一种用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液制造技术

本发明专利技术公开了一种基于NADH的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液，创造性地将卵裂培养液作为基础液与人血清按一定比例结合，附以溶入相关激素(FSH、hCG、17β

【技术实现步骤摘要】
一种用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液


[0001]本专利技术涉及一种新颖的基于NADH的用于COH周期中人类未成熟卵母细胞IVM能量培养液，属于生殖医学工程领域。

技术介绍

[0002]在辅助生殖技术治疗的控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)周期中，大约有15％
‑
20％的卵母细胞(卵子)为未成熟卵子
[1,2]，未成熟卵子没有极体，包括胞浆含有单个核仁的较大生殖泡GV(germinal vesicle)和无核的MI(metaphase I)。由于这些未成熟卵子发育潜能低，在临床上通常被视为废弃卵子而丢弃
[3,4]。然而，人卵子是极其稀缺的生育资源，与精子不同，自出生时女性的卵泡数量就固定了，出生后不再产生新的卵泡，从青春期至更年期，每次月经周期有15
‑
20个卵泡生长发育，但是一般只有一个优势卵泡能发育成熟并排卵。对于患有卵巢功能减退甚至衰竭疾病的女性患者，虽可通过卵子捐赠的方式获得子女，但其困难程度堪比器官移植。并且COH可能引起卵巢过度刺激综合征，这是一种严重而常见的并发症，对于遭受一次辅助生殖周期失败或卵巢过度刺激综合征高危的女性患者来说，再进行一次COH治疗无疑对其生理和心理造成巨大创伤。所以，能够获得并利用废弃的不成熟卵子培养成熟为患者本人使用或捐赠给需要的女性是生殖医学界的关注热点。
[0003]人卵子体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术作为现代辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)的重要组成部分，是通过体外培养获得成熟卵子的一项技术。自1935年Pincus等
[5]观察到兔未成熟卵子可在体外自发成熟后，掀起了一股对卵子IVM技术的探索热潮，直至1983年，该项技术首次应用于临床并成功分娩婴儿
[6]。但是目前的IVM技术仍面临着获得的卵子成熟率较低，卵子发育潜能较差等诸多挑战。如何进一步优化IVM技术体系，改善IVM卵子质量，并对优质卵子进行筛选是目前临床面临的亟需解决的难题。
[0004]线粒体是卵母细胞中最丰富的细胞器，具有双层膜结构，对维持细胞内代谢和能量产生具有重要作用，其在卵子成熟、着床前胚胎发育过程中经历动态变化，以支持关键的细胞发育事件
[7
‑
9]。人类卵子在生长发育过程中主要通过氧化磷酸化代谢丙酮酸提供能量，早期胚胎的代谢特点是低氧化代谢水平，利用丙酮酸、乳酸和氨基酸以支持发育
[10]。而随着胚胎基因组的激活和囊胚形成的能量需求增加，囊胚期胚胎表现出高水平的糖酵解和氧气消耗
[11]。在正常卵母细胞中，线粒体通过分裂与融合形成动态互连的网络，产生足够的ATP以维持卵母细胞成熟和植入前胚胎发育。然而在IVM过程中，诸多因素形成的活性氧(reactive oxygen species,ROS)会引起线粒体损伤，使线粒体功能紊乱，从而引起低成熟率，低受精率，卵子质量差等
[12]，对后续胚胎发育产生不良影响。据研究报道证实：靶向性地提升线粒体生产ATP的能力可以改善IVM卵子发育潜力
[13]。因此通过调控线粒体形态及功能从而提高未成熟卵子体外培养的成熟率及后期胚胎发育的能力，是提高IVM效果的关键所在。
[0005]NADH是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD
+
)的还原态，还原型辅酶I，在维持细胞生长、分化和能量代谢中起重要作用。NADH产生于糖酵解和细胞呼吸作用中的三羧酸循环，并作为生物氢的载体和电子供体，参与线粒体内膜上的氧化磷酸化过程，其释放质子和电子，提供能量合成ATP，自身被氧化为NAD
+[14]。NAD
+
是一种重要的辅助因子，可以直接或间接影响许多关键的细胞功能，包括细胞代谢、DNA修复、线粒体自噬、细胞衰老和免疫等
[15
‑
18]。在许多组织中NAD
+
水平随着年龄的增长而下降
[16]。NADH与NAD
+
是一对氧化还原对，胞外增加NADH可以有效增加NAD
+[19]。NADH的含量与ATP产生量直接相关，理论上，1分子NADH释放的能量可以合成3分子ATP，细胞中所含NADH越多，产生的能量越多。目前仍没有关于NADH作用于人类卵子的相关报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种新的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液，创造性地将卵裂培养液作为基础液与人血清按一定比例结合，附以溶入相关激素，并在此基础上添加理想浓度的NADH，充分发挥NADH自身抗氧化和促进线粒体产生ATP的特性，为人卵子的体外成熟及后期的胚胎发育提供充分的能量，创造性地提高COH周期中女性卵子利用率。
[0007]本专利技术的一种用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液包含如下组分：
[0008](70％
‑
90％)V/V卵裂培养液、(10％
‑
30％)V/V人血清、10
‑6mol/L NADH。
[0009]优选的，还可包含如下组分的至少一种：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。更有选的，包含如下组分的至少两种：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。最优选的，包含如下三种组分：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。其中，所述FSH、hCG、17β
‑
estradiol的组成优选为：(0.07
‑
0.08)IU/ml FSH+(0.4
‑
0.6)IU/ml hCG、(0.06
‑
0.2)mg/ml 17β
‑
estradiol。
[0010]所述用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,优选的组成可以如下:
[0011](78％
‑
82％)V/V卵裂培养液+(18％
‑
23％)V/V人血清+(0.073
‑
0.076)IU/ml FSH+(0.46
‑
0.52)IU/ml hCG+(0.08
‑
0.13)mg/ml 17β
‑
estradiol+10
‑6mol/L NADH。更优选的组成如下:
[0012]80％V/V卵裂培养液+20％V/V人血清+0.075IU/ml FSH+0.5IU/ml hCG+0.1mg/ml 17β
‑
estradiol+10
‑6mol/L NADH。其中，所述人血清可以为人自体血清或者人造血清，优选人自体血清。
[0013]本专利技术创造性地将卵裂培养液作为基础液与人血清按一定比例结合，附以溶入相关激素(FSH、hCG、17β本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,包含如下组分：(70％
‑
90％)V/V卵裂培养液、(10％
‑
30％)V/V人血清、10
‑6mol/L NADH。2.如权利要求1所述的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,其特征在于，还包含如下组分的至少一种：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。3.如权利要求2所述的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,其特征在于，包含如下组分的至少两种：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。4.如权利要求3所述的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,其特征在于，包含如下三种组分：FSH、hCG、17β
‑
estradiol。5.如权利要求4所述的用于COH周期中人未成熟卵母细胞IVM能量培养液,其特征在于，所述FSH、hCG、17β
‑
estradiol的组成为：(0.07
‑
0.08)IU/ml FSH+(0.4
‑
0.6)IU/ml hCG、(0.06
...

【专利技术属性】
技术研发人员：章志国，杨涵，邹慧娟，陈蓓丽，邹薇薇，
申请(专利权)人：安徽第肆纪医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：