本发明专利技术公开了一种适于捕获稀有细胞的捕获装置及其制备方法。一种适于捕获稀有细胞的捕获装置，包括基材、设于所述基材表面的涂层及连接于所述涂层的捕获物，所述捕获物能够特异性地和目标稀有细胞结合，所述涂层的原料包括甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂。本发明专利技术能够降低背景细胞、蛋白的非特异性吸附，提高所捕获的靶细胞的纯度。捕获的靶细胞的纯度。捕获的靶细胞的纯度。
【技术实现步骤摘要】
一种适于捕获稀有细胞的捕获装置及其制备方法
[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种适于捕获稀有细胞的捕获装置及其制备方法。
技术介绍
[0002]稀有细胞是指生物样本中存在的数量稀少却具有重要生物学功能或临床检测意义的细胞。稀有细胞的传统捕获方法有Cell Search类的免疫捕获富集、物理富集等。在稀有细胞的富集过程中，背景/杂细胞干扰稀有细胞的捕获及判断，同时影响到捕获到稀有细胞的纯度。目前，一些捕获筛等捕获装置上添加有物理涂层和化学涂层来提高细胞的捕获效率，其中，物理涂层的结合强度低；而化学涂层不可逆，捕获的稀有细胞释放困难；另一方面，在捕获靶细胞的同时，背景细胞也会吸附到捕获筛上，所捕获的稀有细胞的纯度较低；此外，捕获装置会对稀有细胞有不同程度的损伤；这些因素都会影响捕获细胞的活性及下游应用。
[0003]本申请人于2020年提出了一种捕获筛，参见CN111175503A，该捕获筛包括筛网骨架和设置于所述筛网骨架上的捕获物，所述捕获物能够与目标细胞或生物分子特异性结合，所述筛网骨架具有金属原子，所述的筛网骨架和所述捕获物之间通过巯基化物质连接，其中巯基化物质与所述筛网骨架通过反应形成金属
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硫键而结合，巯基化物质与所述捕获物通过反应形成酰胺键而结合；所述巯基化物质为巯基化海藻酸钠和巯基化透明质酸中的一种或两种的组合。该捕获筛能够方便地将捕获的细胞洗脱，但是用于富集稀有细胞时，背景细胞也会吸附到捕获筛上，捕获的目标稀有细胞的纯度较低。
技术实现思路
[0004]针对上述技术问题中的至少一个，本专利技术的第一个目的是提供一种适于捕获稀有细胞的捕获装置，该捕获装置能够降低背景细胞、蛋白的非特异性吸附，提高所捕获的靶细胞的纯度。本专利技术的另一个目的是提供一种上述捕获装置的制备方法。
[0005]本专利技术的第一个方面提供一种适于捕获稀有细胞的捕获装置，包括基材、设于所述基材表面的涂层及连接于所述涂层的捕获物，所述捕获物能够特异性地和目标稀有细胞结合，所述涂层的原料包括甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂。该涂层可被裂解，从而便于将捕获到的细胞从基材上洗脱下来，且不会损伤到细胞，具有较高的洗脱效率。
[0006]在一些实施例中，所述甲基丙烯酰化透明质酸和所述光引发剂的重量比为20:0.002～20:0.003。优选地，所述甲基丙烯酰化透明质酸和所述光引发剂的重量比为20:0.002～20:0.0028，更优选为20:0.0022～20:0.0027，进一步为20:0.0022～20:0.0025，更进一步为20:0.0025。
[0007]在一些实施例中，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为100～800KDa。优选地，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为100～400KDa，更优选为100～180KDa，进一步为150KDa。
[0008]在一些实施例中，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度为15～50mg/mL。优选地，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度为20～40mg/mL。
[0009]在一些实施例中，所述光引发剂为苯基
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2,4,6
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三甲基苯甲酰基亚磷酸锂。
[0010]在一些实施例中，所述捕获装置由如下步骤制得：使甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂的混合液覆盖基材的表面，辐照使其凝胶化，形成所述涂层。
[0011]在一些实施例中，辐照采用的光源的辐射波长为400～500nm，辐照时间为30～60秒。优选地，辐照采用的光源的辐射波长为405nm，辐照时间为30～60秒。
[0012]可选地，所述基材包括筛网、板或微流控芯片。所述基材的材质不受限制，只要能够提供供涂层组合物涂覆的表面即可，包括但不限于金属、塑料、玻璃、陶瓷等。
[0013]在一具体且优选的实施例中，所述基材为筛网。更优选地，所述筛网的目数为600～650，适于免疫细胞的捕获。
[0014]在一更优选的实施例中，所述筛网为不锈钢筛网。
[0015]在另一更优选的实施例中，所述筛网为由塑料形成的塑料筛网，包括但不限于尼龙筛网、聚对苯二甲酸乙二醇酯筛网等。
[0016]优选地，所述捕获物包括蛋白、核酸中的至少一种。更优选地，所述蛋白包括抗体。进一步地，所述抗体包括EPCAM抗体、CD3抗体、panCK抗体中的至少一种。稀有细胞等被捕获物能够与抗体特异性结合而被抗体等捕获物捕获到装置中，然后通过对涂层裂解，将捕获到的稀有细胞从基材上洗脱下来，用于后续分析、下游应用等。
[0017]优选地，所述稀有细胞为免疫细胞。
[0018]在一具体且优选的实施例中，所述基材为不锈钢筛网，所述筛网的目数为600～650目；所述涂层由覆盖于基材表面的甲基丙烯酰化透明质酸和苯基
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2,4,6
