一种香加皮醇提物的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种香加皮醇提物的制备方法及应用，属于肿瘤治疗领域。本发明专利技术通过将香加皮粉碎，加入乙醇溶液，超声处理后留取过滤液，离心取上清，之后浓缩，冻干，得到香加皮醇提物，而经过检测发现香加皮醇提物可能通过导致G0/G1细胞周期阻滞来抑制细胞增殖；说明香加皮中的有效成分在抗胶质瘤的治疗中能够发挥有效作用。挥有效作用。挥有效作用。

【技术实现步骤摘要】
一种香加皮醇提物的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗领域领域，特别是涉及一种香加皮醇提物的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]胶质瘤是源自神经上皮的肿瘤，占颅脑肿瘤的40％
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50％，约占原发性恶性颅脑肿瘤的80％，年发病率为3
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8人/10万人。进行手术和放、化疗的治疗后，也仅有10％的患者能存活5年以上。目前主要应用于胶质瘤治疗的药物分为四类：替莫唑胺为基础的化疗药物，亚硝基脲为基础的药物如尼莫司汀等，分子靶向药物如伊立替康，顺铂等药物。手术结合同步放化疗仅仅只延长了胶质瘤生存期，但是治疗效果依然不够理想。因此，迫切需要寻找更加高效、低毒的治疗胶质瘤的药物。
[0003]中医药由于毒副作用较低及多组分协同作用，在多病因的疾病治疗中显示了极大的优越性。当前，许多研究发现中医药在胶质瘤的治疗上具有很好的疗效。比如：细辛醚、当归多糖、芍药苷、姜黄素、川芎嗪、蛇床子素和类黄酮等都可以抑制胶质瘤细胞的增殖，诱导其发生凋亡。中药香加皮(Cortex Periplocae,CP)又名北五加皮，为萝藦科植物杠柳Periploca sepium Bge.的干燥根皮，山东省为其主产地之一。香加皮性温、辛、苦；有毒；归肝、肾、心经；有利水消肿，祛风湿，强筋骨的作用。现代药理研究发现其具有强心、免疫调节、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性，其中抗肿瘤研究成为近些年的研究热点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种香加皮醇提物的制备方法及应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过构建人胶质瘤细胞模型，采用分子生物学方法，验证了香加皮醇提物可以显著抑制人胶质瘤细胞存活率；通过流式细胞术检测发现香加皮醇提物可能通过导致G0/G1细胞周期阻滞来抑制细胞增殖。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供了一种香加皮醇提物的制备方法，包括以下步骤：将香加皮粉碎，加入乙醇溶液，超声处理后，过滤，滤液离心取上清，之后浓缩，冻干，得到所述香加皮醇提物。
[0007]进一步的，乙醇溶液的浓度为75％。
[0008]进一步的，香加皮与乙醇溶液的质量比为1:10。
[0009]进一步的，超声处理的时间为30min。
[0010]进一步的，离心的参数为10000rpm，8min。
[0011]本专利技术还提供了一种根据上述的香加皮醇提物的制备方法所制得的香加皮醇提物。
[0012]本专利技术还提供了一种上述的香加皮醇提物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
[0013]进一步的，肿瘤为胶质瘤。
[0014]本专利技术公开了以下技术效果：
[0015]1、本专利技术从香加皮中提取得到了具有抗肿瘤作用的有效成分醇提物，该有效成分经实验证明具有体外抑制人胶质瘤细胞生长的活性；
[0016]2、本专利技术拓展了抗胶质瘤药物的原料渠道，扩大了香加皮的用途，可显著提高香加皮的附加值，为发现新的抗胶质瘤药物提供了新思路。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1为香加皮醇提物对U251和TG905细胞的半抑制浓度值；其中，A为对U251细胞的抑制图，B为对TG905细胞的抑制图，C为U251和TG905细胞的克隆形成实验结果；
[0019]图2为香加皮醇提物与细胞S期和G2/M期减少的关系；
[0020]图3为香加皮醇提物处理对U251和TG905细胞凋亡的影响。
具体实施方式
[0021]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0022]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0023]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0024]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0025]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0026]实施例1
[0027]1、实验材料
[0028]1.1细胞培养
[0029]人胶质瘤细胞(U251和TG905)购自北京中科院细胞库，用含10％胎牛血清的DMEM培养基(购自Gibco)置于37℃、含有5％CO2的培养箱中培养。隔天换液传代。
[0030]1.2药品
[0031]香加皮购自临沂市人民医院中医科。
[0032]2、实验方法与统计学分析
[0033]2.1香加皮醇化物的制备
[0034]取100g香加皮，粉碎，加入75％质量分数的乙醇混匀静止过夜(粉碎后的药粉与75％的乙醇的质量比为1:10)，超声30min，过滤，留取过滤液，如此操作三次。将三次的滤液合并，使用离心机，10000rpm，8min，得到上清液。将上清液旋转蒸发得到香加皮醇提物蒸馏液，将醇提物蒸馏液进行冻干析出，得到香加皮醇提物的冻干粉92.18g。
[0035]2.2CCK
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8检测香加皮醇提物对人胶质瘤细胞存活率的影响
[0036]人胶质瘤细胞(U251和TG905)以1
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105细胞/mL接种于96孔板，培养24h至细胞贴壁，弃去原来的培养基，更换为含有不同浓度(0、1、3、10、30、100μM)香加皮醇提物的新鲜培养基，每个浓度设置6个复孔。待人胶质瘤细胞在培养基中分别作用24h、48h、72h后，在每孔中加入90uLDMEM和10uL CCK8，在37℃的培养箱中培养2
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3h后在酶标仪上检测450nm波长处每孔吸光度值。以吸光度值表示细胞增殖能力，吸光度值越大表示细胞增殖能力越强。实验重复3次，用Graphpadprism 7.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香加皮醇提物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将香加皮粉碎，加入乙醇溶液，超声处理后，过滤，滤液离心取上清，之后浓缩，冻干，得到所述香加皮醇提物。2.根据权利要求1所述的香加皮醇提物的制备方法，其特征在于，所述乙醇溶液的质量浓度为75％。3.根据权利要求2所述的香加皮醇提物的制备方法，其特征在于，所述香加皮与乙醇溶液的质量比为1:10。4.根据权利要求1所述的香加皮醇提物的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆玉成，车峰远，郇靖，郑书馨，
申请(专利权)人：临沂市人民医院，
类型：发明
国别省市：