细胞的高密度培养方法技术

本发明专利技术提供细胞的培养方法，其包括将胆碱以特定的浓度添加到培养基中。以特定的浓度添加到培养基中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞的高密度培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞的高密度培养法，具体而言，涉及通过胆碱的添加来进行的细胞的高密度培养法。

技术介绍

[0002]使用细胞的再生医疗技术作为可治疗至今难以治疗的各种各样的疾病或损伤的手段之一，近年，非常地关注。由于再生医疗中需要大量的细胞，意欲推进有效培养细胞的方法的开发。例如，在专利文献1中报告了包括在培养基中将干细胞用ROCK抑制剂处理的干细胞的培养方法。另外，本专利技术人也在2018年报告了通过将葡萄糖和/或特定的氨基酸添加到培养基中来进行的动物细胞的高密度培养法等(专利文献2)。
[0003]【现有技术文献】
[0004]【专利文献】
[0005]专利文献1：特开2008
‑
099662号公报
[0006]专利文献2：特愿2018
‑
184352号
[0007]【专利技术的概要】
[0008]【专利技术要解决的课题】
[0009]专利文献2中记载的方法是作为高密度培养法非常地优良的方法之一，本次本专利技术人再探讨所述方法，进一步尝试了优选的高密度培养法的开发。
[0010]【用于解决课题的手段】
[0011]本专利技术人针对上述课题进行锐意探讨的结果发现，在细胞的高密度培养时，在各种各样的培养基成分之中，还可仅通过追加添加胆碱极其容易地促进细胞增殖的事实，通过基于涉及的见解推进进一步研究而完成本专利技术。即，本专利技术如下。
[0012][1]细胞的培养方法，其包括：将胆碱以0.01～1000000mg/L/天添加到培养基中。
[0013][2][1]所述的方法，其中细胞培养是悬浮培养。
[0014][3][1]或[2]所述的方法，其用于高密度培养。
[0015][4][3]所述的方法，其中培养的细胞的培养基中的细胞密度是6
×
105个细胞/mL以上。
[0016][5][1]～[4]之任一项所述的方法，其中细胞是多能性干细胞、成体干细胞、或者前体细胞。
[0017][6][5]所述的方法，其中多能性干细胞是iPS细胞。
[0018][7][1]～[4]之任一项所述的方法，其中细胞是来源于iPS细胞的细胞。
[0019][8]细胞培养用培养基组合物，其含15mg/L以上胆碱。
[0020][9][8]所述的培养基组合物，其用于悬浮培养。
[0021][10][8]或[9]所述的培养基组合物，其用于高密度培养。
[0022][11][10]所述的培养基组合物，其中悬浮培养的细胞的细胞密度是6.0
×
105个细胞/mL以上。
[0023][12][8]～[11]之任一项所述的培养基组合物，其中细胞是多能性干细胞、成体干细胞、或者前体细胞。
[0024][13][12]所述的培养基组合物，其中多能性干细胞是iPS细胞。
[0025][14][8]～[13]之任一项所述的培养基组合物，其中细胞是来源于iPS细胞的细胞。
[0026]【专利技术的效果】
[0027]由本专利技术，可在高密度培养下容易地促进细胞增殖。
[0028]【附图的简单的说明】
[0029]【图1】图1是显示胆碱浓度对iPS细胞的增殖的影响(n＝1)的图。
【具体实施方式】
[0030]以下，对本专利技术详细地进行说明。
[0031]【定义】
[0032]在本说明书中，“悬浮培养”是指在细胞不接附到培养容器的状态下进行的细胞培养方法。在本专利技术中，悬浮培养可伴随对于液体培养基的自外部的压力或振动、或者，所述液体培养基中的振荡或旋转操作，也可不伴随。
[0033]在本说明书中，“高密度培养”是指以与一般的细胞培养中推定的细胞密度比高的细胞密度的培养。高密度的基准可也因培养方法(接触培养/悬浮培养等)或多能性干细胞的种类等而不同，例如，在对iPS细胞进行悬浮培养时，在本说明书中，将以6
×
105个细胞/mL以上的密度的培养定义为高密度培养。
[0034]在本说明书中，“多能性干细胞”是指具有可向构成生物体的全部组织或细胞分化的能力的细胞。作为多能性干细胞，可举胚胎干细胞(ES细胞)、胚胎生殖细胞(EG细胞)、人工多能性干细胞(iPS细胞)等，但不限于这些。
[0035]在本说明书中，“成体干细胞(也称为成体干细胞)”是指具有可分化为构成特定的组织(器官)的细胞的能力的细胞。作为成体干细胞，可举造血干细胞、神经干细胞、生殖干细胞、肠干细胞、表皮干细胞、间充质干细胞等，但不限于这些。
[0036]在本说明书中，“前体细胞”是指处于从前述的多能性干细胞或成体干细胞分化为特定的体细胞或生殖细胞的途中的阶段的细胞。
[0037]【1.细胞的培养方法】
[0038]本专利技术提供细胞的培养方法(以下，有时称为“本专利技术的方法”)，包括将胆碱以0.01～1000000mg/L/天添加到培养基中。
[0039]在本专利技术的方法中使用的胆碱只要是在细胞培养中使用的等级，就不特别限定，只要使用市售品即可。作为适宜的胆碱，可举出氯化胆碱、重酒石酸胆碱、碳酸氢胆碱、胆碱磷酸盐、柠檬酸二氢胆碱等，优选为氯化胆碱。
[0040]在本专利技术的方法中，向培养基添加的胆碱的量(换算为游离体的含量)通常为0.01～1000000mg/L/天、优选为0.1～1000mg/L/天、更优选为1～100mg/L/天(例如，可设为以下的[1]～[9]：
[0041][1]1～100mg/L/天、10～100mg/L/天、20～100mg/L/天、30～100mg/L/天、40～100mg/L/天、50～100mg/L/天、60～100mg/L/天、70～100mg/L/天、80～100mg/L/天、90～
100mg/L/天；
[0042][2]1～90mg/L/天、10～90mg/L/天、20～90mg/L/天、30～90mg/L/天、40～90mg/L/天、50～90mg/L/天、60～90mg/L/天、70～90mg/L/天、80～90mg/L/天；
[0043][3]1～80mg/L/天、10～80mg/L/天、20～80mg/L/天、30～80mg/L/天、40～80mg/L/天、50～80mg/L/天、60～80mg/L/天、70～80mg/L/天；
[0044][4]1～70mg/L/天、10～70mg/L/天、20～70mg/L/天、30～70mg/L/天、40～70mg/L/天、50～70mg/L/天、60～70mg/L/天；
[0045][5]1～60mg/L/天、10～60mg/L/天、20～60mg/L/天、30～60mg/L/天、40～60mg/L/天、50～60mg/L/天；
[0046][6]1～50mg/L/天、10～50mg/L/天、20～50mg/L/天本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.细胞的培养方法，其包括：将胆碱以0.01～1000000mg/L/天添加到培养基中。2.权利要求1所述的方法，其中细胞培养是悬浮培养。3.权利要求1或2所述的方法，其用于高密度培养。4.权利要求3所述的方法，其中培养的细胞的培养基中的细胞密度是6
×
105个细胞/mL以上。5.权利要求1～4之任一项所述的方法，其中细胞是多能性干细胞、成体干细胞或前体细胞。6.权利要求5所述的方法，其中多能性干细胞是iPS细胞。7.权利要求1～4之任一项所述的方法，其中细胞是来源于iPS细胞的细胞。8.细胞培养用培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：小川晋平，樋口拓哉，风吕光俊平，西山惠，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：