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三甲基苯甲酰基亚磷酸锂的混合液经辐照凝胶化后形成，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为150KDa，辐照采用的光源的辐射波长为405nm，辐照时间为30～60秒；所述捕获物为能够和免疫细胞特异性结合的抗体。
[0019]本专利技术的第二个方面提供一种如上所述的适于捕获稀有细胞的捕获装置的制备方法，包括如下步骤：
[0020]A、将光引发剂溶于缓冲液中制成光引发剂溶液；
[0021]B、将甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂溶液混合至甲基丙烯酰化透明质酸溶解，制成混合液；
[0022]C、使混合液覆盖清洗处理后的基材的表面，辐照使其凝胶化，形成覆于基材表面的涂层；
[0023]D、将捕获物孵育至涂层上。
[0024]在一些实施例中，步骤A中，所述光引发剂为苯基
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2,4,6
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三甲基苯甲酰基亚磷酸锂，所述缓冲液为磷酸盐缓冲盐溶液。
[0025]在一些实施例中，步骤B中，所述甲基丙烯酰化透明质酸和所述光引发剂的重量比为20:0.002～20:0.003，室温下搅拌溶解，溶解后离心，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为100～180KDa。
[0026]在一些实施例中，步骤C中，将清洗处理后的筛网放置在孔板上，将混合液滴加到筛网上，混合液在筛网表面铺展，辐照使其凝胶化，形成所述涂层；辐照采用的光源的辐射
波长为405nm，辐照时长为30～60秒。
[0027]在一些实施例中，步骤D中，将覆有所述涂层的基材冻干，洗涤；将N
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羟基硫代琥珀酰亚胺溶于2
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吗啉乙磺酸溶液中得第一溶液，将1
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(3
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二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐溶于2
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吗啉乙磺酸溶液中得第二溶液，将所述第一溶液和所述第二溶液混合得共混活化剂溶液；使所述共混活化剂溶液和所述基材接触，静置孵育；制备含有捕获物的孵育液并进行孵育，将所述捕获物孵育至所述涂层上。
[0028]在一些实施例中，所述捕获物为能够和免疫细胞特异性结合的抗体。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种适于捕获稀有细胞的捕获装置，包括基材、设于所述基材表面的涂层及连接于所述涂层的捕获物，所述捕获物能够特异性地和目标稀有细胞结合，其特征在于，所述涂层的原料包括甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂。2.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述甲基丙烯酰化透明质酸和所述光引发剂的重量比为20:0.002～20:0.003。3.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为100～800KDa，所述甲基丙烯酰化透明质酸的浓度为15～50mg/mL。4.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述光引发剂为苯基
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2,4,6
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三甲基苯甲酰基亚磷酸锂。5.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述捕获装置由如下步骤制得：使甲基丙烯酰化透明质酸和光引发剂的混合液覆盖基材的表面，辐照使其凝胶化，形成所述涂层；辐照采用的光源的辐射波长为400～500nm，辐照时间为30～60秒。6.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述基材包括筛网、板或微流控芯片；和/或，所述捕获物包括蛋白、核酸中的至少一种；和/或，所述稀有细胞为免疫细胞。7.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述基材为金属筛网或塑料筛网；和/或，所述捕获物包括抗体。8.根据权利要求1所述的捕获装置，其特征在于，所述基材为不锈钢筛网，所述筛网的目数为600～650目；所述涂层由覆盖于基材表面的甲基丙烯酰化透明质酸和苯基
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三甲基苯甲酰基亚磷酸锂的混合液经辐照凝胶化后形成，所述甲基丙烯酰化透明质酸的分子量为100～180KDa，辐照采用的光源的辐射波长为405nm，辐照时间为30～60秒；所述捕获物...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜菁，侯舒捷，彭靖元，王伟，
申请(专利权)人：江苏汇先医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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