一种防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种防治家禽传染性鼻炎的中药制剂指纹图谱的检测方法，采用高效液相进行检测，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)采用高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方法


[0001]本专利技术属于药物检测
，尤其涉及一种基于谱效关系的防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方法。
技术背景
[0002]防治家禽传染性鼻炎中药制剂由炒苍耳子、车前草、辛夷、白芷、密蒙花等药材组合而成。炒苍耳子为菊科植物苍耳的干燥成熟带总苞的果实，照清炒法炒至黄褐色而成，以绿原酸、苍耳苷等为主要化学成分，具有散风湿，通鼻窍，解疮毒的功效；车前草为车前科植物车前或平车前的干燥全草，以大车钱苷、木兰脂素等为主要活性成分，具有清热利尿，凉血解毒的功效；辛夷为木兰科植物望春花、玉兰或武当玉兰的干燥花蕾，以挥发油、木兰脂素、黄酮类为主要活性成分，具有抗炎抗过敏、中枢抑制等作用，具有散风寒，通鼻窍的功效；白芷为伞形科植物杭白芷、川白芷的根，其中含有挥发油和香豆素类如欧前胡素、异欧前胡素等有效成分，具有解热、抗炎整体、松弛平滑肌的作用，主治感冒、鼻塞等症；密蒙花为马钱科醉鱼草属植物密蒙花的花蕾和花序，以黄酮类如蒙花苷、密蒙花新苷和环烯醚萜苷类如桃叶珊瑚苷等为主要活性成分，具有保肝、抗炎抗菌、解痉、抗氧化等功效。再与其他重要组合使用，可有效防治家禽传染性鼻炎，缓解传染性鼻炎引发的各类症状。由于中药材种类众多，如何建立简单有效的质量监控技术，保证防治家禽传染性鼻炎的中药制剂的一致性，对防治家禽传染性鼻炎的中药制剂的质量控制具有重要的意义。
[0003]中药指纹图谱作为中药质量控制的关键技术，能够全面的反映出中药材中各种不同化学成分浓度分布的整体状况，是中药整体质量控制手段，中药生产工艺的改进和规范中药成品的质量控制产生深远的影响。另一方面，中药指纹图谱作为一种综合的、可量化的鉴别手段，在现阶段，通过指纹特征相似程度的比较，判断真伪、评价优劣、考察稳定性和一致性，是一种符合中药特色的质量控制模式之一。
[0004]目前，由于防治家禽传染性鼻炎中药制剂的组方独特，组成较为复杂，如果进行单一成分的定量检测，在质量控制方面增加检测成本及人员、时间等成本；且本方为独特组方，此前未曾有关于本方的谱效关系方面的研究，因此，对防治家禽传染性鼻炎中药制剂质量控制的研究方法有待进一步探索。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术提供了一种防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方法，所述中药制剂中的中药组分包含炒苍耳子、车前草、辛夷、白芷、密蒙花。本专利技术提供的HPLC指纹图谱的检测方法可有效的同时定量检测绿原酸、蒙花苷、木犀草素、木兰脂素和欧前胡素；本专利技术检测方法具有方法简便、客观性强等优点，有利于对防治家禽传染性鼻炎中药制剂进行质量检测。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面，提供了一种防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方
法，检测方法包括以下步骤：
[0008](1)对照品溶液的制备：分别称取绿原酸、蒙花苷、木犀草素、木兰脂素和欧前胡素对照品，用甲醇分别稀释制得储备液；将各储备液混合制得对照品溶液；
[0009](2)供试品溶液的制备：精密称取防治家禽传染性鼻炎中药制剂，加入50％甲醇/水溶液，称重，超声，放至室温，再称重，补足减失重量，过滤，即得；
[0010](3)分析检测：采用高效液相HPLC色谱
‑
紫外检测进行分析；
[0011](4)建立指纹图谱：提取特征色谱峰。
[0012]进一步地，步骤(1)中对照品溶液的制备为取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含绿原酸500μg的储备液；取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含蒙花苷1000μg的储备液；取木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含木犀草素1000μg的储备液；取木兰脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1000μg的储备液；取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含欧前胡素100μg的储备液。
[0013]混合对照品的制备：将各储备液混合，以甲醇稀释为绿原酸浓度50μg/ml、蒙花苷浓度100μg/ml、木犀草素浓度100μg/ml、木兰脂素浓度100μg/ml、欧前胡素浓度10μg/ml的混合对照品溶液。
[0014]进一步，步骤(2)中供试品溶液的制备，优选为，精密称取防治家禽传染性鼻炎中药制剂2g置于具塞锥形瓶中，加25ml 50％甲醇/水，称定重量，超声处理30min，放置至室温，再称定重量，50％甲醇/水补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
