用于疼痛管理的非阿片类组合物和疗法制造技术

用于治疗疼痛的组合物包括特异性结合与疼痛相关的受体的抗体或抗体片段。在一些实施方案中，受体为例如P2X4的P2X家族受体。在一些实施方案中，抗体包括可检测标志物。在这些实施方案中的一些中，可检测标志物包括荧光标签。该组合物可用于治疗受试者的急性或慢性疼痛。通常，该方法包括向受试者施用包括特异性结合与疼痛相关的受体的抗体或抗体片段的组合物。非阿片类镇痛组合物可以逆转神经性疼痛和化学毒性神经损伤模型中与疼痛相关的机械、寒冷、焦虑样和抑郁样行为。焦虑样和抑郁样行为。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于疼痛管理的非阿片类组合物和疗法
[0001]政府资助
[0002]本专利技术是在美国国立卫生研究院颁发的DE028096和国防部颁发的CP190116的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有一定的权利。
[0003]相关申请的交叉引用
[0004]本申请要求于2019年8月23日提交的美国临时专利申请第62/890,879号的权益，该申请通过整体引用并入本专利技术。
[0005]专利技术概述
[0006]在一个方面，本公开描述了包含特异性结合与疼痛相关的受体的抗体或抗体片段以及药学上可接受的载体的组合物。
[0007]在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性结合P2X家族受体。在这些实施方案中的一些中，P2X家族受体为P2X4。
[0008]在一些实施方案中，抗体包括SEQ ID NO:1的至少一个互补决定区(CDR)。在这些实施方案的一些中，CDR包括SEQ ID NO:1的氨基酸28
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35、氨基酸56
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58、氨基酸102
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112、氨基酸177
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183、氨基酸201
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203、或氨基酸242
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247。
[0009]在一些实施方案中，抗体包括SEQ ID NO:2的至少一个互补决定区(CDR)。在这些实施方案的一些中，CDR包括SEQ ID NO:2的氨基酸28
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34、氨基酸55
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60、氨基酸104
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112、氨基酸171
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177、氨基酸195
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197、或氨基酸236
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241。
[0010]在一些实施方案中，抗体可以进一步包括可检测标志物。在这些实施方案中的一些中，可检测标志物包括荧光标签。
[0011]在另一个方面，本公开描述了治疗受试者的急性或慢性疼痛的方法。通常，该方法包括以有效减轻受试者疼痛的量向受试者施用上述组合物的任何实施方案。
[0012]以上概述并非旨在描述本专利技术的每个公开的实施方案或每个实施方式。下面的描述更具体地举例说明了说明性实施方案。在整个申请的多处，通过示例列表提供了指导，这些示例可以以各种组合使用。在每种情况下，所列举的列表仅作为代表性组，不应被解释为排他性列表。
附图说明
[0013]图1.P2X4 scFv抗体表征。(A)来自第一、第二和第三循环中的P2X4免疫脾脏的V
H
/K cDNA的RT
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PCR回收分析。(B)核糖体展示产生的三种独特的纯化抗P2X4 scFv的蛋白质印迹。
[0014]图2.P2X4 scFv抗体表征。(A)三种P2X4 scFv的结合亲和力；scFv12、scFv95和scFv103。(B)三种P2X4 scFv与P2X4受体(P2X4R)的结合特异性/交叉反应性(右侧条)。以P2X4 scFv与P2X4结合以及CCKB scFv与CCKBR结合作为阳性结合对照(左侧四个条)。以无P2X4 scFv与CCKB结合以及无CCKBR scFv与P2X4结合作为阴性对照(中间四个条)。(C)七周前用两种P2X4 scFv中的一种免疫的具有神经性疼痛模型(FRICT
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ION)超敏反应的小鼠(n＝2,10周龄)髓质脑组织的蛋白质印迹。P2X4 His标签的条带作为由逆转超敏反应、抑郁样
