生物标志物在库欣综合征诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了生物标志物在库欣综合征诊断中的应用，本发明专利技术通过对样本进行非靶向组学检测，鉴定健康人群和库欣综合征患者中的差异代谢物，发现所述代谢物LysoPE 22:5在库欣综合征中的水平显著上升，并进行验证和诊断效能分析，证明了LysoPE 22:5是库欣综合征诊断的候选标志物。候选标志物。候选标志物。

【技术实现步骤摘要】
生物标志物在库欣综合征诊断中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及生物标志物在库欣综合征诊断中的应用。

技术介绍

[0002]库欣综合征(Cushing syndrome，CS)是由慢性糖皮质激素过度分泌而引起的一系列临床症群，库欣病(Cushing Disease)及肾上腺皮质腺瘤是其中最常见的两种类型。其中库欣病占库欣综合征的70％左右，是由垂体分泌过量的ACTH所引起。库欣综合征临床表现主要有肥胖、高血压、继发性糖尿病、向心性肥胖、肌肉萎缩、多毛、月经失调、性功能障碍、紫纹、满月脸、骨质疏松、痤疮和色素沉着、水肿、头痛、伤口不愈等。有研究发现库欣综合征首次出现症状后的平均诊断时间为6.0年，库欣综合征的典型症状往往进展缓慢，非特异性强，极可能被忽略或因其临床表现而归因于其他常见的疾病。此外经调查显示未经治疗的库欣综合征人群在5年内有50％的死亡率，主要由于心血管事件(充血性心力衰竭或心肌梗死)或感染。库欣综合征的发病率很高，可以影响肌肉系统，导致肌病和充血性心力衰竭；影响骨骼完整性，导致早期骨质疏松；影响生殖功能，导致月经不调和不孕；引起情绪障碍(Prague,Julia Kate,Stephanie May,and Benjamin Cameron Whitelaw."Cushing
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s syndrome."Bmj 346(2013))。而库欣综合征的延迟诊断可导致不可逆的器官损伤。
[0003]目前除了传统的诊断方法外，已有研究尝试将基因技术用于CS的定性诊断，但仍缺乏大样本的研究，因此寻找可靠、稳定的生物标志物对库欣综合征的定性诊断至关重要。血清标志物检测方便，操作简单，成本花费不高，在一些疾病诊断及治疗等方面的应用已被认可。代谢组学是一门新兴组学技术，是“系统生物学”的组成的重要部分。代谢组学主要研究对象为生物有机体内体液、细胞、组织中质量小于1000的小分子化合物，主要分析平台有色谱
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质谱联用技术、核磁共振技术等高分辨率、高灵敏度、高通量的现代仪器分析。其通过定性或定量研究生物体内被扰动的代谢产物(内源性代谢物质)种类、数量、含量等变化，来揭示体内代谢通路的改变。代谢组学处于转录、基因和蛋白质表达的终端，能够直接、准确地反映生物体目前处于的病理生理状态，广泛应用于疾病诊断、药物研发、营养学、毒理学、运动医学等领域，尤其是为临床疾病诊断提供可靠的理论依据及手段。研究血液中呈现显著性差异的代谢物，寻找血清标志物，对于实现库欣综合征的早期诊断具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了评估代谢物与库欣综合征之间的相关性，通过收集健康对照与库欣综合征的样本，综合分析样本的代谢组学，筛选在两个群组中含量呈现显著性差异的代谢物，并进一步分析差异代谢物的诊断效能，从而发现适于库欣综合征诊断的生物标志物。
[0005]具体地，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面提供了检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断库欣综合征的产品中的应用，所述生物标志物为LysoPE 22:5。
[0007]术语“生物标志物”是指生物系统内的物质，其用作所述系统的生物学状态的指
标。在本领域中，术语“生物标志物”有时也适用于检测所述内源性物质(例如抗体、核酸探针等、成像系统)的手段。生物标志物可以是活生物体中存在的任何种类的分子，例如核酸(DNA、mRNA、miRNA、rRNA等)、蛋白质(细胞表面受体、胞质蛋白等)、代谢物或激素(血糖、胰岛素、雌激素等)、具有另一种分子(例如蛋白质上的糖部分或磷酰基残基、基因组DNA上的甲基残基)或已被生物体内化的物质或这种物质的代谢产物的某种修饰特征的分子。
[0008]如本专利技术所用，术语“生物标志物”、“分子标志物”是可互换的，并且是指与取自对照受试者，例如与患有库欣综合征的受试者的可比较样本相比，在取自未患库欣综合征的健康受试者的样本中差异存在的分子。因此，本专利技术的生物标志物提供有关库欣综合征患病的可能性。
[0009]本专利技术所用术语“受试者”，指需对一种状态敏感，尤其库欣综合征下的活的动物或人。优选，受试者为哺乳动物，包括人类及非人类哺乳动物如狗，猫，猪，牛，绵羊，山羊，马，大鼠，和小鼠。更优选的方案中，受试者为人类。术语“受试者”不排除未患有库欣综合征疾病的正常人。
