用于长期离体维持或扩增人成红细胞、人巨核细胞-红系祖细胞或人普通髓系祖细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种用于长期离体维持或扩增人成红细胞、人巨核细胞

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于长期离体维持或扩增人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞的方法及其应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2021年12月2日提交的、美国非临时专利申请序列号17/540,777和2020年12月4日提交的、美国临时专利申请序列号63/121,419的优先权益，二者通过引用整体并入本文。


[0003]本专利技术提供了人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞和人普通髓系祖细胞的长期离体维持或扩增的方法及其应用。
[0004]专利技术背景
[0005]人体造血系统包括适应性免疫细胞、先天免疫细胞、巨核细胞和红细胞。所有这些细胞类型均源自人造血干细胞(hHSC)，其分化为普通淋巴祖细胞和普通髓系祖细胞(hCMP)。普通淋巴祖细胞进一步发育为适应性免疫细胞，包括B淋巴细胞和T淋巴细胞；普通髓系祖细胞成熟为巨核细胞
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红系祖细胞(hMEP)或粒细胞
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单核细胞祖细胞(hGMP)。此外，巨核细胞
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红系祖细胞可以进一步分化为巨核细胞和成红细胞，最终成熟为血小板和红细胞。另一方面，粒细胞
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单核细胞祖细胞成熟为先天免疫细胞，包括单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。单核细胞最终分化为巨噬细胞和树突细胞。
[0006]不同的细胞在临床实践中发挥着不同的作用，然而，缺乏一种离体大规模扩增和长期维持人体细胞的方法，这阻碍了临床应用。已经报道了一些扩增髓源细胞或其祖细胞的方法，其中大多数使用了许多不同的生长因子组合。然而，在这些方法中只能获得有限的从人体扩增细胞的能力。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术提供了一种用于长期离体维持或扩增人红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞和人普通髓系祖细胞的方法及其应用。
[0009]本专利技术提供了一种用于长期离体维持或扩增人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞中的一种或多种的方法，其包括以下步骤：
[0010]在培养基中培养包含人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞中的一种或多种的细胞，其中所述培养基包含选自端锚聚合酶抑制剂(a tankyrase inhibitor)、生长因子、B
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Raf激酶抑制剂和GSK
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3抑制剂中的一种或多种。
[0011]在至少一个实施方案中，所述端锚聚合酶抑制剂是XAV939、AZ
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6102、JW
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55、MN
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64、TC
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E 5001、WIKI4、RK
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287107、MSC2504877或G007
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LK中的一种或多种。
[0012]在至少一个实施方案中，所述端锚聚合酶抑制剂是XAV939。
[0013]在至少一个实施方案中，所述培养基中，端锚聚合酶抑制剂的浓度是0.1μM至900μM。
[0014]在至少一个实施方案中，所述B
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Raf激酶抑制剂是GDC
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0879、PLX4032、L
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779450、GSK2118436、L
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779450、DABRAFENIB、RAF709、BMS
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908662、LGX818、PLX3603、RAF265、
RO5185426、维莫非尼(vemurafenib)、PLX8394或SB590885中的一种或多种。
[0015]在至少一个实施方案中，所述B
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Raf激酶抑制剂是SB590885。
[0016]在至少一个实施方案中，所述GSK
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3抑制剂是CHIR99021、CHIR98014、LY2090314、ALSTERPAULLONE、BIO
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ACETOXIME、AZD1080、2
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D08、SB216763、BIO、SB415286、TWS119、Tideglusib、A1070722或AR
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A014418中的一种或多种；可选地，所述GSK
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3抑制剂是CHIR99021。
[0017]在至少一个实施方案中，所述生长因子是干细胞因子(SCF)。
[0018]在至少一个实施方案中，所述培养基中B
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Raf激酶抑制剂的浓度为0.1μM至70μM，所述培养基中端锚聚合酶抑制剂的浓度为0.1μM至900μM，所述培养基中GSK
