一种促卵泡生成素检测试剂盒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种促卵泡生成素检测试剂盒及其制备方法与应用，属于医疗器械生物类免疫体外诊断技术领域。本发明专利技术通过特制的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，稳定性良好、效期可至一年以上，检测灵敏度高，特异性能好、变异小，在临床研究中与国外进口试剂的符合相关性高达95％以上，且费用仅为其1/5。5。5。

【技术实现步骤摘要】
一种促卵泡生成素检测试剂盒及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于医疗器械生物类免疫体外诊断
，具体涉及一种促卵泡生成素检测试剂盒及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]促卵泡生成素(Follicle Stimulating Hormone，FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白激素，是垂体分泌的促性腺激素之一，主要作用为促进卵泡成熟。人促卵泡生成素促进卵泡颗粒层细胞增生分化，促进整个卵巢长大。作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。促性腺素释放激素(GnRH)由下丘脑产生，控制着垂体前叶中FSH的释放。像其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一样，FSH是由α和β亚基组成的。这类激素的α亚基的结构是很相似的，因此，这些激素的生物学和免疫学特性的区别取决于其独特的β亚基。正常人血清FSH基础值为5～10IU/L。
[0003]促卵泡生成素(Follicle Stimulating Hormone，FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白激素，是垂体分泌的促性腺激素之一，主要作用为促进卵泡成熟。人促卵泡生成素促进卵泡颗粒层细胞增生分化，促进整个卵巢长大。作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。促性腺素释放激素(GnRH)由下丘脑产生，控制着垂体前叶中FSH的释放。像其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一样，FSH是由α和β亚基组成的。这类激素的α亚基的结构是很相似的，因此，这些激素的生物学和免疫学特性的区别取决于其独特的β亚基。正常人血清FSH基础值为5～10IU/L。
[0004]FSH有促进女性卵泡生成、成熟，使颗粒细胞增生并分泌卵泡液，与促黄体生成激素(LH)协同促进排卵的功能。女性的FSH分泌具有明显的周期性，月经周期FSH呈有规律的升高和降低，血中FSH浓度及每日由尿排泄的FSH的量随周期变化而变化。在绝经或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，血和尿中FSH排出量增加，FSH的在人体中含量会升高。其升高和降低是由雌激素通过负反馈进行调控。
[0005]FSH在男性体内能够调控生精小管的发育以及保持生精作用，男性FSH分泌无明显周期性，但在50岁以后略有升高。男性在睾丸衰退和克兰费尔特氏综合症的初期会出现体内FSH升高。另外，FSH的浓度在饥饿、肾衰竭、甲状腺机能亢进和肝硬化时也会有所提高。
[0006]在国内，促卵泡生成素(FSH)检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产促卵泡生成素(FSH)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，也仅停留在96孔微孔板式技术水平上。该技术灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。
[0007]因此，如何提供一种对促卵泡生成素(FSH)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术公开了一种促卵泡生成素检测试剂盒及其制备方法与应用。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0010]一种促卵泡生成素检测试剂盒，包括：校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；
[0011]所述抗试剂包括：异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体、碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体和Tris盐缓冲液；所述Tris盐缓冲液包括：0.1
‑
0.5mM的Tris盐、质量分数0.01％
‑
0.05％的四环素、质量分数1％
‑
5％的绵羊血清、质量分数3％
‑
10％的新生牛血清和质量分数1％
‑
5％的马血清。
[0012]所述校准品、质控品是按照以下方法配制得到的：采用含蛋白的缓冲液溶解FSH抗原，并用含新生牛血清的缓冲液稀释成不同浓度点，通过定标得到校准品、质控品；
[0013]所述磁微粒试剂是抗异硫氰酸荧光素抗体与磁微粒偶联制得，通过抗异硫氰酸荧光素抗体与异硫氰酸荧光素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物固定在磁微粒上；
