一种幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法，该检测试剂包括连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液和量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液；其中，幽门螺杆菌抗原为Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原。基于该检测试剂的检测方法操作简便，荧光稳定且荧光时间长，利于观察；可以将幽门螺杆菌的三种抗体在同一试剂瓶完成鉴定，而且检测的准确率可以达到99％以上，甚至保持在100％，且重复率小于6％。且重复率小于6％。且重复率小于6％。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，简写为HP)是目前所知能够在人胃中长期生存的唯一细菌。幽门螺杆菌感染途径主要是口口传播和粪口传播，如咀嚼喂食、亲吻、共餐、食物污染等，因此感染人数众多。感染后诱发疾病众多，不但诱发胃部相关疾病(胃酸、胃胀、胃痛、胃炎、胃溃疡等)，还会与胃部以外的疾病有关(缺铁性贫血、偏头痛、脑梗死、荨麻疹等)。幽门螺杆菌在中国的感染率高，根除幽门螺杆菌是治疗消化性溃疡、胃癌预防的可行措施。幽门螺杆菌感染患者部分会出现相关胃部疾病的症状，但是还有部分患者不会出现明显的症状，只有经过检测才能发现。
[0003]当前，根据幽门螺杆菌分泌毒素的情况不同，可以分为Ⅰ型和Ⅱ型，其中，Ⅰ型：幽门螺杆菌菌株能产生VacA和CagA，致使出现广泛的组织炎症，易引发胃炎及溃疡；Ⅱ型：即CagA和VacA阴性株不产生毒力因子VacA和CagA，此类幽门螺杆菌菌株毒性较小，感染后不表现症状或只引起轻度的慢性浅表性胃炎。基于幽门螺杆菌不同的分型结果，可以决定是否对感染者进行根除治疗，能够使部分Ⅱ型感染者免于根除治疗，免受抗生素的副作用。
[0004]综上所述，需要一种稳定性好、操作简单、检测结果准确的幽门螺杆菌分型的检测试剂或检测方法。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法，本专利技术是基于磁性微球连接幽门螺杆菌抗原溶液和量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液组成的检测试剂，然后利用双抗夹心(抗原
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抗体
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抗原)检测的方法捕捉后使用激发光照射，设置激发光谱和发射光谱检测荧光强度，进而获得待测样本的抗体浓度。该幽门螺杆菌分型检测方法操作方便、准确度高。
[0006]本专利技术的一方面提供了一种幽门螺杆菌分型检测试剂，检测试剂可以包括连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液和量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液，其中，幽门螺杆菌抗原为Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原。
[0007]本专利技术的另一方面提供了一种幽门螺杆菌分型检测方法，可以包括以下步骤：将磁性微球分别与幽门螺杆菌抗原中的Urease抗原、CagA抗原以及VacA抗原偶联后，稀释得到连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液；将粒径互不相同的同种量子点分别与幽门螺杆菌抗原中的Urease抗原、CagA抗原以及VacA抗原偶联后，稀释后得到量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液；将待测样本与连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液、量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液混合孵育，洗涤后进行荧光强度检测，以分别得到待测样本中的Urease抗体发光值、CagA抗体发光值以及VacA抗体发光值；将Urease抗体发光值带入Urease抗体主曲线，
以得Urease抗体浓度；将CagA抗体发光值带入CagA抗体主曲线，以得CagA抗体浓度；将VacA抗体发光值带入VacA抗体主曲线，以得VacA抗体浓度。
[0008]本专利技术的再一方面提供了一种幽门螺杆菌分型检测试剂盒，可以包含以上所述的幽门螺杆菌分型检测试剂。
[0009]本专利技术有益效果包括以下中的至少一项：
[0010](1)本专利技术幽门螺杆菌分型检测试剂、试剂盒及检测方法在检测过程中，仅需要将待测样本与本专利技术的检测试剂混合后经过量子点荧光检测仪器检测即可得到待检测样本中Urease抗体、CagA抗体和VacA抗体的浓度，操作简单、方便，且检测准确率可以达到99％以上，甚至保持在100％，相比于免疫层析法检测更为准确，能够精确鉴定幽门螺杆菌的类型，重复率小于6％。
[0011](2)本专利技术幽门螺杆菌检测中使用的量子点具有较强的发光稳定性，且发光时间长，利于观察。
附图说明
[0012]图1为本专利技术中待检测抗体与连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球和量子点标记的幽门螺杆菌抗原的连接示意图；
[0013]图2为本专利技术申请一实施例提供的一种幽门螺杆菌分型检测方法示意流程简图；
[0014]图3为本专利技术申请一实施例提供的一种幽门螺杆菌分型检测方法中的Urease抗体主曲线图；
[0015]图4为本专利技术申请一实施例提供的一种幽门螺杆菌分型检测方法中的CagA抗体主曲线图；
[0016]图5为本专利技术申请一实施例提供的一种幽门螺杆菌分型检测方法中的VacA抗体主曲线图。
具体实施方式
