检测小分子物质的试剂组合、试剂盒、检测系统及检测方法技术方案

本申请提供了一种检测小分子物质的试剂组合、试剂盒、检测系统及检测方法。在本申请中，在待测溶液中没有含有或含有少量小分子物质的条件下，抗体和底物蛋白结合物相结合并形成免疫复合物，第一核酸分子、第二核酸分子、第三核酸分子的互补配对产生颈环结构，第一荧光基团基于荧光共振能量转移激发第二荧光基团发射第二荧光，根据该获得到第二荧光的强度计算出小分子物质的含量。在待测溶液中含有大量小分子物质的条件下，无法形成免疫复合物和颈环结构，第二荧光基团无法发射第二荧光，故判断出待测溶液中含有大量小分子物质。本申请的检测方法简单、背景干扰小、灵敏度高、测量误差小。小。小。

【技术实现步骤摘要】
检测小分子物质的试剂组合、试剂盒、检测系统及检测方法


[0001]本申请属于化学发光检测
，具体涉及一种检测小分子物质的试剂组合、试剂盒、检测系统及检测方法。

技术介绍

[0002]人体的血液是个复杂的多组分体系，含有多种调控因子、激素等小分子物质。其中，部分小分子物质在健康组织中不分泌，而在病变组织中才分泌。这些异常分泌的小分子物质会进入血液中，因此，可以根据血液中是否存在该类小分子物质来判断人体中是否存在健康组织或病变组织。检测血液中是否存在小分子物质可以采用化学发光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)。该方法将发光基团与抗小分子物质的抗体相连，以制成检测试剂。当血液样品中不存在小分子物质时，抗体无法与血液中的小分子物质特异性结合，此时，发光基团一般不具有发光活性，除了本底荧光之外，不会产生较强的荧光强度。当待测溶液中存在小分子物质时，抗体能够与小分子物质特异性结，发光基团在发光底物的作用下发射荧光。故可以通过采用化学发光检测仪器检测待测溶液中是否存在荧光来判断小分子物质血液中是否存在小分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，其包括：第一偶联物，由第一核酸分子和抗体偶联而成；所述第一核酸分子含有第一杂交区和第二杂交区；所述抗体能与小分子物质特异性结合；第二偶联物，由底物蛋白结合物、第二核酸分子和第二荧光基团依次偶联而成；所述底物蛋白结合物由小分子底物与支架蛋白偶联而成，所述小分子底物与所述小分子物质相同；所述第二核酸分子具有第三杂交区和第四杂交区，所述第三杂交区与所述第二杂交区互补；第三偶联物，由第一荧光基团和第三核酸分子偶联而成；所述第三核酸分子含有第五杂交区和第六杂交区，所述第五杂交区与所述第四杂交区互补，所述第六杂交区与所述第一杂交区互补；所述第一荧光基团在所述抗体与所述底物蛋白结合物中的所述小分子底物相结合并且能被氧化剂氧化的条件下发出第一荧光，所述第一荧光在所述第一核酸分子、所述第二核酸分子和所述第三核酸分子相互配对的条件下激发所述第二荧光基团发出第二荧光，以根据所述第二荧光的强度和荧光强度与小分子物质含量的一一对应关系获得所述小分子物质的含量；氧化抑制试剂，包括：用于抑制所述第一荧光基团被氧化而发出所述第一荧光的抗氧化剂。2.如权利要求1所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，在待测溶液中不含有或含有少量所述小分子物质的条件下，所述抗体与所述底物蛋白结合物中的所述小分子底物特异性结合，从而所述抗体与所述底物蛋白结合物形成免疫复合物，所述第一核酸分子、所述第二核酸分子、所述第三核酸分子互补配对而形成颈环结构，使所述第一荧光基团与所述第二荧光基团的间距小于能够发生荧光共振能量转移的极限间距；在所述待测溶液中含有大量所述小分子物质的条件下，所述抗体与所述小分子物质特异性结合而与所述底物蛋白结合物中的所述小分子底物丧失结合，所述免疫复合物和所述颈环结构无法形成。3.如权利要求2所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述第一荧光基团的发射光谱与所述第二荧光基团的吸收光谱存在重叠；和/或所述第一荧光基团为吖啶酯；和/或所述第二荧光基团为量子点；和/或所述第一核酸分子、所述第二核酸分子和所述第三核酸分子为单链DNA分子。4.如权利要求3所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述量子点为核壳结构量子点，其核层材料选自CdSe、CdS、CdTe、CdSeTe、CdZnS、ZnTe、CdSeS、PbS和PbTe中的一种或多种，其壳层材料选自ZnS、ZnSe、ZnSeS、PbS和PbSeS中的一种或多种；和/或所述量子点的粒径范围为3至5nm；和/或所述量子点的最大吸收波长为470nm，最大发射波长为605nm；和/或所述吖啶酯的最大发射波长为430nm。5.如权利要求1所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述第一核酸分子的3
’
末端的糖环通过第一偶联剂与所述抗体的氨基共价连接；和/或所述第二核酸分子的3
’
末端与所述第二荧光基团连接，并且其5
’
末端的糖环通过第二偶联剂与所述支架蛋白的氨基共价连接；和/或
所述第三核酸分子的5
’
末端的糖环与所述第一荧光基团共价连接。6.如权利要求5所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述第二核酸分子的3
’
末端的糖环经过巯基修饰，所述第二荧光基团的表面经过氨基修饰，所述巯基通过第三偶联剂与所述第二荧光基团的表面的氨基共价连接；和/或所述第一偶联剂为双琥珀酰亚胺辛二酸酯钠盐；和/或所述第二偶联剂为双琥珀酰亚胺辛二酸酯钠盐；和/或所述第三偶联剂为4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯。7.如权利要求1所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述第一核酸分子中，按照从5
’
端到3
’
端的顺序，所述第一杂交区位于所述第二杂交区的上游；和/或所述第二核酸分子中，按照从5
’
端到3
’
端的顺序，所述第三杂交区位于所述第四杂交区的上游；和/或所述第三核酸分子中，按照从5
’
端到3
’
端的顺序，所述第五杂交区位于所述第六杂交区的上游；和/或所述第一核酸分子具有55个核苷酸，所述第一杂交区覆盖所述第一核酸分子从5
’
端开始的第3至10个碱基位点，所述第二杂交区覆盖所述第一核酸分子从5
’
端开始的第13至19个碱基位点；和/或所述第二核酸分子具有53个核苷酸，所述第三杂交区覆盖所述第二核酸分子从5
’
端开始的37至43个碱基位点，所述第四杂交区覆盖所述第二核酸分子从5
’
端开始的第44至51个碱基位点；和/或所述第三核酸分子具有22个核苷酸，所述第五杂交区覆盖所述第三核酸分子从5
’
端开始的第3至10个碱基位点，所述第六杂交区覆盖所述第三核酸分子从5
’
端开始的第11至18个碱基位点。8.如权利要求1所述的用于检测小分子物质的试剂组合，其特征在于，所述第一杂交区从5
’
端到3
’
端为GCTGAGTT，所述第六杂交区从5
’
端到3
’
端为AACTCAGC；和/或所述第二杂交区从5
’
端到3
’
端为CAACGAC，所述第三杂交区从5
’
端到3
’
端为GTCGTTG；和/或所述第四杂交区从5
’
端到3
’
端为GCTGAGAT，所述第五杂交区从5
’
端到3
’
端为ATCTCAGC；和/或所述第一核酸分子的全长序列如SEQ ID No：1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹丹，成舜，
申请(专利权)人：南京浦光生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：