一种利用磁珠富集毒品的方法及其所用的抗体偶联磁珠技术

本发明专利技术属于检测技术领域，尤其涉及一种利用磁珠富集毒品的方法及其所用的抗体偶联磁珠。所述方法包括：1)取抗体偶联磁珠悬液与待测样混匀，静置反应使抗体偶联磁珠吸附待测样中的毒品，随后磁力分离出吸附毒品的磁珠；2)将步骤1)所得的吸附毒品的磁珠与洗脱剂混匀，并静置反应使得毒品被洗脱后磁力分离磁珠得到洗脱液，即将毒品富集至洗脱液中；所述待测样包括生活污水和/或生物体液。本发明专利技术通过简洁高效的方法能够实现快速的毒品浓缩富集，以便用于快速的定性检测和/或定量分析；整个方法不额外引入杂质或影响后续检测分析的成分，保证了检测分析的准确性和高精度，并且有效性和可信度高。和可信度高。

【技术实现步骤摘要】
一种利用磁珠富集毒品的方法及其所用的抗体偶联磁珠


[0001]本专利技术属于检测
，尤其涉及一种利用磁珠富集毒品的方法及其所用的抗体偶联磁珠。

技术介绍

[0002]随着社会的发展，药物滥用成为社会重点关注现象。虽然现有的技术和设备能够快速有效地实现毒品的定性检测甚至定量分析，但现有的禁毒缉查工作难度仍然较大，主要原因便在于定性检测或定量分析均需要毒品浓度达到检测或分析的阈值，而无法有效进行大范围的有效检测确定毒源。而简单的通过浓缩等方式富集毒品，则容易增大检测误差，尤其在浓缩过程中毒品发生分解或杂质含量上升导致出现假阳性等情况。因而需要对待测的样品进行复杂的前处理步骤，如前期的杂质过滤、萃取、氮吹等步骤，存在工艺复杂、成本高昂且效率低下等问题。
[0003]因此，如何实现对生活污水或人体排泄出来的生物体液等可能含有超低浓度毒品的待测样进行有效的检测一直是一个重要的研究方向。