[0010]如本专利技术所用，术语“诊断”是指鉴定患有库欣综合征症状的受试者中的疾病。
[0011]进一步，所述试剂包括色谱法、光谱法、质谱法、化学分析法或其组合检测用试剂。
[0012]如本领域技术人员所知，质谱仪通常由三个部件组成：离子源、质量分析器和检测器。离子发生器将一部分样品转化为离子。如下所述，根据样品的相(固体、液体、气体)和未知物种的各种电离机制的效率，存在各种各样的电离技术。质谱仪通常还包括提取系统，该提取系统从样品中去除离子，然后将离子通过质量分析器并且到达检测器上。片段的质荷比(m/z)的差异允许质量分析器通过它们的质荷比对离子进行分类。最后，检测器测量指示物的量的值，从而提供用于计算存在的每种离子的丰度的数据。
[0013]在典型的质谱分析程序中，第一步包括样品的电离。在一个实施方案中，电离包括电子电离(EI)，其包括用电子轰击样品。在另一个实施方案中，电离包括化学电离(CI)，根据该化学电离，离子通过分析物与存在于离子源中的反应气体的离子的碰撞产生(合适的反应气体的实例包括甲烷、氨和异丁烷)。在另一个实施方案中，电离包括大气压化学电离(APCI)。在另一个实施方案中，电离包括大气压光子电离(APPI)。
[0014]当电离是电子电离时，这通常导致质量离子具有与母体分子相同的质量(M)，但是带电荷(M+或M
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)。当电离是化学电离时，这通常导致具有母体分子质量的质量离子和用于电离分子的化学物质，众所周知的实例包括[M+H]+、[M
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H]‑
、[M+NH4]+和[M+Na]+。这种分子离子在本说明书中也称为“假分子离子”。
[0015]在另一个实施方案中，电离包括电喷雾电离(ESI)，其中含有目标分析物的液体通过电喷雾分散成细气溶胶。在另一个实施方案中，电离包括基质辅助激光解吸/电离(MALDI)，其通常包括三步法，如下：(1)将样品混合在合适的基质材料中并将其施加到表面，通常是金属板；(2)通常用脉冲激光照射样品，从而触发样品和基质材料的烧蚀和解吸；(3)通过在烧蚀气体的热羽流中质子化或去质子化使分析物分子电离，使离子加速进入用于分析它们的质谱仪。这些电离技术是本领域技术人员公知的。电离，特别是电子电离，可能导致一些样品的分子碎裂成带电碎片。
[0016]在电离之后，根据质量分析器中的质荷比(m/z)分离第一步中产生的离子。这通常通过以下一种或多种质荷比分离技术进行：通过四极质谱仪中使用的四极电场，通过离子
阱质谱仪使用的离子阱四极电场，通过飞行时间质谱仪使用的纵向离子传播时间，以及通过电和磁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断库欣综合征的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为LysoPE 22:5。2.根据权利要1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括色谱法、光谱法、质谱法、化学分析法或其组合检测用试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂选自色谱
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质谱法组合检测用试剂。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述质谱法为串联质谱法。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述串联质谱法选自离子阱质谱法、四极杆飞行时间质谱法、三重四极杆质谱法、四极杆离子阱质谱法、离子迁移率
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四极杆离子阱
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飞行时间质谱法、四级杆
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轨道阱质谱法、离子迁移率谱仪
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四极杆离子阱质谱法、四级杆
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轨道阱质谱法、三重四级...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓敏，李菡钰，郑威扬，周瑞林，邓侃，范阅，王泽源，孙玥燊，赵心悦，吴清扬，卢琳，姚勇，苏婉，刘继方，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：