一种用于样本核酸提取的浓缩液及利用其提取核酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于样本核酸提取的浓缩液及利用其提取核酸的方法，该浓缩液由以下重量百分比的原料组成：氯化钠3%~5%、海藻糖

【技术实现步骤摘要】
一种用于样本核酸提取的浓缩液及利用其提取核酸的方法


[0001]本专利技术属于微生物提取
，具体指一种用于样本核酸提取的浓缩液及利用其提取核酸的方法。

技术介绍

[0002]在检测饮用水或者环境中的致病性微生物时，传统的方法是采集环境样本或水样本后，对其进行细菌培养，一般需要7天时间，费时费力。而且，细菌培养结束后要进行浓缩，通常微生物浓缩方法是采用超速离心机，在20000g的条件下，离心2小时以上实现浓缩，但这种浓缩方法不仅所需设备昂贵，且离心时间长，不利于基层实验室的推广。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种用于样本核酸提取的浓缩液，提供其提取方法是本专利技术的第二个专利技术目的。旨在通过一定的浓缩方法，提高环境样本或者水样本中微生物的浓度，从而提高核酸提取的效率和浓度，达到提高检出率，提高灵敏度的目的。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]一种用于样本核酸提取的浓缩液，由以下重量百分比的原料组成：氯化钠3％～5％、海藻糖
‑
25 2％～4％；Tris缓冲液3％～5％，正丁醇7％～10％，余量为无核酸酶水，pH值为4～6。
[0006]利用所述的浓缩液提取样本核酸的方法，包括以下步骤：
[0007]1)取待检测样品与浓缩液按一定比例混匀，室温下静置5～10min；
[0008]2)常规离心机固液分层；
[0009]3)去除上层清液，可不必完全去除干净液体，加280～300μl纯化水或者生理盐水重悬细菌沉淀即可。
[0010]优选的，当检测样品为水时，可直接混合；当检测样品为其他环境拭子时，将环境拭子用2～5ml生理盐水或者纯化水洗脱，洗脱液先500
×
g离心10min，去除杂质，取上清液即为待检测样品。
[0011]优选的，所述待检测样品与浓缩液的体积比例为(3～5):1，通过涡旋震荡混匀。
[0012]优选的，离心力不低于9000
×
g，离心时间10～20min，离心管底部有白色或灰色沉淀。
[0013]优选的，用移液器或者倾倒去除上层清液即可。
[0014]具体在应用时，在步骤3)重悬细菌后，直接用商品化的核酸提取试剂盒(磁珠法)按照说明书提取核酸即可。
[0015]本专利技术采用一次性浓缩技术，能够快速有效的浓缩液体生物样品，可广泛应用于传染病监测、食品安全、环境监测、生化防御、水污染监测和其他微生物快速检测领域。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0017]1、本专利技术可以用于饮用水或者棉拭子洗脱液中衡量微生物细菌的浓缩，显著提高
水源或者拭子洗脱液中细菌的检出率；通过室温静置，常规离心机离心，即可快速获得高浓度的细菌样本，浓缩倍数达100倍以上；
[0018]2、本专利技术浓缩液更适用于基层实验室临床应用的微生物细菌样本浓缩，有效提高了环境拭子的检测准确性，提高了诊断敏感性。
[0019]3、本专利技术浓缩液还适用于食源性微生物样本的前处理浓缩，提高检测方法的灵敏度，显著缩短检测时间。
附图说明
[0020]图1是本专利技术的实验例1
‑
4的扩增曲线。
具体实施方式
[0021]为说明专利技术效果，下面以具体实施方式对本专利技术做进一步说明。
[0022]实施例1
[0023]一种用于样本核酸提取的浓缩液，由以下重量百分比的原料组成：氯化钠4％、海藻糖
‑
25 3％；Tris缓冲液4％，正丁醇8％，余量为无核酸酶水，pH值为5。
[0024]利用所述的浓缩液提取样本核酸的方法，包括以下步骤：
[0025]1)取待检测样品与浓缩液按体积比例为4:1通过涡旋震荡混匀，室温下静置5min；所述待测样品为自来水；
[0026]2)常规离心机固液分层；离心力不低于9000
×
g，离心时间15min，离心管底部有白色沉淀；
