PRAMETCR受体和其用途制造技术

本发明专利技术涉及能够结合具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PRAME TCR受体和其用途


[0001]本专利技术涉及能够结合具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA
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A2结合形式的PRAME肽的T细胞受体(TCR)。本专利技术还包括编码所述TCR的核酸、包含所述核酸的载体和包含所述TCR、所述核酸序列或所述载体的宿主细胞。还包括获得本文所述的TCR的方法；包含TCR、核酸、载体和/或宿主细胞的药物或诊断组合物；以及在体外检测受试者中癌症的存在的方法，包含TCR、宿主细胞和/或药物组合物。此外，本专利技术涉及TCR、核酸和/或载体用于产生修饰的淋巴细胞的用途。

技术介绍

[0002]形成细胞介导的免疫系统的一部分的T淋巴细胞(或T细胞)在根除病原体中起重要作用。T细胞在胸腺中发育并在它们的表面上表达T细胞受体分子，从而容许识别在有核细胞上表达的主要组织相容性复合体(MHC)分子上呈递的肽(抗原呈递)。病原体的抗原即由MHC分子呈递的外源抗原将引发强有力的T细胞应答，而自身抗原通常不会导致T细胞应答，这是因为在所述T细胞的发育期间胸腺中对自身抗原具有特异性的T细胞的负向选择。因此，免疫系统可区分呈递外源抗原或自身抗原的有核细胞，并通过T细胞的强效细胞因子释放和细胞毒性机制特异性靶向和根除感染细胞。
[0003]免疫系统的能力已被识别为未来癌症疗法的有前景的工具。在过去的十年里，研究已经开始通过使用过继性细胞转移(ACT)来开发T细胞的独特性质，过继性细胞转移包括施用离体扩增的供体源淋巴细胞。ACT是用于治疗癌症的有吸引力的概念，因为其不需要患者的免疫能力，并且转移的淋巴细胞的特异性可靶向非突变的且因此免疫原性差的肿瘤抗原，所述肿瘤抗原通常不能有效地触发自身T细胞应答。尽管ACT已显示是各种类型的癌症的有前景的治疗，但其作为临床治疗的广泛应用因需要从每个患者中定制分离和表征肿瘤特异性T细胞而受到阻碍，所述定制分离和表征可为困难且耗时的、并且也经常无法产生高亲和力T细胞的过程(Xue等人，Clin Exp Immunol.2005年2月；139(2):167
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172；Schmitt等人，Hum Gene Ther.2009年11月；20(11):1240
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1248)。
[0004]肿瘤抗原特异性T细胞受体(TCR)向原代T细胞的遗传转移可克服ACT目前的一些局限性，因为其容许快速产生具有定义的抗原特异性的肿瘤反应性T淋巴细胞，即使在免疫受损的患者中也是如此。然而，鉴定携带特异性识别肿瘤抗原并在体内展现所需抗肿瘤效应的TCR的合适的T细胞克隆仍是正在进行的研究主题。考虑到2012年全球发生约1410万新的癌症病例且癌症目前是全世界约14.6％的所有人类死亡的病因，迫切需要新颖且高效的治疗选择。本专利技术的目的是满足上述需要。
[0005]PRAME是在众多种肿瘤(优选黑色素瘤)中表达的肿瘤相关抗原。此外，PRAME已描述为诸如葡萄膜黑色素瘤的转移的独立生物标记(Fiedl等人，Clin Cancer Res 2016年3月；22(5):1234
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1242)并描述为DLBCL的预后标记(Mitsuhashi等人，Hematology 2014,1/2014)。其在除睾丸外的正常组织中不表达。这种表达模式与其它癌症睾丸(CT)抗原(诸如MAGE、BAGE、GAGE)的表达模式相似。然而，与这些其它CT抗原不同，这种基因也在急性白血
病中表达。编码的蛋白用作视黄酸受体的阻遏物，并可能通过这种功能赋予癌细胞生长优点。选择式剪接导致多种转录物变体。还发现PRAME在三阴性乳腺癌中的过表达通过诱导上皮
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至
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间质转化促进癌细胞运动(Al
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Khadairi等人，Journal of Translational Medicine 2019；17:9)。已报道在慢性淋巴细胞性白血病中缺失PRAME，然而，这与功能无关，这是因为基因在B细胞中不表达，并且缺失是生理性免疫球蛋白轻链重排的结果。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及能够特异性识别肿瘤相关抗原PRAME的新颖T细胞受体(TCR)。具体来说，鉴定的TCR特异性识别PRAME氨基酸序列SLLQHLIGL，在本文中也称为PRAME
SLL
肽。本专利技术至少部分地基于如下令人惊讶的发现：当与现有技术中已知的PRAME TCR相比时，针对特异性PRAME肽结合的所述分离的T细胞受体具有突出的性质。具体地，能够与PRAME肽SLLQHLIGL结合的本专利技术的T细胞受体还提供高功能亲合力以及有利的肿瘤细胞识别和杀伤性质。与之相反，所述TCR不识别正常细胞和不相关的肽。此外，T细胞受体识别HLA分子(人类白细胞抗原，HLA)上并且尤其是由HLA亚等位基因HLA
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A*02:01、HLA
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A*02:02和HLA
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A*02:04编码的HLA分子上呈递的肽，甚至容许治疗表达频率较低的呈递PRAME
SLL
的HLA
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A*02等位基因的癌症患者。
[0007]在第一方面，本专利技术涉及能够结合具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA
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A2结合形式的PRAME肽的T细胞受体(TCR)，其中TCR包括：TCRα链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:6)或与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；和/或TCRβ链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:7)或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成。
[0008]另一方面，本专利技术涉及能够结合具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA
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A2结合形式的PRAME肽的T细胞受体(TCR)，其中TCR包括：