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3抑制剂的浓度为0.1μM至70μM，并且所述培养基中干细胞因子的浓度为10ng/ml至100ng/ml。
[0019]在至少一个实施方案中，所述培养基的基础培养基包括DMEM/F12、IMDM和神经细胞基础培养基(Neural Basal Medium)中的一种或多种。
[0020]在至少一个实施方案中，所述培养基中的DMEM/F12和神经细胞基础培养基的比例为5:1至1:5。
[0021]在至少一个实施方案中，所述培养基中的IMDM和神经细胞基础培养基的比例为5:1至1:5。
[0022]在至少一个实施方案中，所述培养基中使用的DMEM/F12和神经细胞基础培养基的比例为1:1。
[0023]在至少一个实施方案中，所述端锚聚合酶抑制剂是XAV939，所述B
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Raf激酶抑制剂是SB590885，所述GSK
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3抑制剂是CHIR99021，并且所述生长因子是干细胞因子。
[0024]在至少一个实施方案中，所述培养基中XAV939的浓度为0.1μM至20μM；所述培养基中SB590885的浓度不超过5μM，任选为0.1μM至5μM；所述培养基中CHIR99021的浓度不超过10μM，任选为0.1μM至10μM；所述培养基中干细胞因子的浓度为10ng/ml至100ng/ml。
[0025]在至少一个实施方案中，所述培养基进一步包含选自胰岛素、转铁蛋白、HSA、腐胺、孕酮或亚麻酸的一种或多种补充剂。
[0026]在至少一个实施方案中，所述培养基补充有胰岛素、转铁蛋白、HSA、腐胺、孕酮和亚麻酸。
[0027]在至少一个实施方案中，人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞源自干细胞；可选地，其源自造血干细胞；进一步可选地，所述造血干细胞为人脐带血单个核细胞形式。
[0028]在至少一个实施方案中，人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人髓系祖细胞中的任何细胞均能在离体培养基中长期扩增，扩增后获得的细胞在形态上保持不变并具有分化的能力，以及扩增后获得的细胞是CD46
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的。
[0029]本专利技术还提供了一种对通过权利本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于长期离体维持或扩增人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞中的一种或多种的方法，其包括以下步骤：在培养基中培养包含人成红细胞、人巨核细胞
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红系祖细胞或人普通髓系祖细胞中的一种或多种的细胞，其中所述培养基包含选自端锚聚合酶抑制剂、生长因子、B
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Raf激酶抑制剂和GSK
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3抑制剂中的一种或多种。2.根据权利要求1所述方法，其中所述端锚聚合酶抑制剂是XAV939、AZ
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6102、JW
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55、MN
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64、TC
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E 5001、WIKI4、RK
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287107、MSC2504877或G007
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LK中的一种或多种。3.根据权利要求1所述方法，其中所述培养基中端锚聚合酶抑制剂的浓度为0.1μM至900μM。4.根据权利要求3所述方法，其中B
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Raf激酶抑制剂是GDC
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0879、PLX4032、GSK2118436、L
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779450、DABRAFENIB、RAF709、BMS
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908662、L
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779450、LGX818、PLX3603、RAF265、RO5185426、维莫非尼、PLX8394或SB590885中的一种或多种。5.根据权利要求3所述方法，其中GSK
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3抑制剂是CHIR99021、CHIR98014、LY2090314、ALSTERPAULLONE、BIO
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ACETOXIME、AZD1080、2
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D08、SB216763、BIO、SB415286、TWS119、Tideglusib、A1070722或AR
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A014418中的一种或多种。6.根据权利要求3所述方法，其中所述生长因子是干细胞因子(SCF)。7.根据权利要求1所述方法，其中所述培养基中B
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Raf激酶抑制剂的浓度为0.1μM至70μM，所述培养基中端锚聚合酶抑制剂的浓度为0.1μM至900μM，所述培养基中GSK
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3抑制剂的浓度为0.1μM至70μM，并且所述培养基中干细胞因子的浓度为10ng/ml至100ng/ml。8.根据权利要求1所述方法，其中所述培养基的基础培养基包括DMEM/F12、IMDM和神经细胞基础培养基中的一种或多种。9.根据权利要求8所述方法，其中所述培养基中的DMEM/F12与神经细胞基础培养基的比例为5:1至1:5。10.根据权利要求1所述方法，其中：端锚聚合酶抑制剂是XAV939，B
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【专利技术属性】
技术研发人员：童畅，林怡斌，吕康涛，
申请(专利权)人：奥赛金生物科技公司，
类型：发明
国别省市：