一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料及其制备方法，属于生物技术制药技术领域。本发明专利技术通过生物酶技术将表皮生长因子和胶原蛋白反应产生分子内交联，起到保护表皮生长因子三维分子结构，使其活性中心构象在水溶液中稳定不易被降解，交联的表皮生长因子活性产品可常温保存，存放一年生长因子活性仍保持90％以上，储存条件宽松，产品有效期延长。期延长。

【技术实现步骤摘要】
一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物技术制药
，尤其涉及一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料及其制备方法。

技术介绍

[0002]人表皮生长因子(hEGF)广泛存在于体液和多种腺体中，hEGF在体内的含量极微。随着基因工程技术的发展，生物学家通过基因重组技术，成功利用大肠杆菌为宿主生产hEGF，实现了工业化生产rhEGF。EGF可刺激多种动物细胞的增殖，常应用于促进人体表皮细胞、内皮细胞生长和修护，对于角膜损伤、烧烫伤及医美手术后等创面的修复和愈合有很好的疗效。
[0003]人表皮生长因子(hEGF)分子结构由53个氨基酸组成，分子量6201道尔顿，分子内有6个半胱氨酸组成的二硫键，形成3个分子内环型结构，组成生物活性所必须的受体结合区域，表皮生长因子是一种生物活性蛋白质，分子结构不稳定，在有水的环境中EGF分子结构易被破坏照成活力损失，通常表皮生长因子在水溶液中活性一般只能存活7
‑
10天。
[0004]目前国内以表皮生长因子(EGF)为原料生产的表皮细胞修复制剂有凝胶、水剂、敷料、冻干粉等品种，为了保护表皮生长因子的活性，在生产产品一般需要添加适当保护剂和抗氧化剂以减缓EGF的失活，但也仅限于延缓EGF的活力下降，不能根本解决EGF的失活，如何维持产品中EGF分子结构稳定，是确保产品EGF活性及使用效果的关键。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，该敷料具有保护表皮生长因子三维分子结构，使其活性中心构象在水溶液中稳定不易被降解，交联的表皮生长因子活性产品可常温保存，存放一年生长因子活性仍保持90％以上，储存条件宽松，产品有效期延长。
[0006]本专利技术的高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，由敷料基础液和表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物(hEGF
‑
HC)组成；
[0007]所述表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物，包括以下重量百分数的原料：
[0008]重组人表皮生长因子
ꢀꢀꢀꢀ
1.0
‑
5.0％，
[0009]水解胶原蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
3.0
‑
15.0％，
[0010]谷氨酰胺转氨酶
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1％，
[0011]余量为纯化水。
[0012]优选的，所述表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物占所述敷料的质量比例为0.2％。
[0013]优选的，所述重组人表皮生长因子的活性为7500万U/g。
[0014]优选的，所述水解胶原蛋白为猪水解胶原蛋白或牛水解胶原蛋白，分子量范围
200KD
‑
500KD。
[0015]优选的，所述谷氨酰胺转氨酶的活性为120U/g。
[0016]优选的，所述敷料基础液，包括以下重量百分数原料：
[0017][0018]本申请另一个目的是提供一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0019]步骤S1、制备表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物：
[0020]步骤S1
‑
1、按比例称取表皮生长因子、水解胶原蛋白，用预冷20℃纯化水搅拌溶解；
[0021]步骤S1
‑
2、加入谷氨酰胺转氨酶，在20℃恒温水浴条件下以60rpm的转速搅拌反应8
‑
10小时，用0.22um微孔滤膜过滤，收集滤液，得到表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物(hEGF
‑
HC)；放入冰箱冷藏备用；
[0022]步骤S2、制备敷料基础液:：
[0023]步骤S2
‑
1、按比例称量水、海藻糖、羟乙基纤维素、透明质酸钠，倒入加热搅拌锅，加热至90℃，搅拌溶解，保温30～35分钟；
[0024]步骤S2
‑
2、待步骤S2
‑
1中溶液的温度降至40℃以下，加入羟苯甲酯，搅拌溶解均匀，得到敷料基础液。
[0025]步骤S3：制备高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料：按比例将表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物加入到敷料基础液中，搅拌混合均匀，在洁净室环境的超净工作台灌装，封口，即得液体敷料产品。
[0026]本专利技术制备的敷料中添加了谷氨酰胺转氨酶，谷氨酰胺转氨酶是一种催化酰基转移反应的转移酶，它以生长因子肽链上的谷氨酰胺残基γ
‑
酰胺基作为酰胺基供体，胶原多肽链中赖氨酸残基ε
‑
氨基作为受体，形成蛋白质分子内ε
‑
(γ
‑
谷氨酰胺基)
‑
赖氨酸异肽键使蛋白质分子发生交联，生成表皮生长因子
‑
胶原蛋白复合物(hEGF
‑
HC)。反应式如式I：
[0027][0028]该交联产物性质稳定，谷氨酰胺转氨酶催化形成的共价键交联产物一般在无酶催化条件很难将其断裂。
[0029]谷氨酰胺转氨酶反应条件温和，PH适用范围广，尤其可在低温条件反应，交联过程避免表皮生长因子的活性损失，添加量小，交联反应完成后谷氨酰胺转氨酶残留很少，人体内本身也有谷氨酰胺转氨酶存在，不会对人体产生细胞毒性，对比其它使用化学交联剂安
全性更高。
[0030]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0031]本专利技术通过生物酶技术将表皮生长因子和胶原蛋白反应产生分子内交联，起到保护表皮生长因子三维分子结构，使其活性中心构象在水溶液中稳定不易被降解，交联的表皮生长因子活性产品可常温保存，存放一年生长因子活性仍保持90％以上，储存条件宽松，产品有效期延长。且本专利技术的制备方法操作简单，不需特殊设备和特殊反应条件，成本低廉，效果显著，反应得到的表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物可应用于凝胶、水剂、敷贴类等表皮修复产品。
具体实施方式
[0032]下面结合实施例和对比例对本专利技术作进一步说明。
[0033]实施例1
[0034]一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，由敷料基础液和表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物(hEGF
‑
HC)组成；表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物占所述敷料的质量比例为0.2％；
[0035]其中表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物由以下重量百分数原料组成：
[0036]活性为7500万U/g的重组人表皮生长因子
ꢀꢀꢀꢀ
1.0％，
[0037]分子量范围200KD
‑
500KD的猪水解胶原蛋白 3.0％，<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，其特征在于，所述敷料由敷料基础液和表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物组成；所述表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白交联物，包括以下重量百分数的原料：重组人表皮生长因子
ꢀꢀꢀꢀ
1.0
‑
5.0％，水解胶原蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
3.0
‑
15.0％，谷氨酰胺转氨酶
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1％，余量为纯化水。2.根据权利要求1所述高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，其特征在于，所述表皮生长因子
‑
水解胶原蛋白占所述敷料的质量比例为0.2％。3.根据权利要求1所述高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，其特征在于，所述重组人表皮生长因子的活性为7500万U/g。4.根据权利要求1所述高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，其特征在于，所述水解胶原蛋白为猪水解胶原蛋白或牛水解胶原蛋白，分子量范围200KD
‑
500KD。5.根据权利要求1所述高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，其特征在于，所述谷氨酰胺转氨酶的活性为120U/g。6.根据权利要求1所述高稳定性重组人表皮生长因子创面修护敷料，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆祥，何维，陆超雄，陆超军，
申请(专利权)人：广州市暨生元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：