[0014]所述发光底物为ALPS发光底物；
[0015]所述发光底物为经过缓冲液稀释的ALPS发光底物；
[0016]优选的，所述异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体的制备方法为：
[0017]配制浓度为1.0
‑
5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素，将配置的异硫氰酸荧光素和促卵泡生成素抗体混合，室温下搅拌1
‑
2小时后，使用pH＝8
‑
9缓冲液进行平衡、洗脱得异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体；
[0018]优选的，所述洗脱步骤为通过凝胶层析分离；
[0019]优选的，所述碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体的制备方法为：
[0020]配制浓度为1.0
‑
5.0mg/mL的碱性磷酸酶，将配置的碱性磷酸酶加入促卵泡生成素抗体中混合，室温下搅拌4
‑
5小时后，使用pH＝8
‑
9缓冲液进行平衡、洗脱得碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体；
[0021]优选的，所述Tris盐缓冲液还包括浓度为0.01％～0.5％表面活性剂，所述表面活性剂为Tween 20、TritonX
‑
100、Bronidox中的一种或多种；
[0022]优选的，所述磁微粒试剂的制备方法为：
[0023]将磁珠浓缩液充分混匀，在充分混匀后置于磁场15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，加入羧基磁珠体积5倍的磷酸缓冲液，混合20
‑
30min后，置磁场中待磁珠全部沉降后吸去上清，重复清洗步骤三遍，将羧基磁珠溶液定容到10
‑
50mg/mL；
[0024]按照磁珠：抗体＝100：1质量比，在磁珠中加入处理后的抗体，保持混匀状态下2
‑
8℃反应18小时，使用磷酸缓冲液清洗三遍，定容至10mg/mL，2～8℃保存待用，制得磁微粒试剂；
[0025]优选的，所述抗体为羊抗异硫氰酸荧光素抗体；
[0026]优选的，其特征在于，所述发光底物的制备方法如下：
[0027]按1：4
‑
1：10的比例将ALPS发光底物稀释至下列组分的缓冲液中：Tris 0.1
‑
1M，亚硫酸钠0.1％，SDS 1％，光泽精0.3％，牛血清白蛋白0.15％，pH9.5。
[0028]优选的，其特征在于，还包括清洗液；
[0029]8.一种试剂盒定量检测促卵泡生成素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0030]分别加15μL促卵泡生成素校准品、质控品、待测样本至对应试管底部；
[0031]加60μL抗试剂至每一试管中；
[0032]将试剂后，置37℃水浴15分钟；
[0033]加30μL磁微粒试剂至每一试管中；
[0034]混匀后，置37℃水浴5分钟；
[0035]磁分离沉淀后，弃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促卵泡生成素检测试剂盒，其特征在于，包括：校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述抗试剂包括：异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体、碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体和Tris盐缓冲液；所述Tris盐缓冲液包括：0.1
‑
0.5mM的Tris盐、质量分数0.01％
‑
0.05％的四环素、质量分数1％
‑
5％的绵羊血清、质量分数3％
‑
10％的新生牛血清和质量分数1％
‑
5％的马血清。2.如权利要求1所述的促卵泡生成素检测试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体的制备方法为：配制浓度为1.0
‑
5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素，将配置的异硫氰酸荧光素和促卵泡生成素抗体混合，室温下搅拌1
‑
2小时后，使用pH＝8
‑
9缓冲液进行平衡、洗脱得异硫氰酸荧光素标记的FSH包被抗体。3.如权利要求1所述的促卵泡生成素检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体的制备方法为：配制浓度为1.0
‑
5.0mg/mL的碱性磷酸酶，将配置的碱性磷酸酶加入促卵泡生成素抗体中混合，室温下搅拌4
‑
5小时后，使用pH＝8
‑
9缓冲液进行平衡、洗脱得碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体；优选的，所述洗脱步骤为通过凝胶层析分离。4.如权利要求1所述的促卵泡生成素检测试剂盒，其特征在于，所述Tris盐缓冲液还包括浓度为0.01％～0.5％表面活性剂，所述表面活性剂为Tween 20、TritonX
‑
100、Bronidox中的一种或多种...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘振鹏，刘振世，夏振伟，
申请(专利权)人：江苏泽成生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：