一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂及方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂及方法，一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂，配方包括：甲醇、乙腈和水，各组分的重量份数分别是：50

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂及方法


[0001]本专利技术涉及医学检测分析
，具体为一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂及方法。

技术介绍

[0002]奥氮平、氯氮平、利培酮和阿立哌唑是4种常见的精神科药物，精神疾病患者经常独立或联合使用该4种药物，进行这4种药物的血药浓度同时分析，可减少临床多次采血，降低检验成本，时时监测可用以评价疗效或确定给药方案，使给药方案个体化，以提高药物治疗水平，达到临床安全、有效、合理的用药。
[0003]目前临床上常用的检测技术主要是高效液相法和液质串联质谱法，而同时检测这4种药物浓度的试剂没有，各个实验室目前有着不同的前处理方法，采用自配试剂，检测设备与方法不同，检测结果也达不到统一的标准，实验室间以及各设备之间的同一样本的检测结果没有可比性，并且在监测的过程中，检测用具消毒杀菌不彻底，大大降低了检测的精准度和确定性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂及方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂，配方包括：甲醇、乙腈和水，各组分的重量份数分别是：50
‑
51份的甲酸、37.5
‑
38份的乙腈和12.5
‑
13份的水。
[0006]一种同时检测血清中多种药物浓度的检测方法，包括以下步骤，步骤一，原材料准备；步骤二，杀菌消毒；步骤三，标准品制备；步骤四，试剂制备；步骤五，待测血样处理；步骤六，标准曲线建立；步骤七，样品测定；步骤八，数据计算；
[0007]其中在上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别进行称取50
‑
51份的甲酸、37.5
‑
38份的乙腈和12.5
‑
13份的水，并且将奥氮平对照品、氯氮平对照品、利培酮对照品，阿立哌唑对照品，内标奥氮平
‑
D3、内标利培酮
‑
D4、内标氯氮平
‑
D8和内标阿立哌唑
‑
D8等药品准备好；
[0008]其中在上述步骤二中，将检测过程中需要使用的试管、量杯、烧杯、离心管和移液枪等设备首先利用医用酒精进行杀菌，随后利用蒸馏水进行超声波清洗，清洗完毕后利用紫外线杀菌柜进行消毒杀菌，完成后备用；
[0009]其中在上述步骤三中，取用适量步骤一中选取的医药公司生产的奥氮平对照品、氯氮平对照品和利培酮对照品加入到烧杯中，此时将4种精神药物的标准品配制成质量浓度为1mg/ml的标准品储备液溶液，随后再将所述标准品储备液按照一定的步骤逐步的稀释分别配制成混合标准品工作液，然后选取适量的四种标准药品，随后用稀释液配制为质控工作液备用；
[0010]其中在上述步骤四中，取用步骤二中消毒之后的试管，随后将步骤一中称取的甲醇、乙腈和水加入，同时加入0.0025mol
·
L
‑1甲酸铵，均匀混合制成检测试剂，重新取一个消毒后的试管，随后将步骤二中选取的内标奥氮平
‑
D3、内标利培酮
‑
D4、内标氯氮平
‑
D8和内标阿立哌唑
‑
D8加入适量，随后将所述4种精神药物的内标品配制成质量浓度为1mg/ml的内标储备液溶液，继而再见内标储备液按照步骤逐步稀释分别配制成所述混合内标工作液备用；
[0011]其中在上述步骤五中，取待检测的血液样本0.1mL置于2mL的离心管内，加入内标工作液20μL，再加入乙腈0.5mL，旋涡振荡2min，继而进行离心后吸取上清液约100μL于进样瓶中；
[0012]其中在上述步骤六中，取用适量正常人空白血清加入到离心管中，将空白标准血样利用串联质谱仪和高效液相色谱仪进行LC
‑
MS/MS法检测，采用试剂A进行等度洗脱，得到奥氮平、氯氮平、利培酮和阿立哌唑4种药物的内标色谱图，随后在色谱图上得到标准品峰面积和内标物峰面积，以目标物与内标浓度比值为横坐标，以目标物与内标响应值比值为纵坐标，用加权最小二乘法拟合标准曲线，权重为1/X2；
[0013]其中在上述步骤七中，将步骤五中得到的待测样品利用串联质谱仪和高效液相色谱仪重复步骤六中的检测过程，得出待测样品中的奥氮平、氯氮平、利培酮和阿立哌唑4种药物的内标色谱图，继而得出待测样品中的待测目标物的峰面积与内标物的峰面积；
[0014]其中在上述步骤八中，采用“Labsoulation”软件采集信号，采用“Quantitative Analysis Version B.03.02”软件进行定量分析，采用“Qualitative Analysis Version B.03.01”软件进行定性分析，将步骤七中得到的待测样品中待测目标物的峰面积与内标物的峰面积分别带入步骤六中得到的标准曲线方程y＝ax+b中，得出待测样品中的奥氮平、氯氮平、利培酮和阿立哌唑的浓度，采用Microsoft Excel 2003进行数据处理，保留4位有效数字。
[0015]根据上述技术方案，所述甲醇和乙腈均为色谱纯；甲酸铵为质谱纯，水为去离子水，且水的电导率为18MΩ。
[0016]根据上述技术方案，所述步骤二中，超声波清洗的时间为30
‑
60s，紫外线杀菌的时间为20
‑
30min。
[0017]根据上述技术方案，所述步骤三中，质控工作液中，所述奥氮平的浓度为100，500，800ng/ml，利培酮的浓度为30，100，160ng/ml，氯氮平的浓度为200，1000，1600ng/ml，阿立哌唑的浓度为200，900，1600ng/ml。
[0018]根据上述技术方案，所述步骤三中，稀释公式为：其中f为稀释因子。
