抗原呈递细胞外囊泡、含有其的组合物及用于制造它们的方法技术

本发明专利技术提供能够将抗原特异性T细胞充分地激活等的细胞外囊泡。本发明专利技术提供将抗原呈递MHC分子及T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的该抗原呈递细胞外囊泡。抗原呈递细胞外囊泡。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗原呈递细胞外囊泡、含有其的组合物及用于制造它们的方法


[0001]本专利技术涉及抗原呈递细胞外囊泡、含有其的组合物、及用于制造它们的方法。

技术介绍

[0002]已知在基于生物体的消除癌细胞等、调节对自身抗原、过敏性物质等的应答等免疫应答中，抗原特异性T细胞(例如，细胞毒性T细胞、辅助性T细胞等)发挥了核心功能。抗原特异性T细胞通过T细胞受体来识别树突细胞、巨噬细胞等抗原呈递细胞的细胞表面的MHC分子与源自癌、过敏性物质等的抗原的结合复合体而进行激活、增殖、分化等。经激活等的抗原特异性T细胞特异性地杀伤呈递了抗原的癌细胞等、调节对自身抗原、过敏性物质等的应答。因此，可认为使抗原特异性T细胞激活、增殖、分化等在免疫应答中是特别重要的。
[0003]作为使抗原特异性T细胞激活等的方法，不仅有已实用化的在T细胞中表达嵌合抗原受体的方法，还开发了其他方法。例如，专利文献1公开了在表面上包含MHC分子和T细胞共刺激分子的纳米粒子使抗原特异性T细胞增殖。另外，非专利文献1公开了介由PTGFRN而使IL
‑
12在膜上表达的外泌体使肿瘤抗原特异性CD8阳性T细胞增殖。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本特表2016
‑
520518号公报
[0007]非专利文献
[0008]非专利文献1：Katherine Kirwin等，“Exosome Surface Display of IL
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12Results in Tumor
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Retained Pharmacology with Superior Potency and Limited Systemic Exposure Compared to Recombinant IL
‑
12”,令和1年11月6日,34th Annual Meeting of the Society for Immuno
‑
therapy of Cancer
[0009]非专利文献2：Journal of Extracellular Vesicles(2018)；7：1535750

