一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用。lncRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。通过RNA

【技术实现步骤摘要】
一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学技术
，更具体的说是涉及一种血浆lncRNA 检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，全球糖尿病患病率急剧上升，成为危害人类健康的一个公共卫生问题，糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病最常见的并发症之一，是导致终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因，约占终末期肾衰竭的40％。糖尿病所导致的肾脏损害几乎可累及包括肾小球、肾小管和肾间质在内的所有的肾脏结构，并且其进展速度之快远远高于非糖尿病肾病患者。足细胞是位于肾小球基底膜外侧的终末分化的上皮细胞，是构成肾小球滤过屏障的关键部分，足细胞损伤是DKD发生发展的关键起始事件，在DKD早期即可观测到足细胞结构和功能的改变。早期准确诊断是DKD 治疗及延缓肾脏病变进程的重中之重。DKD诊断以及肾脏病变评估的金标准是肾活检穿刺，存在有创、费用高、技术要求高等局限性，临床工作中亟需一个简单易行、稳定可靠的鉴别方法。
[0003]长链非编码RNA(long non
‑
coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过 200个核苷酸的RNA分子的总称，其缺乏编码蛋白的能力，在基因表达、细胞功能、疾病的发生发展等方面发挥重要作用。近年来，随着微阵列芯片及高通量测序等技术的快速发展，lncRNA的生物学特点及功能逐渐被认识，越来越多的证据表明lncRNA的异常表达与肾脏疾病，尤其是糖尿病肾病的发生与发展密切相关。血清血浆中的LncRNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性，可以作为疾病的生物标志物。临床上尚缺乏用于 DKD辅助诊断的较为稳定的生物标志物的报道。
[0004]因此，拓宽该领域研究，筛选DKD特异或异常表达的血清血浆LncRNAs 作为生物标志物，以提高DKD诊断的灵敏性和预后判断的准确性，明确其在DKD患者中的临床价值，为糖尿病肾病的临床治疗提供新的策略是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用。筛选获得糖尿病肾病肾组织中差异表达的lncRNA，发现ENST00000436340.2在糖尿病肾病肾组织中表达明显增高，主要分布于肾小球足细胞，功能实验显示 ENST00000436340.2调控足细胞损伤及骨架重排。同时ENST00000436340.2 在糖尿病肾病患者的血浆中表达明显上调，且其表达水平与蛋白尿水平相关。本专利技术发现的ENST00000436340.2作为全新的lncRNA分子标记物在糖尿病肾病患者疾病进展的预测、评估方面具有一定的应用前景。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种检测lncRNA表达量的试剂在制备用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒中的应用；lncRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0008]优选的：检测lncRNA表达量的试剂包括扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物，扩
增所述lncRNA的核苷酸序列的引物：ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ ID No.2所示和ENST00000436340.2 R如SEQ ID No.3所示。
[0009]优选的：表达量为基于lncRNA参比内参基因的相对表达量。
[0010]优选的：内参基因为β
‑
actin基因。
[0011]本专利技术还提供了一种基于lncRNA表达量用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒，试剂盒含有扩增lncRNA的核苷酸序列的引物：ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ ID No.2所示和ENST00000436340.2 R如SEQ ID No.3 所示。
[0012]本专利技术还提供了一种糖尿病肾病预防和或治疗药物，其特征在于，针对 lncRNA的siRNA、shRNA或启动子产生抑制作用，所述lncRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0013]优选的：siRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
[0014]优选的：调控肾脏固有细胞足细胞损伤。
[0015]进一步的，相对表达量的计算方法如下：以待测糖尿病肾病患者血浆 cDNA为模板，采用上述ENST00000436340.2扩增引物进行real
‑
time PCR，然后按照如下公式计算相对表达量：
[0016]RV＝lg2
(
‑
ΔCt)
,ΔCt＝Ct
(lncRNA)
‑
Ct
(β
‑
actin)
[0017]待测糖尿病肾病患者cDNA为从糖尿病肾病患者血浆中提取的RNA，经反转录获得的cDNA。
[0018]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用，取得的技术效果为通过RNA
‑
seq筛选获得糖尿病肾病肾组织中差异表达的(新型)lncRNA(ENST00000436340.2)标记物，通过功能实验证实lncRNA调控肾脏固有细胞足细胞损伤。用于检测临床血浆样本，结果显示糖尿病肾病患者血浆中lncRNA相对表达量显著高于健康对照组人群。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0020]图1附图为本专利技术提供的LncRNA(ENST00000436340.2)在肾脏组织的表达和分布图，其中，RNA
‑
FISH标记LncRNA(红色)，结合免疫荧光标记足细胞标志蛋白Podocin(绿色)，检测LncRNA在糖尿病肾病患者肾脏组织中的表达和定位(共定位表示分布于足细胞，右下图中箭头)；Scale bar＝50μ m；Control：正常对照组；DKD：糖尿病肾病组。
[0021]图2附图为本专利技术提供的血浆样本LncRNA(ENST00000436340.2)相对表达量的散点图，*P<0.05，Lnc436：LncRNA(ENST00000436340.2)。
[0022]图3附图为本专利技术提供的糖尿病肾病患者血浆LncRNA (ENST00000436340.2)的表达水平与临床指标的相关性图，其中，a：糖尿病肾病患者血浆LncRNA的表达明显上调，且大量白蛋白尿患者血浆中LncRNA的表达明显高于微量白蛋白尿患者；b：Spearman
’
s相关性分析显示糖尿病肾病患者血浆LncRNA的相对表达水平与血清白蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测lncRNA表达量的试剂在制备用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒中的应用；其特征在于，所述lncRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，检测lncRNA表达量的试剂包括扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物，扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物：ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ ID No.2所示和ENST00000436340.2R如SEQ ID No.3所示。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述表达量为基于lncRNA参比内参基因的相对表达量。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述内参基因为β
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：吕智美，王荣，胡锦绣，刘冰，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属省立医院山东省立医院，
类型：发明
国别省市：