Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用。本发明专利技术从离体水平和在体水平证明了Sgk1对肝糖异生的调控作用，Sgk1有可能成为药物抑制肝糖异生的靶点，从而有望成为2型糖尿病治疗的新靶点。成为2型糖尿病治疗的新靶点。成为2型糖尿病治疗的新靶点。

【技术实现步骤摘要】
Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用


[0001]本专利技术属于2型糖尿病药物领域，特别涉及一种Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用。

技术介绍

[0002]2型糖尿病是一种以慢性高血糖为特征的内分泌代谢性疾病，主要是由胰岛素分泌不足或外周胰岛素敏感性下降所引起，是世界十大慢性疾病之一。国际糖尿病联盟(IDF)最新数据显示，2019年全世界罹患糖尿病的人数已经达到4.63亿。
[0003]糖尿病患者长期存在的高血糖可使各种组织，尤其是心血管、神经、眼、肾、四肢等遭受慢性损害，诱发功能障碍，引发诸如心血管疾病、视力丧失、肾衰等多种并发症，严重影响患者健康，给社会及国家带来巨大的负担。因此，阐明糖尿病的发病机制，采取有效的手段预防和治疗糖尿病已成为全球公共健康关注的焦点。
[0004]葡萄糖是机体重要的能量来源，维持血糖稳态是确保器官组织功能正常发挥的前提。在整个进食
‑
禁食周期中，肝脏通过调节糖原生成、糖原分解、糖酵解和糖异生，在维持葡萄糖稳态中起着关键作用。越来越多的研究表明，异常增加的肝糖异生是对2型糖尿病患者空腹高血糖贡献最大的因素之一，也是2型糖尿病发生发展过程中重要的病理生理改变。因此，深入探究肝糖异生的调节机制，抑制肝脏异常增加的糖异生，对于2型糖尿病的防治意义重大。
[0005]Sgk1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，因其mRNA水平受到血清和/或糖皮质激素刺激可迅速升高，因此也称血清/糖皮质激素调节激酶1。据报道，Sgk1作用广泛，参与多种离子通道、膜转运蛋白、细胞增殖和凋亡的调节。一些证据支持Sgk1参与葡萄糖稳态的调节，有研究表明Sgk1的过度激活可削弱胰岛β细胞的胰岛素分泌，但似乎也增强了外周器官的胰岛素敏感性。还有文献报道称，Sgk1与高血压、肥胖症、糖尿病等疾病的发生也具有相关性。因此研究Sgk1在2型糖尿病中的作用是具有重要意义的。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用，本专利技术证明了Sgk1对肝糖异生的调控作用，Sgk1有可能成为药物抑制肝糖异生的靶点，从而有望成为2型糖尿病治疗的新靶点。
[0007]本专利技术提供一种Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用。
[0008]优选地，所述药物通过干扰或抑制Sgk1，降低肝糖异生。
[0009]优选地，所述药物以Sgk1作为靶点，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。
[0010]优选地，所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。
[0011]有益效果
[0012]本专利技术从离体水平和在体水平证明了Sgk1对肝糖异生的调控作用，Sgk1有可能成为药物抑制肝糖异生的靶点，从而有望成为2型糖尿病治疗的新靶点。
附图说明
[0013]图1为实施例1中Sgk1敲减不影响小鼠肝原代细胞的细胞活力结果，其中sh
‑
Ctrl为对照空载病毒，sh
‑
Sgk1为Sgk1干扰腺病毒。
[0014]图2为实施例1中Sgk1的敲减抑制小鼠肝原代细胞的糖异生结果，其中，(A
‑
D)加或不加100μM 8
‑
Br
‑
cAMP处理8小时，以qRT
‑
PCR检测Sgk1以及PEPCK、G6Pase和 FBPase的mRNA表达水平；加或不加100μM 8
‑
Br
‑
cAMP处理24小时，(E)以Western Blot 检测PCK的蛋白表达水平(内参为GAPDH)，(F)通过葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基中葡萄糖的产生量。
[0015]图3为实施例1中GSK650394不影响小鼠肝原代细胞的细胞活力结果，其中(A) GSK650394的化学结构；(B)CCK
‑
8试验检测小鼠肝原代细胞的细胞活力。
[0016]图4为实施例1中GSK650394抑制糖异生关键酶PEPCK(A)、G6Pase(B)和FBPase (C)的mRNA表达水平。
[0017]图5为实施例1中GSK650394抑制小鼠肝原代细胞的葡萄糖产生结果。
[0018]图6为实施例2中Sgk1干扰腺病毒通过尾静脉注射进C57BL/6小鼠体内后以qRT
‑
PCR 检测肝脏(Liver)(A)、骨骼肌(Skeletal muscle)(B)以及脂肪组织(Adipose tissue) (C)的Sgk1基因表达水平结果。
[0019]图7为实施例2中特异性敲减肝脏Sgk1以qRT
‑
PCR检测肝脏FBPase(A)、G6Pase (B)和PEPCK(C)的mRNA表达水平(n＝6)。
[0020]图8为实施例2中分别尾静脉注射对照或Sgk1干扰腺病毒，注射一周后，(A)随机体重监测结果；(B)禁食16小时的体重；(C)24小时进食量；(D)随机血糖水平。
[0021]图9为实施例2中肝脏特异性敲减Sgk1抑制小鼠肝糖异生结果。
具体实施方式
[0022]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0023]8周龄雄性C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。丙酮酸钠、地塞米松、8
‑
溴
‑3’‑5’‑
环磷酸腺苷(8
‑
Br
‑3’‑5’‑
Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)购自Sigma 公司。Cell Counting Kit
‑
8(CCK
‑
8)试剂盒购自Beyotime公司。
[0024]实施例1
[0025]转染Sgk1干扰腺病毒抑制小鼠肝原代细胞糖异生：
[0026]在96孔板中接种小鼠肝原代细胞，转染Sgk1干扰腺病毒24小时后进行CCK
‑
8试验，具体为：1)在96孔板中接种小鼠肝原代细胞，每组至少4个复孔，放入培养箱中培养一定时间(37℃，5％CO2)。2)待细胞贴壁后，进行转染Sgk1干扰腺病毒24h，然后将培液换成含有0.25％BSA和10％CCK
‑
8溶液的低糖DMEM培液，每孔100μl，培养1小时。3)使用酶标仪中震荡10秒，测定450nm波长处吸光度，最后通过计算得出细胞活力。结果如图 1所示，与对照病毒
(sh
‑
Ctrl)相比，Sgk1的敲减并不影响小鼠肝原代细胞的细胞活力(图1)。
[0027]对照空载病毒(sh
‑
Ctrl)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Sgk1作为靶点在制备抑制肝糖异生药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过干扰或抑制Sgk1，降低肝糖异生。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物以Sg...

【专利技术属性】
技术研发人员：周丽斌，王晓，刘倩倩，宁光，
申请(专利权)人：上海市内分泌代谢病研究所，
类型：发明
国别省市：