[0009]a)TCRα链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:6)或与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；TCRα链可变区的CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或由所述氨基酸序列组成，以及TCRα链可变区的CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4或由所述氨基酸序列组成；和
[0010]b)TCRβ链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:7)或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；TCRβ链可变区的CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或由所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种能够结合PRAME肽的T细胞受体(TCR)，所述PRAME肽具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA
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A2结合形式，其中所述TCR包括：a)TCRα链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:6)或与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；TCRα链可变区的CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或由所述氨基酸序列组成；以及TCRα链可变区的CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4或由所述氨基酸序列组成，以及b)TCRβ链可变区的CDR3，其包含氨基酸序列(SEQ ID NO:7)或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；TCRβ链可变区的CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或由所述氨基酸序列组成；以及TCRβ链可变区的CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5或由所述氨基酸序列组成。2.根据权利要求1所述的TCR，其中所述HLA
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A2是HLA
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A*02:01、HLA
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A*02:02或HLA
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A*02:04编码分子。3.根据权利要求1或2所述的TCR，其中与序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其一部分或它的HLA
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A2结合形式的结合诱导用所述TCR转导或转染的细胞的IFN
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γ分泌。4.根据权利要求1至3中任一项所述的TCR，其中如通过IFN
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γ免疫测定法测量，半最大IFN
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γ分泌小于10
‑7M。5.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括：a)TCRα链，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO:6的CDR3，以及b)TCRβ链，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:3的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的CDR3。6.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR包括a)TCRα链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8或由所述氨基酸序列组成，以及b)TCRβ链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9或由所述氨基酸序列组成。7.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR包括a)TCRα链，其包含选自SEQ ID NO:10的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；以及b)TCRβ链，其包含选自SEQ ID NO:11的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成。8.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR包括彼此共价连接以形成TCR异源二聚体或多聚体的至少一个TCRα链和至少一个TCRβ链。9.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR选自初始TCR、TCR变体、TCR片段或TCR构建体。10.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR还包括一或多种任选地选自以下的融合组分：Fc受体；Fc结构域，包括IgA、IgD、IgG、IgE和IgM；细胞因子，包括IL
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2或IL
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15；毒素；抗体或其抗原结合片段，包括抗CD3、抗CD28、抗CDS、抗CD16或抗CD56抗体或其抗原结
合片段；CD247(CD3
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ζ)、CD28、CD137、CD134结构域或它们的组合，任选还包括至少一种接头。11.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR包括a)至少一个如权利要求1至10中任一项所限定的TCRα链；和/或b)至少一个如权利要求1至10中任一项所限定的TCRβ链；和/或c)针对淋巴细胞表面上的抗原或表位的抗体或单链抗体片段(scFv)，其中所述TCRα链和TCRβ链彼此连接，并且任选地通过接头与所述抗体或scFv融合。12.根据权利要求11所述的TCR，其中所述抗原选自CD3、CD28、CD5、CD16或CD56...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：德国生物新技术公司，
类型：发明
国别省市：