[0015]步骤(3)中所述HPLC色谱条件为：色谱柱为Supfex JX
‑
C18，5μm，4.6
×
250mm；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；检测波长为250nm；以纯乙腈为流动相A，0.1％甲酸/水为流动相B，进行梯度洗脱。
[0016]优选地，洗脱条件为：0～35min，8％～15％A；35～75min，15％～30％A；75～110min，30％～40％A；110～150min，40％～60％A；150～155min，60％～40％A。
[0017]含量检测对绿原酸、蒙花苷、木犀草素、木兰脂素和欧前胡素均采用外标定量法进行定量检测。
[0018]步骤(4)中提取特征色谱峰的保留时间分别为：绿原酸20.843～20.966min、蒙花苷73.046～73.294min、木犀草素76.478～76.691min、木兰脂素115.218～115.453min、欧前胡素134.786～134.910min。
[0019]本专利技术第二方面，基于上述防治家禽传染性鼻炎中药制剂的HPLC指纹图谱检测方法，本专利技术还提供了一种基于谱效关系的防治家禽传染性鼻炎中药制剂的质量检测方法，包括以下步骤：
[0020](1)建立防治家禽传染性鼻炎中药制剂的HPLC指纹图谱检测方法；
[0021](2)测定防治家禽传染性鼻炎中药制剂的抗炎活性；
[0022](3)将步骤(1)所识别特征峰的峰面积和步骤(2)所得的抗炎活性进行灰色关联度分析，并计算各特征峰与抗炎活性之间的关联度，评价特征峰的抗炎活性。
[0023]在本专利技术中，进行了10批防治家禽传染性鼻炎中药制剂的HPLC指纹图谱相似度评价。
[0024]本专利技术通过建立防治家禽传染性鼻炎中药制剂的HPLC指纹图谱得到共有特征峰；
通过建立细胞抗炎模型测定防治家禽传染性鼻炎中药制剂的抗炎因子指标；再根据HPLC指纹图谱特征峰的峰面积和抗炎指标建立灰色关联度分析，并利用所建立的灰色关联度分析方法来评价特征峰与抗炎活性的关联度大小。
[0025]步骤(2)中所述测定防治家禽传染性鼻炎中药制剂的抗炎活性步骤如下：
[0026]1)预防抗炎试验：将RAW264.7细胞密接于96孔板，24h后加入防治家禽传染性鼻炎中药制剂的样品溶液培养，培养6h后弃去含药培养基，加入LPS诱导细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治家禽传染性鼻炎中药制剂指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述指纹图谱检测方法为采用HPLC检测法同时对绿原酸、蒙花苷、木犀草素、木兰脂素和欧前胡素的含量进行检测；检测步骤如下：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)采用高效液相HPLC色谱
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紫外检测进行分析；(4)提取特征色谱峰，建立指纹图谱。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述HPLC色谱条件如下：色谱柱为Supfex JX
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C18，5μm，4.6
×
250mm；以纯乙腈为流动相A，0.1％甲酸/水为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱条件为：0～35min，8％～15％A；35～75min，15％～30％A；75～110min，30％～40％A；110～150min，40％～60％A；150～155min，60％～40％A。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HPLC检测条件为：柱温为30℃；流速为1.0ml/min；检测波长为250nm。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述对照品溶液的制备方法为分别称取绿原酸、蒙花苷、木犀草素、木兰脂素和欧前胡素对照品，用甲醇分别稀释制得储备液；将各储备液混合制得对照品溶液。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述供试品溶液的制备方法为：精密称取防治家禽传染性鼻炎中药制剂，加入50％甲醇/水溶液，称重，超声，放至室温，再称重，补足减失重量，过滤，即得。6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述各储备液中，绿原酸储备液中绿原酸含量为500μg/ml、蒙花苷储备液中蒙花苷含量为1000μg/ml、木犀草素储备液中木犀草素含量为1000μg/ml、木兰脂素储备液中木兰脂素含量1000μg/ml、欧前胡素储备液中欧前胡素含量为100μg/ml；所述对照品溶液中绿原酸浓度50μg/ml、蒙花苷浓度100μg/ml、木犀草素浓度为100μg/ml、木兰脂素浓度100μg/ml和欧前胡素浓度10μg/ml。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李虹颖，李守军，刘爱玲，王一凡，廖茂梁，刘心怡，耿玉萌，
申请(专利权)人：瑞普高科天津生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：