一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，涉及显微组织切片技术领域，配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒，选择长势良好的大白菜植株，将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml 75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织。本发明专利技术解决了现有技术因固定液含有乙醇导致的植物组织活性丧失的问题，同时克服了白菜组织含水量大，易形成冰晶，难以保持组织结构完整的问题，保证了样品中RNA不被降解，为大白菜茎尖组织结构观察及后续相关转录组学研究提供了强有力的保障。关转录组学研究提供了强有力的保障。关转录组学研究提供了强有力的保障。

【技术实现步骤摘要】
一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法


[0001]本专利技术涉及显微组织切片
，尤其涉及一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法。

技术介绍

[0002]大白菜属于十字花科芸苔属植物，原分布于中国华北地区，现于中国各地区广泛栽培。大白菜主要以结球叶片做为食用器官，叶球营养丰富，既可作炒食也可生食、腌制，亦可作家禽家畜的饲料，同时还有药用价值。大白菜茎尖组织结构复杂，包含顶端分生组织、叶原基、幼叶等，是研究大白菜叶片发育及叶球形成的关键部位。因此，制备茎尖组织细胞结构完整、RNA等大分子保存完好的切片，将为观察茎尖细胞结构，开展后续分子生物学研究，改良作物分子遗传，提供良好基础。
[0003]常见的植物组织切片方法包括徒手切片法，但该方法制作出的切片较为粗糙，厚度不均，容易损伤植物组织；其次有石蜡切片法，该方法操作步骤复杂繁琐、制作周期长，容易对植物组织材料造成损伤，染色过程涉及脱蜡入水、抗原修复等较为复杂繁琐。而冷冻切片不同于以上两种方法，较之徒手切片，它的成片质量更高，较之石蜡切片，它的制作步骤更加简单、易操作，制作周期更短，而且能够减少对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：固定液制备和材料准备配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒；步骤二：取材固定选择长势良好的大白菜植株：将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml 75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织；步骤三：包埋取一次性培养皿，向培养皿中放入5
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10ml的100％OCT包埋剂备用。用镊子将固定后的大白菜茎尖组织小心地从离心管中取出，放入培养皿中包裹一层100％OCT。在白菜组织被OCT完全包裹后，使用镊子等尖锐物品将白菜组织周围的气泡挑出，室温下静置5min。将100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层，用镊子轻轻将培养皿中的白菜组织取出，缓慢放入底层覆盖了包埋剂的包埋盒后，再次向包埋盒中加入100％OCT包埋剂，覆盖白菜组织，调整样品在包埋盒中位置后，然后去除包埋剂中样品周围的气泡，室温下静置1h。然后，调整组织在包埋盒中的位置，并再次察看样品周围气泡情况，并将其挑出。将调整好的包埋盒放置于干冰粉上凝固，待OCT由透明转变为完全不透明的白色后取出包埋盒并作好样品信息标记；步骤四：切片调试冷冻切片机，固定切片使用的刀片，使用100％OCT将样品包埋块固定在样品托上。然后，将固定在样品托上的白菜组织与刀片平行方向放置，调整好样品与刀片之间的距离，设定切片厚度为20um,开始切片。切片...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建军，孙晓雪，曾雨凡，马卫，申书兴，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：