技术实现思路

[0010]专利技术所要解决的课题
[0011]作为可将抗原特异性T细胞激活等的新方法，本申请专利技术人尝试了使用膜中包含MHC分子和T细胞共刺激分子的细胞外囊泡的方法。但是，使用该细胞外囊泡来尝试抗原特异性T细胞的激活等后，首次发现无法将抗原特异性T细胞充分地激活等。
[0012]因此，本专利技术的目的在于提供能够将抗原特异性T细胞充分地激活等的细胞外囊泡。
[0013]用于解决课题的手段
[0014]鉴于上述课题反复进行了认真研究，结果，本申请专利技术人意外地发现了通过使用膜中包含MHC分子及T细胞刺激细胞因子的细胞外囊泡，可以将抗原特异性T细胞充分地激活等，从而完成了本专利技术。
[0015]因此，本专利技术包含以下内容：
[0016]〔0〕细胞外囊泡，其将抗原呈递MHC分子及T细胞刺激细胞因子呈递至膜外。
[0017]〔1〕抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下：
[0018](A)包含抗原呈递MHC分子的、能够将该抗原呈递至膜外的蛋白质；及
[0019](B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的蛋白质，其包含该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基。
[0020]〔2〕如〔1〕所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下：
[0021](A)能够将该抗原呈递至膜外的融合蛋白或蛋白复合体，其包含：抗原呈递MHC分子；和能够在细胞外囊泡的膜上表达的膜蛋白或其跨膜结构域、或者能够与细胞外囊泡的膜结合的蛋白质或其结构域；及
[0022](B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和能够在细胞外囊泡的膜上表达的膜蛋白或其跨膜结构域、或者能够与细胞外囊泡的膜结合的蛋白质或其结构域。
[0023]〔3〕如〔1〕或〔2〕所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下：
[0024](A)能够将该抗原呈递至膜外的融合蛋白或蛋白复合体，其包含：抗原呈递MHC分子；和四次穿膜蛋白或其跨膜结构域、或者MFG
‑
E8或其结构域；及
[0025](B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和四次穿膜蛋白的部分序列，其中，该四次穿膜蛋白的部分序列至少具有2个跨膜结构域，该第一T细胞刺激细胞因子被配置于该2个跨膜结构域之间；或者
[0026](B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和MFG
‑
E8或其结构域。
[0027]〔4〕如〔1〕～〔3〕中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下：
[0028](A)能够将抗原肽呈递至膜外的融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：
[0029](A
‑
1)MHC分子限制性抗原肽，
[0030](A
‑
2)可存在的间隔序列，
[0031](A
‑
3)单链MHC分子，
[0032](A
‑
4)可存在的间隔序列，及
[0033](A
‑
5)四次穿膜蛋白；或者
[0034](A)能够将抗原肽呈递至膜外的蛋白复合体，其包含：
[0035]融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：
[0036](A
‑
1)MHC分子限制性抗原肽，
[0037](A
‑
2)可存在的间隔序列，
[0038](A
‑
3)MHC第I类α链、β2微球蛋白、MHC第II类α链、或MHC第II类β链，
[0039](A
‑
4)可存在的间隔序列，及
[0040](A
‑
5)四次穿膜蛋白；和
[0041](A
‑
6)蛋白质，其包含β2微球蛋白、MHC第I类α链、MHC第II类β链、或MHC第II类α链的氨基酸序列，以及
[0042](B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含自N末端侧起
由下述(B
‑
1)～(B
‑
5)组成的氨基酸序列：
[0043](B
‑
1)四次穿膜蛋白的部分序列，其自N末端侧起包含跨膜结构域1、小型胞外环、跨膜结构域2、小型胞内环及跨膜结构域3，
[0044](B
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抗原呈递细胞外囊泡，其将抗原呈递MHC分子及T细胞刺激细胞因子呈递至膜外。2.如权利要求1所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下的(A)、(B)：(A)包含所述抗原呈递MHC分子的、能够将该抗原呈递至膜外的蛋白质；及(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的蛋白质，其包含该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基。3.如权利要求2所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下的(A)、(B)：(A)能够将该抗原呈递至膜外的融合蛋白或蛋白复合体，其包含：抗原呈递MHC分子；和能够在细胞外囊泡的膜上表达的膜蛋白或其跨膜结构域、或者能够与细胞外囊泡的膜结合的蛋白质或其结构域，及(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和能够在细胞外囊泡的膜上表达的膜蛋白或其跨膜结构域、或者能够与细胞外囊泡的膜结合的蛋白质或其结构域。4.如权利要求2所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下的(A)、(B)：(A)能够将该抗原呈递至膜外的融合蛋白或蛋白复合体，其包含：抗原呈递MHC分子；和四次穿膜蛋白或其跨膜结构域、或者MFG
‑
E8或其结构域，及(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和四次穿膜蛋白的部分序列，其中，该四次穿膜蛋白的部分序列至少具有2个跨膜结构域，该第一T细胞刺激细胞因子被配置于该2个跨膜结构域之间，或者(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含：该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基；和MFG
‑
