发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，包括如下步骤：将D5

【技术实现步骤摘要】
发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法


[0001]本专利技术涉及技术检测领域，特别是涉及一种发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法。

技术介绍

[0002]氨基甲酸乙酯于1971年在发酵食品中被首次发现，其分子式为C3H7NO2，相对分子质量为89.09，无色无味，主要由微生物在食品发酵和储存过程中发生的代谢过程中产生，广泛存在于酒类、酱油、乳酸菌发酵饮料和谷物或豆类发酵食品等制品中。氨基甲酸乙酯与人类的日常生活密不可分。
[0003]氨基甲酸乙酯对人体健康有害，与多种癌症的形成和发展密切相关。食品安全一直是世界范围内都最受关注的热点之一，这直接关系到国民的身体健康和生命安全，也与社会稳定和国家发展密切相关。因此，对发酵食品中氨基甲酸乙酯含量的检测和评价，有助于保障食品安全，维护公众健康。
[0004]发酵食品中氨基甲酸乙酯的绝对含量比较低，且成分复杂，往往需要高精密度的仪器才能检测出其含量。传统的检测发酵食品中氨基甲酸乙酯的方法包括偏最小二乘法结合傅里叶变换近红外光谱法、薄层分析法、气相色谱法、高效液相色谱
‑
荧光法等。其中，偏最小二乘结合傅里叶变换近红外光谱法能够快速定性，可以检测出氨基甲酸乙酯以及其前体物质，但是该方法的准确度和精确度较低，只适用于半定量初筛分析。薄层分析法操作简便，样品预处理和分析都比较快速，可对液体中的氨基甲酸乙酯进行定性和半定量检测，但很难达到氨基甲酸乙酯含量的限量标准的检测要求。气相色谱法分析速度快，所需样品少且灵敏度高，但气相色谱法难以测定热不稳定、沸点过高或相对分子质量太大的物质。高效液相色谱
‑
荧光法操作简单、便捷，分析时间短，实用性较强，但该法的准确度和精确度较低，相对标准偏差较大，不适合精确定量。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供了一种发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，所述检测方法获得的检测结果准确性、精密度高，检出限与定量限较低。
[0006]本专利技术通过如下技术方案实现。
[0007]一种发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，包括如下步骤：
[0008]将D5
‑
氨基甲酸乙酯与甲醇溶液混合，制备内标物溶液；
[0009]将氨基甲酸乙酯与甲醇溶液混合，然后与所述内标物溶液混合，制备标准品溶液；
[0010]将待测样品与所述内标物溶液第一次混合，然后与水第二次混合，过滤，取滤液，用固相萃取柱萃取，制备试样溶液；
[0011]将所述标准品溶液与所述试样溶液进行超高效液相色谱与质谱联用测定；
[0012]其中，超高效液相色谱采用的流动相A为体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；采用梯度洗脱方式；
[0013]所述梯度洗脱方式为：0min～1min，流动相A的体积百分数由95％变化至90％；
1min～2.5min，流动相A的体积百分数由90％变化至15％；2.5min～3min，流动相A的体积百分数由15％变化至10％；3min～4min，流动相A的体积百分数为10％；4min～4.5min，流动相A的体积百分数由10％变化至95％；4.5min～6min，流动相A的体积百分数为95％。
[0014]在其中一个实施例中，超高效液相色谱的条件包括：色谱柱为C18色谱柱；柱温为35℃～45℃；流速为0.25mL/min～0.35mL/min；进样量为2μL～4μL。
[0015]在其中一个实施例中，质谱的条件包括：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为正离子扫描；检测方式为多反应监测模式；毛细管电压为2.5kV～3.5kV；离子源温度为130℃～170℃；脱溶剂气温度为550℃～650℃；脱溶剂气流量为900L/h～1000L/h；锥孔气流量为130L/h～170L/h。
[0016]在其中一个实施例中，第二次混合的时间为10h～14h。
[0017]在其中一个实施例中，用固相萃取柱萃取包括如下步骤：
[0018]采用正己烷淋洗后，采用二氯甲烷洗脱，收集洗脱液。
[0019]在其中一个实施例中，所述固相萃取柱选自碱性硅藻土固相萃取柱。
[0020]在其中一个实施例中，所述碱性硅藻土固相萃取柱中的填料重量为3500mg～4500mg，所述碱性硅藻土固相萃取柱的柱容量为10mL～14mL。
[0021]在其中一个实施例中，用固相萃取柱萃取之前还包括如下步骤：
[0022]将所述滤液与氯化钠混合，超声。
[0023]在其中一个实施例中，用固相萃取柱萃取之后还包括如下步骤：
[0024]取萃取液进行脱水，然后去除溶剂，再与甲醇水溶液混合，制备所述试样溶液。
[0025]在其中一个实施例中，所述发酵物选自酒醅或豆瓣酱中的至少一种。
[0026]与现有技术相比较，本专利技术的发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法具有如下有益效果：
[0027]本专利技术所述的超高效液相色谱与质谱联用测定固态发酵物中氨基甲酸乙酯的含量，通过对待测物进行前处理，并限定超高效液相色谱中的流动相选择以及洗脱条件，最终获得的检测结果具有较好的准确性、精密度以及较低的检测限。
附图说明
[0028]图1为本专利技术提供的氨基甲酸乙酯及D5
‑
氨基甲酸乙酯总离子图；
[0029]图2为本专利技术提供的氨基甲酸乙酯标准物质的谱图；
[0030]图3为本专利技术提供的D5
‑
氨基甲酸乙酯标准物质的谱图。
具体实施方式
[0031]为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施方式。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0032]此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在专利技术的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个
等，除非另有明确具体的限定。在本专利技术的描述中，“若干”的含义是至少一个，例如一个，两个等，除非另有明确具体的限定。
[0033]本专利技术中的词语“优选地”、“更优选地”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本专利技术的范围之外。
[0034]当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将D5
‑
氨基甲酸乙酯与甲醇溶液混合，制备内标物溶液；将氨基甲酸乙酯与甲醇溶液混合，然后与所述内标物溶液混合，制备标准品溶液；将待测样品与所述内标物溶液第一次混合，然后与水第二次混合，过滤，取滤液，用固相萃取柱萃取，制备试样溶液；将所述标准品溶液与所述试样溶液进行超高效液相色谱与质谱联用测定；其中，超高效液相色谱采用的流动相A为体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～1min，流动相A的体积百分数由95％变化至90％；1min～2.5min，流动相A的体积百分数由90％变化至15％；2.5min～3min，流动相A的体积百分数由15％变化至10％；3min～4min，流动相A的体积百分数为10％；4min～4.5min，流动相A的体积百分数由10％变化至95％；4.5min～6min，流动相A的体积百分数为95％。2.根据权利要求1所述的发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，超高效液相色谱的条件包括：色谱柱为C18色谱柱；柱温为35℃～45℃；流速为0.25mL/min～0.35mL/min；进样量为2μL～4μL。3.根据权利要求1所述的发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，质谱的条件包括：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为正...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆鹏杰，王紫菲，刘卿，陈霞，吴永宁，邓陶陶，赵云峰，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：