一种SARS-CoV-2假病毒检测血清中中和抗体滴度的方法技术

本发明专利技术属于新冠病毒抗体滴度的检测方法，具体地涉及一种使用SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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CoV
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2假病毒检测血清中中和抗体滴度的方法


[0001]本专利技术属于新冠病毒抗体滴度的检测方法，具体地涉及一种SARS
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CoV
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2假病毒检测血清中中和抗体滴度的方法。

技术介绍

[0002]新较高的防护标准极大限制了相关研究的开展，而假病毒中和抗体检测方法（Pseudovirus
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basedneutralizationassays,PBNAs）作为一种替代的、概念验证性的检测手段，在疫苗的安全性与有效性评价中有较高的实用价值。
[0003]SARS
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CoV
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2假病毒一般以复制缺陷型的HIV病毒为骨架或以复制缺陷型的VSV
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G病毒为骨架，衣壳包被SARS
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CoV
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2的表面刺突糖蛋白（Spikeglycoprotein），通过Spike蛋白受体结合区域（Receptor
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bindingdomain,RBD）本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
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CoV
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2假病毒检测血清中中和抗体滴度的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）在检测板设空白对照组，病毒对照组，样品组，设置平行孔；2）对上述的空白对照组，病毒对照组，样品组进行培养后，分别进行荧光检测，获得空白对照组发光强度均值、病毒对照组的发光强度均值和样品组的发光强度均值；3）计算中和抗体抑制率＝[1－（样品组的发光强度均值－空白对照组发光强度均值）/（病毒对照组的发光强度均值－空白对照组发光强度均值）]
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100％；4）将上一步算出的中和抗体抑制率输入统计学软件进行非线性拟合，计算出中和抗体滴度；所述空白对照组中含有hACE2
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Cos7细胞；所述病毒对照组中含有SARS
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CoV
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2假病毒和hACE2
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Cos7细胞；所述样品组中含有SARS
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CoV
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2假病毒、hACE2
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Cos7细胞和待测血清；所述发光强度均值由以下步骤测定：31）细胞铺板：D1天在96孔板中每孔接种5000个hACE2
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Cos7细胞，37℃培养过夜；32）样品稀释：D1天将待测血清56℃灭活30min，4℃放置过夜，每份40μL；D2天将待测血清做梯度稀释，血清30μL加稀释液570μL，加入24孔板第1列，每孔600μL混匀，后五列每孔加450μL稀释液，排枪将第一列混匀后取150μL加入第二列，依次稀释至第六列弃去150μL；33）中和检测病毒感染：D2从
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80℃冰箱中取出SARS
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CoV
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2假病毒冰上融化，样品组将假病毒与稀释后的血清按当批病毒对目的细胞的感染复数混合，病毒对照组将假病毒与完全培养基混合，37℃孵育1h为混合液；吸去细胞原有培养液，每孔加入100μL配制好的混合液，空白对照组加入100μL完全培养基；轻轻摇匀，4℃，1200g离心感染2h，弃去含有假病毒的培养基，PBS清洗一遍，每孔加入30μL0.25%的胰酶，37℃消化5min,加入100μL完全培养基，排枪轻轻吹打4
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5下重悬均匀，37℃培养过夜；34）细胞换液：D3、D4每天更换培养基，在37℃继续培养；35）蛋白表达检测：D5天进行荧光检测，计算发光强度均值。2.根据权利要求1所述的一种SARS
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CoV
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙丽，曹洋，
申请(专利权)人：昭衍苏州新药研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：