用于羟基化氨基酸的单体蛋白质和产品制造技术

本文的公开内容提供了一种单体脯氨酰4

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于羟基化氨基酸的单体蛋白质和产品
[0001]对以电子方式递交的序列表的引用
[0002]以电子方式提交的序列(名称：4431
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064PC01_SL_ST25.txt；大小：82,152字节；创建日期：2021年2月10日)的内容全文以引用方式并入本文。


[0003]本文描述了单体脯氨酰4
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羟化酶蛋白质及其在发酵中的用途、用于产生所述蛋白质的方法以及用于蛋白质的体外和体内羟基化的方法。

技术介绍

[0004]存在使用微生物来制备用于商业应用的化合物的整个行业。微生物通常用制备这些化合物所必需的DNA来进行工程改造。这些微生物的示例包括酵母和细菌。所制备的化合物包括药物、芳香剂、风味剂、蛋白质等。
[0005]经工程改造的蛋白质是通过蛋白质工程、诱变和蛋白质进化产生的。在药物开发中产生经工程改造的蛋白质的一个目的是提高它们在各种反应条件下的活性。

技术实现思路

[0006]在一些实施方案中，本公开提供了一种酵母宿主细胞，所述酵母宿主细胞包含重组单体脯氨酰4
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羟化酶。在一些实施方案中，所述单体脯氨酰4
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羟化酶可以是分泌的。在某些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自病毒、藻类或植物。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自拟菌病毒。在一个实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自莱茵衣藻(C.reinhardtii)。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自绿草履虫小球藻(Paramecium bursaria Chlorella)病毒
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1。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以与选自由以下项组成的组的脯氨酰4
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羟化酶具有至少80％同一性：SEQ ID NO:2、3、6、7和8。在某些实施方案中，所述酵母可以是毕赤酵母属(Pichia)。
[0007]在一些实施方案中，所述酵母宿主细胞还可以包含待羟基化的第二蛋白质。在某些实施方案中，所述第二蛋白质可以选自由以下项组成的组：胶原、重组胶原和胶原样蛋白质。
[0008]在一些实施方案中，本公开提供了一种微生物，所述微生物包含重组单体脯氨酰4
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羟化酶，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自藻类或植物。在某些实施方案中，所述单体脯氨酰4
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羟化酶可以是分泌的。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自拟南芥。在某些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以来自莱茵衣藻。在一些实施方案中，所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶可以与选自由以下项组成的组的脯氨酰4
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羟化酶具有至少80％同一性：SEQ ID NO:7和8。
[0009]在一些实施方案中，所述微生物可以是酵母或细菌。在一些实施方案中，所述微生
物可以是大肠杆菌(E.coli)。在其他实施方案中，所述微生物可以是毕赤酵母属。
[0010]在一些实施方案中，所述微生物还可以包含待羟基化的第二蛋白质。在一些实施方案中，所述第二蛋白质可以选自由以下项组成的组：胶原、重组胶原和胶原样蛋白质。
[0011]在一些实施方案中，本公开提供了一种产生重组单体脯氨酰4
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羟化酶的方法，所述方法包括从本文公开的酵母宿主细胞中纯化所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶。
[0012]在一些实施方案中，本公开提供了一种产生重组单体脯氨酰4
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羟化酶的方法，所述方法包括从本文公开的微生物中纯化所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶。
[0013]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的体外方法，所述方法包括：裂解包含待羟基化的蛋白质的微生物以产生裂解物；将特定浓度的单体脯氨酰4
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羟化酶添加到所述裂解物中；以及在促进所述蛋白质被所述单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述裂解物和所述单体脯氨酰4
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羟化酶。
[0014]在某些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的体外方法，所述方法包括：裂解包含待羟基化的蛋白质的第一微生物以产生裂解物；将特定浓度的单体脯氨酰4
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羟化酶添加到所述裂解物中；以及在促进所述蛋白质被所述单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述裂解物和所述单体脯氨酰4
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羟化酶。
[0015]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的体外方法，所述方法包括：将特定浓度的从本文公开的酵母宿主细胞中纯化的单体脯氨酰4
