与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用。本发明专利技术基于全转录组测序首次发现环状RNA circLMO7在晋汾白猪肌肉组织中高表达，且在其1d、90d、180d中表达量显著下降，通过PCR及Sanger测序和RNase R消化实验证实了circLMO7的客观存在；进一步利用实时荧光定量PCR证实circLMO7在晋汾白猪1d、90d、180d中表达量持续下降；利用EdU、CCK

【技术实现步骤摘要】
与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用


[0001]本专利技术涉及分子遗传
，具体地说，涉及一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用。

技术介绍

[0002]猪肉是我国最重要的肉类来源之一，占肉类消费总量的近40％，骨骼肌作为动物体中占比较大的组织，直接决定家畜的产肉性能。骨骼肌发育是一个高度协调的过程，主要包括由位于中胚层的间充质干细胞增殖和分化成成肌细胞、成肌肌细胞融合成多核肌纤维以及肌纤维的成熟。这些过程由肌源性基因如肌源性调节因子(MRF)和成对盒(PAX)基因的表达严格而复杂地控制。与此同时，非编码RNA(ncRNAs)，如microRNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)，它们在骨骼肌生长发育中调控作用逐渐被揭晓。
[0003]CircRNA是一种反向剪接形成的共价闭合环状RNA分子，由于高通量RNA测序(RNA
‑
seq)的发展，在真核生物(包括人类、小鼠、牛和鸡)中鉴定出数千个circRNA。大部分circRNA的结构非常稳定，丰度高，具有时空表达特异性，这预示着circRNA可能在生物机体基因表达调控中发挥重要作。近几年关于circRNA在医学上作为相关疾病的诊疗靶点的研究引起了广泛关注，而与猪骨骼肌卫星细胞有关的circRNA研究鲜有报道。探究在猪骨骼肌生长发育中扮演重要角色的新circRNA，不仅能揭示骨骼肌卫星细胞功能的新机制，还将提供肌肉疾病新的诊疗靶点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用。
[0005]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA，所述circRNA为circLMO7，其对应的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]第二方面，本专利技术提供所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增殖的标志物在制备用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。
[0007]第三方面，本专利技术提供一对用于检测所述circRNA的引物，包括如SEQ ID NO:2所示的上游引物和如SEQ ID NO:3所示的下游引物。
[0008]第四方面，本专利技术提供用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测circLMO7表达水平的试剂。
[0009]进一步地，所述试剂盒包括SEQ ID NO:2
‑
3所示引物。
[0010]第五方面，本专利技术提供circLMO7的抑制剂，所述抑制剂为SEQ ID NO:8
‑
9、SEQ ID NO:10
‑
11或SEQ ID NO:12
‑
13所示的siRNA，或者上述三对siRNA的组合。
[0011]第六方面，本专利技术提供一种鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖效率的方法，所述方法包括：检测猪骨骼肌卫星细胞中circLMO7的相对表达水平，若circLMO7的表达水平显著降低，则表明猪骨骼肌卫星细胞增殖效率低。
[0012]进一步地，利用SEQ ID NO:2
‑
3所示引物检测circLMO7的表达水平。
[0013]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：
[0014]本专利技术首次在猪中发现一种新型的circRNA circLMO7，通过circLMO7功能获得和缺失发现circLMO7能够影响猪骨骼肌卫星细胞的增殖速率，从而提供了一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA标志物，利用此方法可以鉴定猪骨骼肌卫星细胞的增殖情况，并为针对肌肉生长发育的临床研究提供新的思路和方法。
附图说明
[0015]图1为本专利技术较佳实施例中circLMO7在1日龄晋汾白猪背最长肌组织中PCR产物测序结果。
[0016]图2为本专利技术较佳实施例中circLMO7 RNase R酶消化试验结果。*表示差异显著，**表示差异极显著。NC表示不添加Rnase R酶的空白对照组。
[0017]图3为本专利技术较佳实施例中circLMO7在1日龄、90日龄和180日龄晋汾白猪背最长肌组织中的表达变化。不同大写字母表示差异极显著。
[0018]图4为本专利技术较佳实施例中circLMO7在猪骨骼肌卫星细胞中的过表达效率。NC代表对照组，OE代表circLMO7过表达组。*表示差异显著，**表示差异极显著。
[0019]图5为本专利技术较佳实施例中circLMO7在猪骨骼肌卫星细胞中的干扰效率。NC代表对照组，Smart Silence代表circLMO7干扰组。*表示差异显著，**表示差异极显著。
[0020]si
‑
NC表示空白对照组；si
‑
1、si
‑
2、si
‑
3分别表示三对小干扰RNA。
[0021]图6和图7为本专利技术较佳实施例中用EdU染色和Image J统计分析检测circLMO7对猪骨骼肌卫星细胞增殖能力的影响。*表示差异显著，**表示差异极显著。NC表示空白对照组。
[0022]图8和图9为本专利技术较佳实施例中用CCK
‑
8法检测circLMO7对猪骨骼肌卫星细胞增殖能力的影响。*表示差异显著，**表示差异极显著。NC表示空白对照组。
[0023]图10和图11为本专利技术较佳实施例中转染Smart Silence 48h后用qPCR检测增殖相关基因的表达变化。*表示差异显著，**表示差异极显著。NC表示空白对照组。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供一种环状RNA circLMO7及其应用。本专利技术首先通过高通量测序和克隆测序，发现和鉴定了一种新的环状RNA circLMO7。随后设计并合成circLMO7的siRNA和过表达载体，采用脂质体法转染猪骨骼肌卫星细胞，干扰和过表达猪骨骼肌卫星细胞中circLMO7的表达水平，通过改变猪骨骼肌卫星细胞中circLMO7的表达，从而改变猪骨骼肌卫星细胞的增殖速率。
[0025]本专利技术还提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA标志物的检测方法，利用此方法可以鉴定猪骨骼肌卫星细胞的增殖情况，并为针对肌肉生长发育的临床研究提供新的思路和方法。
[0026]本专利技术采用如下技术方案：
[0027]本专利技术提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA标志物，该circRNA标志物为circLMO7，其序列如SEQ ID NO:1所示。
[0028]本专利技术还提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA标志物即circLMO7的
检测引物，该检测引物为特异性扩增circLMO7的发散型引物。
[0029]本专利技术还提供了一种鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的产品，所述产品通过生物信息学预测技术和核酸扩增技术检测样品中circLMO7的表达水平。所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA，其特征在于，所述circRNA为circLMO7，其对应的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。2.权利要求1所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增殖的标志物在制备用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。3.用于检测权利要求1所述circRNA的引物，其特征在于，包括如SEQ ID NO:2所示的上游引物和如SEQ ID NO:3所示的下游引物。4.用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测circLMO7表达水平的试剂；其中，circLMO7的序列如SEQ ID NO:1所示。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SEQ ID NO:2
‑
3所示引物。6.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：员佳乐，路畅，杨冠青，史明月，杨帅，李文霞，孙迪，张燕伟，牛瑾，张燕，曹果清，李步高，
申请(专利权)人：晋中市太谷区现代农业产业发展中心，
类型：发明
国别省市：