一种微量ctDNA建库的优化方法技术

本发明专利技术公开了一种微量ctDNA建库的优化方法，优化步骤包括如下：S1，ctDNA提取：首先从患者的静脉血中提取ctDNA，同时提取的ctDNA实量为微量；S2，ctDNA质检：当提取完毕ctDNA后需要对其进行质检，对ctDNA的质量进行把控；S3，ctDNA随机打断：采用限制性酶切法，即可完成对ctDNA的打断目的。本发明专利技术可实现低至ng级别超微量cfDNA突变和cfDNA甲基化测序，起始采血量仅需0.5～1ml血量水平，并实现了cfDNA基因变异和甲基化修饰共检，即在一份样本中同时检测cfDNA肿瘤特异基因的变异和甲基化水平，进行多维度联合分析，显著提高检测准确率，文库转化率更高，实用性较强。实用性较强。实用性较强。

【技术实现步骤摘要】
一种微量ctDNA建库的优化方法


[0001]本专利技术涉及医疗
，尤其是一种微量ctDNA建库的优化方法。

技术介绍

[0002]ctDNA就是循环肿瘤细胞DNA，是指在血液中可能存在少部分肿瘤细胞坏死分泌的DNA片段，可以通过高灵敏度的检查方法可以检查出来，可以用于一些癌症的早期诊断，还有肿瘤治疗之后的随访评价治疗效果，结合这个指标，还有其他的影像学检查和内镜检查，对于早期癌症的诊断价值比较高，但是不能单凭ctDNA的检查诊断有没有癌症。
[0003]现市面上的ctDNA建库方法大多数都是提取患者的较大实量的血液样本，然后针对性的采取对应的方法来对ctDNA进行检测和建库，这样传统的建库方法无法很好的对建库过程进行优化，应用时存在一定的局限性。
[0004]然而，精确测序ctDNA存在两个巨大技术障碍：首先是血浆中的ctDNA含量极低，做不了几个检测反应。其次是二代测序背景噪声很高，用常规建库测序方法肿瘤信号完全淹没在背景噪声中。全球这一领域的专家都在致力于攻克这两个难题。

技术实现思路
r/>[0005]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微量ctDNA建库的优化方法，其特征在于，优化步骤包括如下：S1，首先从患者的静脉血中提取ctDNA，同时提取的ctDNA实量为微量；S2，ctDNA质检：当提取完毕ctDNA后需要对其进行质检，对ctDNA的质量进行把控；S3，ctDNA随机打断：采用限制性酶切法，即可完成对ctDNA的打断目的；S4，ctDNA末端修复：首先对片段化的ctDNA两端添加5'
‑
P和3'端dA，这样所得的产物无需纯化，可直接用于Fast Ligation Reagent进行DNA片段的adapter连接；S5，ctDNA建库优化：修复完成后将
‘
A
’
碱基加入到DNA片段的3
′
末端，然后在DNA片...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴俊程，江玥，赵啸宇，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：