中ATX酶促底物LPC的主要来源为活化的肝星状细胞LX
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2；
[0026]S1043：对肝癌细胞表达分泌的ATX与活化的肝星状细胞分泌出来的LPC形成的酶促产物LPA与肝癌进展之间的关系进行理论分析。
[0027]进一步的，步骤S3的具体操作包括以下步骤，
[0028]S301：使用ATX小分子抑制剂进行肝癌细胞功能学实验；
[0029]S302：通过体外细胞实验和裸鼠体内荷瘤实验证明ATX小分子抑制剂对乙肝阳性肝癌细胞增殖的抑制作用。
[0030]本专利技术的有益效果是：
[0031]本专利技术中提出的靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，通过从肿瘤细胞和肿瘤微环境两个方面以及二者之间相互作用的角度分析ATX分子在调控乙肝阳性肝癌进展中的作用，利用分析研究结果得出ATX可以作为乙肝阳性肝癌的分子药物开发靶点；在此基础上，通过使用ATX小分子抑制剂，进行肿瘤细胞功能学实验和裸鼠体内荷瘤实验证明ATX不仅可以通过自分泌的方式促进肝癌细胞的增殖，还可以和活化的肝星状细胞协同促进肝癌的进展，进一步的证明ATX作为治疗靶点的可靠性，从而使得本专利技术为乙肝阳性肝癌的抗肿瘤治疗提供新的药物研发方向。
附图说明
[0032]图1为本专利技术中对临床样本进行分析，得出的肝癌患者无瘤生存曲线。
[0033]图2为本专利技术中乙肝阳性肝癌患者和乙肝阴性肝癌患者ATX表达分布情况代表图。
[0034]图3为本专利技术中体外细胞实验中HepG2
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HBV和HepG2细胞裂解液及细胞培养上清中ATX表达分泌水平。
[0035]图4为本专利技术中使用肝癌细胞系HepG2和HepG2
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HBV的细胞培养上清刺激肝星状细
胞LX
‑
2后LX
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2胞内活化因子a
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SMA的表达水平检测结果。
[0036]图5为本专利技术中活化的肝星状细胞LX
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2及肝癌细胞系HepG2和 Huh7培养上清质谱分析结果中六种LPC的表达水平。
[0037]图6为本专利技术中ATX通过水解LPC产生具有生物活性的LPA示意图。
[0038]图7为本专利技术中ATX在调控乙肝阳性肝癌进展中的作用原理图。
[0039]图8为本专利技术中ATX小分子抑制剂的肿瘤细胞功能学实验结果。
[0040]图9为本专利技术中乙肝稳转体系HepG2
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HBV、活化肝星状细胞LX
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2、及ATX小分子抑制剂对肝癌细胞的肿瘤学功能影响。
[0041]图10为本专利技术中ATX小分子抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的应用，其特征在于：靶向分子ATX通过抑制肝癌细胞增殖及肝星状细胞活性发挥功能，实现对乙肝阳性肝癌细胞生长的抑制。2.靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，其特征在于，包括以下步骤，S1：从宿主细胞和肿瘤微环境两个角度分析乙肝感染促进肝癌进展的分子机理；S2：根据步骤S1的研究结果，确定ATX分子在调控乙肝阳性肝癌进展中的作用；S3：实验验证靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中的作用。3.根据权利要求2所述的靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，其特征在于，步骤S1的具体操作包括以下步骤，S101：对临床样本进行分析，明确乙肝感染与肝癌复发的关系；S102：免疫组化研究分析ATX的表达分泌与乙肝感染的关系；S103：体外细胞及分子实验研究分析乙肝感染与宿主细胞表达分泌ATX的关系，以及乙肝感染与肝星状细胞活化之间的关系；S104：研究分析肝癌细胞表达分泌的ATX与活化的肝星状细胞分泌出来的LPC形成的酶促产物与肝癌进展之间的关系。4.根据权利要求3所述的靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，其特征在于，步骤S102的具体操作包括以下步骤，S1021：对肝癌病人肿瘤组织样本进行ATX免疫组化染色；S1022：调取肝癌病人临床信息，结合ATX免疫组化染色结果，分析ATX的表达分泌与乙肝感染之间的关系。5.根据权利要求4所述的靶向分子ATX在乙肝阳性肝癌中应用的研究方法，其特征在于，步骤S103的具体操作包括以下步骤，S1031：用肝癌细胞系HepG2作为母本细胞，通过细胞转染试验获得能够稳定表达乙肝全基因组的肝癌细胞系，命名为HepG2
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HB...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓万玉，陈富，杨思俊，
申请(专利权)人：上饶师范学院，
类型：发明
国别省市：