行为和焦虑样行为的单次腹膜内剂量的scFv提供的脑穿透的指示。与完整的IgG相比，更小的scFv可以轻松穿过将许多分子拒之门外的血脑和血神经屏障。*P<0.05ANOVA相较于初始小鼠。
[0015]图3.单次腹膜内注射抗P2X4 scFv12和scFv95逆转了慢性三叉神经性疼痛超敏反应(FRICT
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ION模型)(4mg/kg)(n＝6R)。机械阈值的降低表明疼痛样行为增加，并且机械阈值完全恢复到初始基线表明神经性疼痛超敏反应的逆转。在慢性FRICT
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ION三叉神经损伤模型的手术诱导后三周当超敏反应最大时给予scFv。单剂量的任一scFv都会导致恢复到其至少保持10周的基线水平。*p<0.05,***p<0.001,n＝6。
[0016]图4.指示每周行为测试、手术模型诱导和处理时间点的实验时间表。scFv抗体的处理通过单次腹膜内注射进行。*表示实验结束。
[0017]图5.分离自具有和不具有神经损伤诱导的超敏反应的动物的三叉神经细胞上的P2X4定位。来自初始小鼠的三叉神经外周神经细胞(TG)具有低表达的P2X4受体(P2X4R)。DAPI染色指示了分离的细胞培养物中存在的所有细胞。在诱导三叉神经损伤(FRICT
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ION)后，P2X4R表达在持续七周的疼痛样超敏反应后显著增加。p<0.005，n＝3。
[0018]图6.在免疫TG以显现P2X4之前，P2X4 scFv 12剂量依赖性地阻断商业P2X4抗体与三叉神经外周神经细胞(TG)上P2X4的结合。在免疫染色TG以可视化P2X4R之前，三叉神经周围神经细胞(TG)上的P2X4受体被P2X4R scFv剂量依赖性吸附阻断。该染色阻断证明了当从具有神经损伤(FRICT
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ION)诱导的超敏反应的动物中分离时，神经上P2X4受体的结合特异性和存在上调。***表示与阳性对照动物相比具有显著差异；p<0.001，n＝3。
[0019]图7.P2X4 scFv抗体生成的图形概述。使用针对在膜结合区域选择的P2X4免疫肽片段进行免疫的小鼠的无细胞核糖体展示产生scFv，然后进行真核核糖体展示选择、人源化和亲和力进化。编码目标P2X4R scFv的DNA序列通过靶向(定点)诱变进行多样化。生成的文库转换为核糖体展示格式用于转录为mRNA、翻译和选择。
[0020]图8.P2X4 scFv抗体缓解了焦虑行为。使用明暗位置偏好测试在具有三叉神经性疼痛模型(TIC)的小鼠中证明了焦虑行为。与PBS n＝3相比，测试的scFv 12和scFv 95显著减少了焦虑行为，*p<0.05，***p<0.001，ANOVA。
[0021]图9.P2X4 scFv抗体(scFv12、scFv95)缓解了抑郁行为。在三叉神经性疼痛模型(TIC)的小鼠中使用蔗糖飞溅试验(sucrose splash test)证明了抑郁行为，其中初始小鼠在背部喷洒10％蔗糖后开始梳理毛发。接受中性缓冲载体(PBS)的TIC模型小鼠的梳理行为显著减少，但与接受scFv12和scFv95的TIC小鼠的未处理对照相似。n＝3，*p<0.05ANOVA。
[0022]图10.在冷板设备上测试，具有化疗药物奥沙利铂诱导的化学毒性神经性疼痛的小鼠出现冷超敏反应(10℃)。P2X4R scFv归一化对冷的应答。**＝p本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.组合物，其包含：特异性结合P2X家族受体的抗体或抗体片段；和药学上可接受的载体。2.权利要求1的组合物，其中所述P2X家族受体为P2X4。3.权利要求2的组合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1的至少一个互补决定区(CDR)。4.权利要求3的组合物，其中所述CDR包含SEQ ID NO:1的氨基酸28
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35、氨基酸56
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58、氨基酸102
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112、氨基酸177
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183、氨基酸201
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203或氨基酸242
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247。5.权利要求2的组合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:2的至少一...

【专利技术属性】
技术研发人员：KW海伊，RV杜尔瓦苏拉，A库纳姆内尼，
申请(专利权)人：新墨西哥大学雨林创新，
类型：发明
国别省市：