一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示(AF330262：map＝"20q12

【技术实现步骤摘要】
一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒


[0001]本专利技术涉及试剂盒领域，具体是一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒。

技术介绍

[0002]近年来，可怕的癌症步步逼近我们，对于女性来说，除了乳腺癌之外，妇科肿瘤也日渐高发，其中卵巢癌就是个典型代表。据调查，在所有妇科肿瘤中，卵巢癌占到了23％，死亡率却占到了47％。卵巢体积虽小，却是肿瘤最多发的器官。卵巢癌早期无症状，加上卵巢深居盆腔内，发生肿瘤不易被早期发现，目前临床确诊的患者有70％已是晚期，且死亡率高达70％以上。因此，妇科临床更应该对其进行深入了解和研究，建立更早期、更准确的临床早期筛查手段，以便捕捉到任何卵巢癌病变前期的蛛丝马迹，进而能够及早发现及早治疗。
[0003]目前卵巢癌诊断的常用生物标记物是癌抗原125(cancer antigen 125，CA125)，但是这一肿瘤标记物在卵巢癌早期诊断中检出率不高，敏感度与特异度不够。科学家急需找到更合适的肿瘤标记物，而人附睾蛋白4(HE4)被发现后应运而生，HE4编码基因最早是由Kichhoff等人于1991年从附睾上皮远端分离出来，位于染色体20q上，全长为12kb左右，1999年Schummer等人通过cDNA微阵列分析，发现HE4(又名WFDC2)mRNA在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中不表达。之后越来越多的实验证明HE4具有卵巢癌诊断的价值，而且在早期诊断中优于CA125。北京大学人民医院妇科肿瘤中心的研究人员以491例中国妇女血清为样品，分析了HE4作为卵巢癌肿瘤标记物的效果，这些血清包括罹患卵巢癌，良性肿瘤的病患，以及健康样品对照。研究人员采用预设Cutoffs值(HE4>150pmol/L，CA125>35U/mL)，和受试者工作特征曲线(基于95％，98％敏感度定义Cutoffs值)，评估了这两种肿瘤标记物单用，以及联用的检测灵敏度，特异性。结果他们发现在基线水平，卵巢癌样品中血清HE4和CA125水平比5个对照组要高得多，而在预设Cutoffs值评估方面，HE4检测卵巢癌的特异性为90％
‑
100％，CA125特异性为36％(良性肿瘤)
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99％，并且这两个肿瘤标记物联用可以将诊断特异性提高到100％！
[0004]同时通过受试者工作特征曲线，研究人员也发现HE4两个值的特异性分别为102.6pmol/L，150.2pmol/L，CA125分别为127.2U/mL和325.5U/mL。如果添加HE4，那么CA125诊断卵巢癌，并将其与良性肿瘤区分开来的特异性可以提高到78％(95％特异性)，68％(98％特异性)。从这些实验数据中，研究人员认为比较于单独使用CA125，在中国人群中联合使用HE4与CA125将提高诊断卵巢癌的特异性，这与之前欧美等国家进行的研究实验结果相一致。
[0005]目前，检测卵巢癌主要有两种方法：一种是经阴道超声检查(TUV)，这种成像方法可用于检查女性的生殖器官，包括子宫、卵巢、宫颈及阴道。尽管其应用非常普遍，但是这种方法并不能准确检测出该肿块是良性还是恶性，该方法还需要经验丰富的临床技师对检测结果进行解读；另一种常规检测方法是检测生物标志物CA125(癌抗原125)，这种方法被视为卵巢癌诊断的“金标准”，但也有其局限性，CA125的特异性及敏感度较低，容易出现假阴性或假阳性。大约有50％的卵巢癌I期患者并没有出现CA125升高的现象，也就是说有一半
的卵巢癌患者可能被漏诊。此外，有些良性卵巢疾病也会引起CA125水平升高，造成假阳性。
[0006]HE4编码基因最早是由Kichhoff等人于1991年从附睾上皮远端分离出来，位于染色体20q上，全长为12kb左右。之所以能和卵巢癌联系起来，正是通过熟悉生命科学技术应用于研究而得到的成果。1999年Schummer等人通过cDNA微阵列分析，发现HE4(又名WFDC2)mRNA在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中不表达。这一基因编码的蛋白质与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性，但未发现HE4具有蛋白酶抑制的作用。Hellstrom等将基因与蛋白质组技术相结合，筛选出HE4，并证明是HE4是WFDC2基因的产物，由WAP类型的4个二硫键核心(WFDC)组成，且该基因可编码分泌蛋白，经证实为糖化蛋白质。这一研究组还通过比较卵巢癌患者及正常人血清中的HE4蛋白量，发现大多数卵巢癌患者血清中HE4蛋白有明显增加，而正常组织及良性疾病中含量却很低，因此提出HE4具有卵巢癌诊断的价值，而且在早期诊断中优于CA125。
[0007]HE4是卵巢癌检测的最佳生物标志物，能够帮助妇科临床在早期发现卵巢癌，并对其进行风险评估和预警。与CA125相比，HE4的敏感度更高、特异性更强。HE4对卵巢癌的检测具有最高的敏感度，尤其是在疾病初期无表现症状的阶段，HE4在疾病初期诊断的敏感度为82.7％，远高于CA125的45.9％，血液中HE4定量检测还能够帮助监测癌症复发及疾病进展情况。HE4的特异性也更为显著，高达99％，而CA125仅为20％。这就意味着，如果使用HE4，健康女性被误诊为卵巢癌的概率仅为1％。对于绝经前女性，HE4的特异性也要高于CA125。良性肿瘤导致体内CA125水平升高的情况在绝经前女性中更为常见。
[0008]为了能够尽早对患者进行准确的诊断，最全面的卵巢癌检测方法是使用HE4与CA125联合检测。单独使用HE4的敏感度约为82.7％，单独使用CA125的敏感度为45.9％。而同时检测两种生物标志物，可以将检测敏感度提高到92％。与单独使用一种标志物相比，HE4与CA125联合检测能够更准确的检测出恶性肿瘤，并能将假阴性结果减少30
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50％。而检测HE4的mRNA比检测HE4的蛋白水平更敏感、更早期、更准确、更有临床意义和诊断价值。
[0009]随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，克隆时)就能做到早期预测诊断。
[0010]原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。采用上述方法可以在卵巢癌病变前期mRNA水平进行及早筛查，比HE4蛋白检测更早期、更有临床诊断意义。因此，本领域技术人员提供了一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的在于提供一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0012]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0013]一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，试剂盒包括杂交探针、标记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，试剂盒包括杂交探针、标记物，其特征在于，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，其特征在于：所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。2.根据权利要求1所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，其特征在于，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。3.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，其特征在于，所述的放射性核素选自3H、
35
S、
125
I或
32
P中的一种。4.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，其特征在于，所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。5.根据权利要求2所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，其特征在于，所述的非放射性标记物优选自地高辛。6.根据权利要求1所述的一种HE4基因的原位杂交早期筛查试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括杂交液、显色剂、增效剂；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：万娜赛拉，张玉丽，裘霖，张云福，裘建英，戎吉波，
申请(专利权)人：台州和和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：