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羟化酶添加到反应混合物中；将特定浓度的待羟基化的蛋白质添加到所述反应混合物中；以及在促进所述蛋白质被所述单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述反应混合物。
[0016]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的体外方法，所述方法包括：将特定浓度的从本文公开的微生物中纯化的单体脯氨酰4
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羟化酶添加到反应混合物中；将特定浓度的待羟基化的蛋白质添加到所述反应混合物中；以及在促进所述蛋白质被所述单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述反应混合物。
[0017]在某些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的离体方法，所述方法包括：裂解本文公开的微生物以产生裂解物；在促进所述蛋白质被单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述裂解物和待羟基化的蛋白质。
[0018]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的离体方法，所述方法包括：裂解酵母宿主细胞以产生裂解物；在促进所述裂解物中的蛋白质被单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述裂解物和待羟基化的蛋白质。
[0019]在某些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的离体方法，所述方法包括：裂解包含单体脯氨酰4
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羟化酶的微生物以产生第一裂解物；裂解包含待羟基化的蛋白质的第二微生物以产生第二裂解物；以及在促进所述蛋白质被所述单体脯氨酰4
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羟化酶羟基化的反应条件下温育所述第一裂解物和所述第二裂解物。
[0020]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于羟基化蛋白质的离体方法，所述方法包括：裂解包含重组单体脯氨酰4
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羟化酶的酵母宿主细胞以产生酵母宿主细胞裂解物；裂解包含待羟基化的蛋白质的微生物以产生含蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种酵母宿主细胞，所述酵母宿主细胞包含重组单体脯氨酰4
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羟化酶。2.根据权利要求1所述的酵母宿主细胞，其中所述单体脯氨酰4
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羟化酶是分泌的。3.根据权利要求1或权利要求2所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自病毒、藻类或植物。4.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自拟菌病毒。5.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自拟南芥。6.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自莱茵衣藻。7.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自绿草履虫小球藻病毒
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1。8.根据权利要求1至7中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶与选自由以下项组成的组的脯氨酰4
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羟化酶具有至少80％同一性：SEQ ID NO:2、3、6、7和8。9.根据权利要求1至8中任一项所述的酵母宿主细胞，其中所述酵母是毕赤酵母属。10.根据权利要求1至9中任一项所述的酵母宿主细胞，所述酵母宿主细胞还包含待羟基化的第二蛋白质。11.根据权利要求10所述的酵母宿主细胞，其中所述第二蛋白质选自由以下项组成的组：胶原、重组胶原和胶原样蛋白质。12.一种微生物，所述微生物包含重组单体脯氨酰4
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羟化酶，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自藻类或植物。13.根据权利要求12所述的微生物，其中所述单体脯氨酰4
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羟化酶是分泌的。14.根据权利要求12或权利要求13所述的微生物，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自拟南芥。15.根据权利要求12或权利要求13所述的微生物，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶来自莱茵衣藻。16.根据权利要求12至15中任一项所述的微生物，其中所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶与选自由以下项组成的组的脯氨酰4
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羟化酶具有至少80％同一性：SEQ ID NO:7和8。17.根据权利要求12至16中任一项所述的微生物，其中所述微生物是酵母或细菌。18.根据权利要求17所述的微生物，其中所述微生物是大肠杆菌。19.根据权利要求17所述的微生物，其中所述微生物是毕赤酵母属。20.根据权利要求12至19中任一项所述的微生物，所述微生物还包含待羟基化的第二蛋白质。21.根据权利要求20所述的微生物，其中所述第二蛋白质选自由以下项组成的组：胶原、重组胶原和胶原样蛋白质。22.一种产生重组单体脯氨酰4
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羟化酶的方法，所述方法包括从根据权利要求1至11中任一项所述的酵母宿主细胞中纯化所述重组单体脯氨酰4
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羟化酶。23.一种产生重组单体脯氨酰4
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羟化酶的方法，所述方法包括从...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：现代牧场股份有限公司，
类型：发明
国别省市：