[0027]3)倾倒去除上层清液，可不必完全去除干净液体，加280μl生理盐水重悬细菌沉淀。
[0028]实施例2
[0029]一种用于样本核酸提取的浓缩液，由以下重量百分比的原料组成：氯化钠3％、海藻糖
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25 2％；Tris缓冲液3％，正丁醇7％，余量为无核酸酶水，pH值为4。
[0030]利用所述的浓缩液提取样本核酸的方法，包括以下步骤：
[0031]1)取待检测样品与浓缩液按体积比例为3:1通过涡旋震荡混匀，室温下静置10min；本实施例中检测样品为环境拭子，将环境拭子用5ml生理盐水或者纯化水洗脱，洗脱液先500
×
g离心10min，去除杂质，取上清液即为待检测样品。
[0032]2)常规离心机固液分层；离心力不低于9000
×
g，离心时间10min，离心管底部有灰色沉淀；
[0033]3)倾倒去除上层清液，可不必完全去除干净液体，加300μl生理盐水重悬细菌沉淀。
[0034]实施例3
[0035]一种用于样本核酸提取的浓缩液，由以下重量百分比的原料组成：氯化钠5％、海藻糖
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25 4％；Tris缓冲液5％，正丁醇10％，余量为无核酸酶水，pH值为6。
[0036]利用所述的浓缩液提取样本核酸的方法，包括以下步骤：
[0037]1)取待检测样品与浓缩液按体积比例为5:1通过涡旋震荡混匀，室温下静置10min；本实施例中检测样品自来水。
[0038]2)常规离心机固液分层；离心力不低于9000
×
g，离心时间10min，离心管底部有白色沉淀；
[0039]3)倾倒去除上层清液，可不必完全去除干净液体，加300μl生理盐水重悬细菌沉淀。
[0040]试验例：
[0041]试验方法：
[0042]实验组1：
[0043]环境拭子洗脱液4ml与浓缩液1ml混匀；
[0044]本实验组中，所述环境拭子洗脱液为环境拭子用4ml生理盐水洗脱，洗脱液500
×
g离心10min，去除杂质后得到。
[0045]实验组2：
[0046]本实验组中，自来水8ml(含有100PFU细菌粒子)与浓缩液2ml混匀；其余制备方法同实施例1。
[0047]实验组3：
[0048]环境拭子洗脱液4ml与PBS 1ml混匀；
[0049]本实验组中，环境拭子洗脱液同实验组1。
[0050]实验组4：
[0051]本实验组中，自来水8ml(含有100PFU细菌粒子)与PBS 2ml混匀；其余制备方法同实施例1。
[0052]分别取以上4组得到的浓缩样品200ul，用商品化的磁珠法核酸提取，参考《SN/T 2206.11
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2014：金黄色葡萄球菌多重实时荧光PCR法》的荧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于样本核酸提取的浓缩液，其特征在于，由以下重量百分比的原料组成：氯化钠 3%~5%、海藻糖
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252%~4%；Tris缓冲液3%~5%，正丁醇7%~10%，余量为无核酸酶水，pH值为4~6。2.利用权利要求1所述的浓缩液提取样本核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取待检测样品与浓缩液按一定比例混匀，室温下静置5~10min；2）常规离心机固液分层；3）去除上层清液，可不必完全去除干净液体，加280~300μl纯化水或者生理盐水重悬细菌沉淀即可。3.如权利要求2所述的浓缩液提取样本核酸的方法，其特征在于，当检测样品为水时，可直接混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄亚坤，付燕峰，杨楠，赵林萍，苗银萍，任宝红，曾小宇，李慧英，
申请(专利权)人：河南中标检测服务有限公司新乡市中标检验检疫创新研究院，
类型：发明
国别省市：