[0017]所举实施例是为了更好地对本专利技术进行说明，但并不是本专利技术的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0018]本专利技术一方面提供了一种幽门螺杆菌分型检测试剂。在本专利技术幽门螺杆菌分型检测试剂的一个示例性实施例中，检测试剂可以包括连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液和量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液；其中，幽门螺杆菌抗原为Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原。连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液与量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液组合使用。如图1所示，检测试剂在检测抗体时，量子点标记的幽门螺杆菌抗原和连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球分别与待测样本中的抗体相连，形成量子点标记的幽门螺杆菌抗原
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抗体
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连接磁性微球的幽门螺杆菌抗原的双抗原夹心检测抗体的结构。
[0019]以上，连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液可以是分别将磁性微球与Urease抗原连接、磁性微球与CagA抗原连接以及磁性微球与VacA抗原连接后再混合制得。
[0020]量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液可以是通过将量子点分别与Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原混合后，再将量子点标记的Urease抗原、量子点标记的CagA抗原和量子点
标记的VacA抗原混合制得。
[0021]具体来讲，本专利技术使用量子点进行标记发光，较现有使用化学荧光物质标记发光进行幽门螺杆菌的检测，使用量子点标记发光稳定性更好，荧光时间存在更长，更有利于检测；而且本专利技术较现有使用免疫层析法检测幽门螺杆菌，检测结果更加准确，准确率可以达到99％以上，甚至保持在100％；除此之外，量子点成本低，价格便宜，从而本专利技术的检测试剂的成本也更低。
[0022]具体地，量子点具有很好的光稳定性，显著的荧光强度以及良好的生物相容性，且发射光谱与激发光谱不重叠，荧光强度比最常用的有机荧光材料“罗丹明6G”高20倍，稳定性是“罗丹明6G”的100倍以上，因此，量子点可以对标记的物体进行长时间的观察；另外，量子点具有较大的斯托克斯位移，可以避免发射光谱与激发光谱的重叠，有利于荧光光谱信号的检测；再者量子点的荧光寿命长，具有直接带隙的量子点的荧光寿命可持续数十纳秒(20ns～50ns)，在光激发情况下，在大多数的自发荧光已经衰变下，量子点的荧光仍然存在，此本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，包括连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液和量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液；其中，幽门螺杆菌抗原为Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原。2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，磁性微球包被亲和素后通过生物素与幽门螺杆菌抗原连接；或磁性微球通过活性基团与幽门螺杆菌抗原连接。3.根据权利要求2所述的幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，亲和素为链霉亲和素，活性基团为
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NH2、
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OH、
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COOH、
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FITC、
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NHS和
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Tosyl中的任意一种。4.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液为粒径互不相同的同种量子点分别标记的幽门螺杆菌Urease抗原、CagA抗原和VacA抗原的溶液；量子点为CdSe、CdTe、CdS、ZnSe、InP、InAs以及ZnS或CdS包覆的CdSe中的任意一种。5.根据权利要求1至4中任意一项所述的幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，磁性微球的粒径为1μm～3μm；磁性微球为纳米级Fe2O3与有机高分子材料复合后的微米级磁性微球，或Fe3O4磁性粒子与有机高分子材料复合后的微米级磁性微球。6.根据权利要求1至4中任意一项所述的幽门螺杆菌分型检测试剂，其特征在于，连接幽门螺杆菌抗原的磁性微球溶液中被连接的幽门螺杆菌抗原的浓度为50μg/L～1000μg/L；量子点标记的幽门螺杆菌抗原溶液中被量子点标记的幽门螺杆菌抗原的浓度为50μg/L～100...

【专利技术属性】
技术研发人员：左云国，钟雨芹，张巧凤，孙婵，王瑷，
申请(专利权)人：重庆新赛亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：