E8或其结构域。5.如权利要求2所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下的(A)、(B)，(A)能够将抗原肽呈递至膜外的融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：(A
‑
1)MHC分子限制性抗原肽，(A
‑
2)可存在的间隔序列，(A
‑
3)单链MHC分子，(A
‑
4)可存在的间隔序列，及(A
‑
5)四次穿膜蛋白；或者(A)能够将抗原肽呈递至膜外的蛋白复合体，其包含：融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：(A
‑
1)MHC分子限制性抗原肽，(A
‑
2)可存在的间隔序列，(A
‑
3)MHC第I类α链、β2微球蛋白、MHC第II类α链、或MHC第II类β链，(A
‑
4)可存在的间隔序列，及(A
‑
5)四次穿膜蛋白；和(A
‑
6)蛋白质，其包含β2微球蛋白、MHC第I类α链、MHC第II类β链、或MHC第II类α链的氨基酸序列，以及(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(B
‑
1)～(B
‑
5)组成的氨基酸序列：
(B
‑
1)四次穿膜蛋白的部分序列，其自N末端侧起包含跨膜结构域1、小型胞外环、跨膜结构域2、小型胞内环及跨膜结构域3，(B
‑
2)可存在的间隔序列，(B
‑
3)该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基，(B
‑
4)可存在的间隔序列，以及(B
‑
5)包含跨膜结构域4的四次穿膜蛋白的部分序列；或者(B)能够将第一T细胞刺激细胞因子呈递至膜外的融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(B
‑
3)～(B
‑
5)组成的氨基酸序列：(B
‑
3)该第一T细胞刺激细胞因子或其亚基，(B
‑
4)可存在的间隔序列，及(B
‑
5)MFG
‑
E8。6.如权利要求5所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，膜包含以下(A)：(A)能够将抗原肽呈递至膜外的融合蛋白，所述融合蛋白包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：(A
‑
1)MHC第I类分子限制性抗原肽，(A
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2)可存在的间隔序列，(A
‑
3)单链MHC第I类分子，(A
‑
4)可存在的间隔序列，及(A
‑
5)四次穿膜蛋白。7.如权利要求5所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，膜包含以下(A)：(A)能够将抗原肽呈递至膜外的蛋白复合体，所述蛋白复合体包含：融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(A
‑
1)～(A
‑
5)组成的氨基酸序列：(A
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1)MHC第II类分子限制性抗原肽，(A
‑
2)可存在的间隔序列，(A
‑
3)MHC第II类β链，(A
‑
4)可存在的间隔序列，及(A
‑
5)四次穿膜蛋白；和(A
‑
6)蛋白质，其包含MHC第II类α链的氨基酸序列。8.如权利要求1～7中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，所述T细胞刺激细胞因子为IL
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2、IL
‑
4、IL
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6、IL
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12或TGF
‑
β、或者其亚基。9.如权利要求1～8中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下(C)：(C)包含T细胞共刺激分子的、能够使该T细胞共刺激分子与T细胞相互作用的蛋白质。10.如权利要求1～9中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下(C)：(C)能够使T细胞共刺激分子与T细胞相互作用的融合蛋白，其包含：该T细胞共刺激分子；和能够在细胞外囊泡的膜上表达的膜蛋白或其跨膜结构域、或者能够与细胞外囊泡的膜结合的蛋白质或其结构域。11.如权利要求1～9中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下(C)：(C)能够使T细胞共刺激分子与T细胞相互作用的融合蛋白，其包含：该T细胞共刺激分子；和四次穿膜蛋白或其跨膜结构域、或者MFG
‑
E8或其结构域。12.如权利要求1～9中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，其膜包含以下(C)：
(C)能够使T细胞共刺激分子与T细胞相互作用的融合蛋白，其包含自N末端侧起由下述(C
‑
1)～(C
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3)组成的氨基酸序列：(C
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1)该T细胞共刺激分子，(C
‑
2)可存在的间隔序列，及(C
‑
3)四次穿膜蛋白。13.如权利要求2～8中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，(A)中规定的蛋白质或蛋白复合体与(B)中规定的蛋白质或蛋白复合体进行了融合。14.如权利要求9～12中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，(A)中规定的蛋白质或蛋白复合体与(C)中规定的蛋白质或蛋白复合体进行了融合。15.如权利要求9～12中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，(B)中规定的蛋白质或蛋白复合体与(C)中规定的蛋白质或蛋白复合体进行了融合。16.如权利要求9～12中任一项所述的抗原呈递细胞外囊泡，其中，(A)中规定的蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：华山力成，山野友义，的场一隆，
申请(专利权)人：日产化学株式会社，
类型：发明
国别省市：