技术实现思路

[0004]为解决现有的低浓度毒品检测难度大，甚至无法进行有效检测，而对超低浓度的毒品进行前处理又存在成本高昂、效率低下等问题，本专利技术提供了一种利用磁珠富集毒品的方法，以及所述方法所用的抗体偶联磁珠。
[0005]本专利技术的目的在于：一、能够有效时限毒品的快速浓缩以便于定性检测和/或定量分析；二、简化富集过程、提高富集效率，并且能够实现高倍率的富集；三、使得富集过程不易受杂质或环境因素干扰。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。
[0007]一种利用磁珠富集毒品的方法，所述方法包括：1)取抗体偶联磁珠悬液与待测样混匀，静置反应使抗体偶联磁珠吸附待测样中的毒品，随后磁力分离出吸附毒品的磁珠；2)将步骤1)所得的吸附毒品的磁珠与洗脱剂混匀，并静置反应使得毒品被洗脱后磁力分离磁珠得到洗脱液，即将毒品富集至洗脱液中；所述待测样包括生活污水和/或生物体液。
[0008]本专利技术技术方案能够有效用于任意方便采集的待测样，如地区生活污水排放管道等采样，或对特定人群进行体液检测。尤其针对于生活污水的采样，现有对生活污水采样后需要进行较为繁琐的净化纯化的过程，才能够用于定性检测，但现有的如过滤、萃取等常规化的工艺并不能有效地避免杂质影响，非常容易出现假阳性检测，因而需要反复的检验鉴定。但对于本专利技术方案而言，通过抗体偶联磁珠进行特异性结合反应，能够非常有效地避免
杂质成分的影响，并且通过磁力分离的方式，还能够有效分离去除固体杂质。通过特异性的结合反应后洗脱在洗脱液中，即能够实现有效的富集。
[0009]并且，富集浓度放大倍率可控，控制待测样和洗脱剂的体积比即可实现放大倍率的控制，可有效适配于定量分析使用，通过有效的定量分析进而实现排放源头的判断和确定。
[0010]作为优选，步骤1)所述抗体偶联磁珠为偶联有毒品抗体的磁珠；所述磁珠为羧基磁珠。
[0011]羧基磁珠是生物磁珠的一种，其具有超强的顺磁性，在磁场中能够迅速聚集，而其还具有容易通过磁分离的方式实现均匀分散的特性。而对于本专利技术技术方案而言，磁珠既要容易富集、又要容易分散，其能够通过分散的方式快速有效地捕集待测样中的目标成分，而后又能够通过磁场快速聚集分离。
[0012]作为优选，所述毒品抗体与磁珠的偶联方式为：a)将羧基磁珠配制为分散悬液，磁分离后移除上清液并进行至少三次偶联
‑
分离，所述偶联
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分离为加入偶联缓冲液后将磁珠分散均匀再磁分离移除上清液，得到前驱体；b)向前驱体中加入抗体，并补足偶联缓冲液至抗体浓度为220～440μg/mL，再次分散为均匀的悬液，反应15～30min得到偶联磁珠悬液；c)加入EDC溶液并在保持磁珠均匀混悬状态下反应后磁分离移除上清液，加入封闭液并分散，保持磁珠均匀混悬状态下反应后重复磁分离并移除上清液的操作至少三次，得到封闭磁珠，再加入保存液保存静置。
[0013]具体的，本专利技术步骤a)所用偶联缓冲液为25mM的MES缓冲液(pH＝5.0)，步骤c) 所用封闭液和保存液均为含有1wt％BSA(牛血清白蛋白)和0.05wt％Tween20(吐温20) 的50mM Tris溶液液(pH＝7.4)。
[0014]作为优选，所述抗体偶联磁珠悬液与待测样的体积比为1：(20～30)；所述待测样与洗脱剂的体积比为100：(0.5～2)。
[0015]控制磁珠与待测样的用量体积比，能够避免磁珠浪费。而磁珠用量过少，则无法有效发生特异性结合反应。同时，在用于定量分析时，磁珠的用量过少，同样会导致精确度不高的问题。因此，根据现有的检测手段，抗体偶联磁珠悬液的最佳用量为上述比例。而控制待测样比例和洗脱剂比例则是能够在浓度放大50～200倍范围内调整，洗脱剂用量过小不利于全部洗脱特异性结合的毒品，导致后续的定量分析检测并不准确，而用量过大则放大倍数较低，实际效果不佳。
[0016]作为优选，步骤1)和步骤2)所述静置反应时长均≥12min。
[0017]由于本专利技术采用抗体特异性结合毒品的方法来实现对毒品的特异性分离，因而不需要过长的反应时间，仅需控制反应时长≥12min即可，相较于萃取等过程，效率大幅度上升且可快速实现精确分离。
[0018]作为优选，
步骤2)所述的洗脱剂为醋酸。
[0019]本专利技术以醋酸作为洗脱液具有良好的洗脱效果，此外还能够有效避免对毒品成分造成干扰，以影响后续的检测操作。
[0020]作为优选，步骤2)所述将毒品富集至洗脱液后，采用中和剂中和后用于毒品的浓度检测。
[0021]采用中和剂降低洗脱剂的本底噪音可有效提高检测精度，避免假阳性或假阴性等情况发生。具体的，由于本专利技术所用的洗脱剂为醋酸，因此本专利技术可简单采用碱性缓冲液进行中和，如Tris缓冲液等。
[0022]一种抗体偶联磁珠。
[0023]本专利技术抗体偶联磁珠可有效用于生活污水或生物体液的毒品浓缩检测。
[0024]本专利技术的有益效果是：1)通过简洁高效的方法能够实现快速的毒品浓缩富集，以便用于快速的定性检测和/或定量分析；2)整个方法不额外引入杂质或影响后续检测分析的成分，保证了检测分析的准确性和高精度，并且有效性和可信度高；3)操作和实施成本低，有利于大规模的推广使用。
具体实施方式
[0025]以下结合具体实施例对本专利技术作出进一步清楚详细的描述说明。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本专利技术。此外，下述说明中涉及到的本专利技术的实施例通常仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0026]如无特殊说明，本专利技术实施例所用原料均为市售或本领域技术人员可获得的原料；如无特殊说明，本专利技术实施例所用方法均为本领域技术人员所掌握的方法。
[0027]实施例1一种抗体偶联磁珠悬液的制备方法，所述方法具体为：a)以涡旋混匀器将羧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用磁珠富集毒品的方法，其特征在于，所述方法包括：1)取抗体偶联磁珠悬液与待测样混匀，静置反应使抗体偶联磁珠吸附待测样中的毒品，随后磁力分离出吸附毒品的磁珠；2)将步骤1)所得的吸附毒品的磁珠与洗脱剂混匀，并静置反应使得毒品被洗脱后磁力分离磁珠得到洗脱液，即将毒品富集至洗脱液中；所述待测样包括生活污水和/或生物体液。2.根据权利要求1所述的一种利用磁珠富集毒品的方法，其特征在于，步骤1)所述抗体偶联磁珠为偶联有毒品抗体的磁珠；所述磁珠为羧基磁珠。3.根据权利要求2所述的一种利用磁珠富集毒品的方法，其特征在于，所述毒品抗体与磁珠的偶联方式为：a)将羧基磁珠配制为分散悬液，磁分离后移除上清液并进行至少三次偶联
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分离，所述偶联
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分离为加入偶联缓冲液后将磁珠分散均匀再磁分离移除上清液，得到前驱体；b)向前驱体中加入抗体，并补足偶联缓冲液至抗体浓度为220～440μg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱城城，李因来，
申请(专利权)人：杭州博岳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：