[0019]根据上述技术方案，所述步骤五中，离心机为TGL
‑
16G台式高速离心机，离心机转速为13000
‑
15000r/min，离心时间为2
‑
3min。
[0020]根据上述技术方案，所述步骤五中，涡旋混合器为XW
‑
80涡旋混合器。
[0021]根据上述技术方案，所述步骤六中，色谱柱为日本Shimpack VP
‑
ODSC18色谱柱；流动相为检测试剂；流速为0.4mL
·
min
‑1；柱温为35℃；进样量为1μL。
[0022]根据上述技术方案，所述步骤六中，质谱条件为电喷雾电离源，正离子化，毛细管电压4000V，喷雾气压力50PSI，干燥气体流速10L
·
min
‑1，干燥气体温度350℃，扫描方式为
选择性离子监测。
[0023]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
[0024]1.本专利技术采用乙腈进行蛋白沉淀，操作简本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血清中多种药物浓度的检测试剂，配方包括：甲醇、乙腈和水，其特征在于：各组分的重量份数分别是：50
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51份的甲酸、37.5
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38份的乙腈和12.5
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13份的水。2.一种同时检测血清中多种药物浓度的检测方法，包括以下步骤，步骤一，原材料准备；步骤二，杀菌消毒；步骤三，标准品制备；步骤四，试剂制备；步骤五，待测血样处理；步骤六，标准曲线建立；步骤七，样品测定；步骤八，数据计算；其特征在于：其中在上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别进行称取50
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51份的甲酸、37.5
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38份的乙腈和12.5
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13份的水，并且将奥氮平对照品、氯氮平对照品、利培酮对照品，阿立哌唑对照品，内标奥氮平
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D3、内标利培酮
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D4、内标氯氮平
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D8和内标阿立哌唑
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D8等药品准备好；其中在上述步骤二中，将检测过程中需要使用的试管、量杯、烧杯、离心管和移液枪等设备首先利用医用酒精进行杀菌，随后利用蒸馏水进行超声波清洗，清洗完毕后利用紫外线杀菌柜进行消毒杀菌，完成后备用；其中在上述步骤三中，取用适量步骤一中选取的医药公司生产的奥氮平对照品、氯氮平对照品和利培酮对照品加入到烧杯中，此时将4种精神药物的标准品配制成质量浓度为1mg/ml的标准品储备液溶液，随后再将所述标准品储备液按照一定的步骤逐步的稀释分别配制成混合标准品工作液，然后选取适量的四种标准药品，随后用稀释液配制为质控工作液备用；其中在上述步骤四中，取用步骤二中消毒之后的试管，随后将步骤一中称取的甲醇、乙腈和水加入，同时加入0.0025mol
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L
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1甲酸铵，均匀混合制成检测试剂，重新取一个消毒后的试管，随后将步骤二中选取的内标奥氮平
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D3、内标利培酮
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D4、内标氯氮平
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D8和内标阿立哌唑
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D8加入适量，随后将所述4种精神药物的内标品配制成质量浓度为1mg/ml的内标储备液溶液，继而再见内标储备液按照步骤逐步稀释分别配制成所述混合内标工作液备用；其中在上述步骤五中，取待检测的血液样本0.1mL置于2mL的离心管内，加入内标工作液20μL，再加入乙腈0.5mL，旋涡振荡2min，继而进行离心后吸取上清液约100μL于进样瓶中；其中在上述步骤六中，取用适量正常人空白血清加入到离心管中，将空白标准血样利用串联质谱仪和高效液相色谱仪进行LC
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MS/MS法检测，采用试剂A进行等度洗脱，得到奥氮平、氯氮平、利培酮和阿立哌唑4种药物的内标色谱图，随后在色谱图上得到标准品峰面积和内标物峰面积，以目标物与内标浓度比值为横坐标(x)，以目标物与内标响应值比值为纵坐标(y)，用加权最小二乘法拟合标准曲线，权重为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClG零一N三零零二，
申请(专利权)人：中山市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：